Zeytin (Olea europaea L.) lipaz enziminin rekombinantüretimi ve analizi
Recombinant production and analysis of olive (Olea europaea L.) lipase enzyme
- Tez No: 754505
- Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ ŞENAY VURAL KORKUT, ÖĞR. GÖR. MUNİSE YURTSEVER
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2022
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Yıldız Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 83
Özet
Lipazlar, triaçilgliserollerin, yağ asitleri ve gliserole hidrolize edilmesini katalizleyen hidrolazlardır. Aynı zamanda esterifikasyon, ara esterifikasyon, aminoliz, transesterifikasyon, asidoliz ve alkoliz gibi çok çeşitli reaksiyonlarda da görev alan enzimlerdir. Organik bir ortamda lipazlar esterifikasyon, transesterifikasyon ve interesterifikasyon reaksiyonlarını, su miktarının az olduğu ortamlarda ise sentetik reaksiyonları katalize edebilme özelliğine sahiptir. Lipazların katalize ettikleri reaksiyonların çeşitliliğine bağlı olarak sayısız endüstriyel ve biyoteknolojik kullanımı mevcuttur. Lipazlar bölge seçicilik ve enantioselektivite özellikleri sayesinde lipit biyoteknolojisinde çok yönlü katalizörler olarak kabul edilirler. Çok yönlü enzimler olmaları sebebiyle kozmetik, gıda, biyodizel üretimi, tarım gibi pek çok endüstriyel üretim alanında tercih edilirler. Lipazlar bitkisel, hayvansal ve mikrobiyal kaynaklardan elde edilebilir. En çok tercih edilen kaynaklar hayvansal ve mikrobiyal kökenli olsa da, düşük maliyet, kolay kabul edilebilirlik ve kısmi saflaştırma ile biyokatalizör olarak doğrudan uygulamalarda kullanılabilirlik gibi avantajlarıyla bitkisel kaynaklara olan ilgi artmaktadır. Pichia pastoris, hem araştırmada hem de endüstride çok sık kullanılan metilotrofik bir konakçı hücredir. Pichia pastoris hücreleri, kolay, düşük maliyetli bir besi yeri ortamında hızlı şekilde büyüyebilme, protein üretim şartlarının kolayca kontrol edilebilmesi ve genetik olarak kolay manipüle edilebilmesi gibi özelliklerinden ötürü heterolog protein üretiminde oldukça avantajlıdır. Bu projede laboratuvarımızda daha önceki bir çalışmada tam uzunlukta cDNA'sı elde edilen zeytin yaprak lipazının kodon optimizasyonu yapılarak Pichia pastoris'te heterolog ekspresyonu hedeflenmiştir. Bu amaçla lipaz nükleotid dizisi çevrimiçi kodon optimizasyon aracı ile Pichia kodon kullanımına göre değiştirilip zeytin yaprak lipazının kendine ait sinyal dizisi de eklenerek ekspresyon vektörüne aktarılmıştır. Ekspresyon şartları optimize edilerek denenen çalışmalarda, rekombinant zeytin yaprak lipazının pH 8-9 aralığında ve 35⁰C'de aktivite gösterdiği belirlenmiştir. En yüksek aktivitenin görüldüğü kültür şartları ise 6 saatlik önkültür basamağı ile 96 saat, 28⁰C'dir.
Özet (Çeviri)
Lipases are hydrolases that catalyze the hydrolysis of triacylglycerols to fatty acids and glycerol. In an organic medium, lipases catalyze esterification, transesterification, and interesterification reactions. It also can catalyze synthetic reactions in less aqueous environments. The different reactions they catalyze include hydrolysis, esterification, intermediate esterification, aminolysis, transesterification, acidolysis, and alcoholysis. Lipases have numerous industrial and biotechnological applications based on the variety of reactions they catalyze. Lipases are considered versatile catalysts in lipid biotechnology due to their regioselectivity and enantioselectivity. Thanks to these properties, they are used in many industrial production areas such as cosmetics, food, biodiesel production, and agriculture. Lipases are mostly derived from plant, animal, and microbial sources. Generally, the most preferred sources are animal and microbial sources. There is an increasing interest in plant sources with advantages such as low cost, easy acceptability, and direct application as biocatalysts by partial purification. Pichia pastoris is a methylotrophic host cell that is widely used in both academia and industry. Pichia pastoris cells are highly advantageous in the production of heterologous proteins due to their ability to grow rapidly in an easy, low-cost medium, to easily control protein production conditions, and to be easily manipulated genetically. In this study, we aimed to heterologously express the codon-optimized olive leaf lipase, whose full-length cDNA was obtained in a previous study in our laboratory, in Pichia pastoris. For this purpose, the lipase nucleotide sequence was changed according to the Pichia codon usage with the online codon optimization tool, and the native signal sequence of the olive leaf lipase was added and transferred to the expression vector. In the expression optimization studies, it was determined that the recombinant olive leaf lipase was active in the pH range of 8-9 and at 35⁰C. The highest enzyme activity was observed in 96-hour-culture following a 6-hour preculture step at 28⁰C.
Benzer Tezler
- Zeytin (Olea europaea L.) dal kanseri hastalık etmeni Pseudomonas savastanoi pv. savastanoi'nin kantitatif real-time membran bio-PCR ile tanısı ve epifitik popülasyonun tespiti
Identification and detection of Pseudomonas savastanoi pv. savastanoi ,the causal agent of olive knot disease and it's epiphytic population by quantitative real-time membran bio-PCR
DOĞANCAN AKTAŞ
- Glukoz-6-fosfat-1-epimeraz ve mikrotübül ilişkili protein genlerinin biyoinformatik analizi
Bioinformatic analysis of protein genes related to glucose-6-phosphate-1-epimerase and microtubula
SUNA SANCAR
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
BiyolojiBalıkesir ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÜLENDAM TÜMEN
- Zeytin aldolaz ve ökaryotik translasyon başlatma faktörü 4e geninin moleküler karakterizasyonu
Molecular characterization of olive aldolase and eukaryotic translation initiation factor 4e gene
SÜMEYYE ALTUNOK
- Zeytin Açil-KoA bağlanma proteininin moleküler karakterizasyonu
Molecular characterization of olive Açil-KoA binding protein
BÜŞRA BAŞ
- Marmara bölgesinde yetiştirilen bazı zeytin (Olea europaea L.) kültivarlarının moleküler sistematik analizi
Molecular systematic analysis of some olive cultivars (Olea europaea L.) grown in Marmara region
SABİHA PARLAK
Yüksek Lisans
Türkçe
2007
BiyolojiBalıkesir ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. FATİH COŞKUN