Geri Dön

Zeytin (Olea europaea L.) lipaz enziminin rekombinantüretimi ve analizi

Recombinant production and analysis of olive (Olea europaea L.) lipase enzyme

PDF İndir

  1. Tez No: 754505
  2. Yazar: SÜMEYYE PINAR ÖZTEKİN
  3. Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ ŞENAY VURAL KORKUT, ÖĞR. GÖR. MUNİSE YURTSEVER
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2022
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Yıldız Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 83

Özet

Lipazlar, triaçilgliserollerin, yağ asitleri ve gliserole hidrolize edilmesini katalizleyen hidrolazlardır. Aynı zamanda esterifikasyon, ara esterifikasyon, aminoliz, transesterifikasyon, asidoliz ve alkoliz gibi çok çeşitli reaksiyonlarda da görev alan enzimlerdir. Organik bir ortamda lipazlar esterifikasyon, transesterifikasyon ve interesterifikasyon reaksiyonlarını, su miktarının az olduğu ortamlarda ise sentetik reaksiyonları katalize edebilme özelliğine sahiptir. Lipazların katalize ettikleri reaksiyonların çeşitliliğine bağlı olarak sayısız endüstriyel ve biyoteknolojik kullanımı mevcuttur. Lipazlar bölge seçicilik ve enantioselektivite özellikleri sayesinde lipit biyoteknolojisinde çok yönlü katalizörler olarak kabul edilirler. Çok yönlü enzimler olmaları sebebiyle kozmetik, gıda, biyodizel üretimi, tarım gibi pek çok endüstriyel üretim alanında tercih edilirler. Lipazlar bitkisel, hayvansal ve mikrobiyal kaynaklardan elde edilebilir. En çok tercih edilen kaynaklar hayvansal ve mikrobiyal kökenli olsa da, düşük maliyet, kolay kabul edilebilirlik ve kısmi saflaştırma ile biyokatalizör olarak doğrudan uygulamalarda kullanılabilirlik gibi avantajlarıyla bitkisel kaynaklara olan ilgi artmaktadır. Pichia pastoris, hem araştırmada hem de endüstride çok sık kullanılan metilotrofik bir konakçı hücredir. Pichia pastoris hücreleri, kolay, düşük maliyetli bir besi yeri ortamında hızlı şekilde büyüyebilme, protein üretim şartlarının kolayca kontrol edilebilmesi ve genetik olarak kolay manipüle edilebilmesi gibi özelliklerinden ötürü heterolog protein üretiminde oldukça avantajlıdır. Bu projede laboratuvarımızda daha önceki bir çalışmada tam uzunlukta cDNA'sı elde edilen zeytin yaprak lipazının kodon optimizasyonu yapılarak Pichia pastoris'te heterolog ekspresyonu hedeflenmiştir. Bu amaçla lipaz nükleotid dizisi çevrimiçi kodon optimizasyon aracı ile Pichia kodon kullanımına göre değiştirilip zeytin yaprak lipazının kendine ait sinyal dizisi de eklenerek ekspresyon vektörüne aktarılmıştır. Ekspresyon şartları optimize edilerek denenen çalışmalarda, rekombinant zeytin yaprak lipazının pH 8-9 aralığında ve 35⁰C'de aktivite gösterdiği belirlenmiştir. En yüksek aktivitenin görüldüğü kültür şartları ise 6 saatlik önkültür basamağı ile 96 saat, 28⁰C'dir.

Özet (Çeviri)

Lipases are hydrolases that catalyze the hydrolysis of triacylglycerols to fatty acids and glycerol. In an organic medium, lipases catalyze esterification, transesterification, and interesterification reactions. It also can catalyze synthetic reactions in less aqueous environments. The different reactions they catalyze include hydrolysis, esterification, intermediate esterification, aminolysis, transesterification, acidolysis, and alcoholysis. Lipases have numerous industrial and biotechnological applications based on the variety of reactions they catalyze. Lipases are considered versatile catalysts in lipid biotechnology due to their regioselectivity and enantioselectivity. Thanks to these properties, they are used in many industrial production areas such as cosmetics, food, biodiesel production, and agriculture. Lipases are mostly derived from plant, animal, and microbial sources. Generally, the most preferred sources are animal and microbial sources. There is an increasing interest in plant sources with advantages such as low cost, easy acceptability, and direct application as biocatalysts by partial purification. Pichia pastoris is a methylotrophic host cell that is widely used in both academia and industry. Pichia pastoris cells are highly advantageous in the production of heterologous proteins due to their ability to grow rapidly in an easy, low-cost medium, to easily control protein production conditions, and to be easily manipulated genetically. In this study, we aimed to heterologously express the codon-optimized olive leaf lipase, whose full-length cDNA was obtained in a previous study in our laboratory, in Pichia pastoris. For this purpose, the lipase nucleotide sequence was changed according to the Pichia codon usage with the online codon optimization tool, and the native signal sequence of the olive leaf lipase was added and transferred to the expression vector. In the expression optimization studies, it was determined that the recombinant olive leaf lipase was active in the pH range of 8-9 and at 35⁰C. The highest enzyme activity was observed in 96-hour-culture following a 6-hour preculture step at 28⁰C.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    413390

    Trakya bölgesindeki zeytin ağaçlarında görülen abiyotik hastalıkların belirlenmesi ve bazı virüs hastalıklarının DAS-ELISA ile tanılanması

    Determinations of abiotic diseases on olive trees and identification of some virus diseases by DAS-ELISA in the Trakya region of Turkey

    ZEHRA VURANKAYA

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    ZiraatNamık Kemal Üniversitesi

    Bitki Koruma Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. AHMET ÇITIR

  2. Tez No

    882624

    Farklı ultrasonik işlem koşullarının zeytin ekstraktlarındaki bazı sekoiridoid miktarları üzerine etkisinin yanıt yüzeyi ve yapay sinir ağları yöntemiyle optimizasyonu

    Optimizing the effects of different ultrasound parameters on some secoiridoids of olive extracts using response surface and artifical neural network methodologies

    AYŞE NUR AKTAY

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    Gıda MühendisliğiEskişehir Osmangazi Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ONUR KETENOĞLU

  3. Tez No

    243862

    Olea europaea cv Gemlik (zeytin) bitkisine ait cDNA kütüphanesinin hazırlanması ve sonuçların bioinformatik analiz yöntemleri ile değerlendirilmesi

    Construction of cDNA library from Olea europaea cv Gemlik (olive) and evaluation of the results by bioinformatic analysis methods

    FATMA ORUÇ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2009

    BiyomühendislikYıldız Teknik Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. NEHİR ÖZDEMİR

  4. Tez No

    424134

    Zeytin (Olea europaea L.) tokoferol biyosentezinde rol alan genlerin karakterizasyonu

    Characterization of genes involved in olive (Olea europaea L.) tocopherol synthesis

    FATİH SEZER

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    BiyolojiÇanakkale Onsekiz Mart Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. KEMAL MELİK TAŞKIN

  5. Tez No

    334422

    Türkiye'nin yabani zeytin (Olea europaea subsp. europaea var. sylvestris) populasyonlarındaki genetik çeşitliliğin ITS-1 belirteçleri yardımıyla belirlenmesi ve yaygın olarak kullanılan kültür zeytini (O. europaea subsp. europaea var. europaea) çeşitlerinin bu belirteçlerle karakterizasyonu

    Determination of genetic variation in wild olive (Olea europaea L. subsp. europaea var. sylvestris) populations and genetic characterization of commonly used cultivated olives (O. europaea L. subsp. europaea var. europaea) of Turkey by ITS-1 markers

    ELÇİN ÇAĞATAY

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    BiyoistatistikMuğla Sıtkı Koçman Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. BELGİN GÖÇMEN TAŞKIN

Geri Dön