Lipit birikiminde rol alan seipin proteinin kolesterol ile indüklenen yağlı karaciğer modelinde endoplazmik retikulum stres ve otofaji üzerine etkisi
Effect of seipin involved in lipid accumulation on endopasmic reticulum stress and autophagy in cholesterol induced fatty liver model
- Tez No: 784153
- Danışmanlar: PROF. DR. NESRİN KARTAL ÖZER
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Endokrinoloji ve Metabolizma Hastalıkları, Biochemistry, Endocrinology and Metabolic Diseases
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2023
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Marmara Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya (Tıp) Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 96
Özet
Amaç: AML12 hepatosit hücre hattında kolesterol ile indüklenen lipit birikiminde Seipin proteinin ER stres ve lipofaji üzerine etkisinin detaylı araştırılmasıdır. Kolesterol ile indüklediğimiz yağlı karaciğer hastalığı in vivo modelinde lipit birikimi, inflammasyon ve Seipin protein düzeylerinin belirlenmesidir. Gereç ve Yöntem: In vivo deneylerde 2-4 aylık erkek albino tavşanlar kontrol (normal yem ile beslenen) ve kolesterol (%2 kolesterol içeren yem ile beslenen) olmak üzere iki gruba ayrıldı. Elde edilen gruplardan sekiz haftanın sonunda kan örnekleri ile karaciğer dokuları toplandı ve dokular makroskopik olarak incelenirken TGF-β, IL1β mRNA ekspresyonları qPCR tekniği ile Seipin protein düzeyleri ise immunblotlama tekniği ile belirlendi. Çalışmamızın ikinci aşamasında hepatosit hücrelerine Seipin siRNA transfeksiyonu takiben Lipozom-Kolesterol uygulanması gerçekleştirildi ve qPCR tekniği ile ER stres ile ilişkili GRP78, GRP94 ve ATF4 belirteçlerinin mRNA seviyeleri, Bodipy boyama ile LD sayı/boyut farklılıkları ve immünfloresans yöntemi ile LD-LAMP1 kolokalizasyonu belirlendi Bulgular: Kolesterol ile beslenen tavşanların karaciğer dokularında nodüler yapılar gözlenirken lipit birikiminin, IL1 β mRNA ve Seipin protein seviyelerinin arttığı TGF-β mRNA seviyelerinin azaldığı ise tespit edildi. Bununla birlikte, AML12 hücrelerine 8 saat boyunca Lipozom-Kolesterol uygulamasının kolestrol brikimi, Seipin protein aktivasyonu ve büyük LD sayısını arttırdığı gözlendi. Seipin siRNA uygulamasının hem taşıyıcı hemde Lipozom-Kolesterol grubunda büyük LD saysını ve GRP78 mRNA seviyelerini azalttığı tespit edildi. Sonuç: In vivo da yüksek kolesterolün lipit birikimine bağlı olarak inflammasyonu ve Seipin düzeylerini arttırdığı bulundu. In vitro çalışmalarımız ise hem normal koşullarda hemde yüksek kolesterol ile Seipin proteinin hepatositlerde ER strese karşı verilen ilk cevapta rolü olan GRP78 şaperon proteinin düzenlenmesinde rolü olduğunu belirledi.
Özet (Çeviri)
Objective: A detailed investigation of the effect of Seipin protein on ER stress and lipophagy in cholesterol-induced lipid accumulation in AML12 hepatocyte cell line. Determination of lipid accumulation, inflammation and Seipin protein levels in an in vivo model of cholesterol-induced fatty liver disease. Material and Methods: In the in vivo experiments, 2-4 months old male albino rabbits were divided into two groups as control (fed chow diet) and cholesterol (fed 2% cholesterol containing diet). Eight weeks later, liver tissues and blood samples were collected. The results of the effect of hypercholestrolemic diet in liver tissues were investigated macroscopically and also defined by western blotting (Seipin protein levels) and qPCR methods. (TGF-β, IL1β mRNA levels). In the second part of our study, Liposome-Cholesterol application was performed to hepatocyte cells following Seipin siRNA transfection and mRNA levels of ER stress-related GRP78, GRP94 and ATF4 markers were determined by qPCR, while LD number/size differences by Bodipy staining and LD-LAMP1 colocalization by immunofluorescence method. Results: Lipid accumulation and nodular structures were observed in the liver tissues of the rabbits fed with cholesterol, while seipin protein levels and IL1 β mRNA levels were increased and TGF-β mRNA levels were decreased. However it was observed that Lipzoom-Cholesterol application to AML12 cells for 8 h increased cholesterol accumulation, Seipin protein activation and large LD number. It was determined that Seipin siRNA application decreased the large LD number and GRP78 mRNA levels in both the vector and Liposome-Cholesterol groups. Conclusion : According to in vivo findings, high cholesterol was found to increase inflammation and Seipin levels due to lipid accumulation. However, in vitro studies were determined that both under both normal and with high cholesterol conditions, Seipin protein has the ability to regulate GRP78 chaperone protein, which has a role in the first response to ER stress in hepatocytes.
Benzer Tezler
- Egzersiz uygulanan ratlarda kas dokusu FOXOL/PGC-1α sinyal yolağı üzerine beta-kriptoksantin'in etkisi
The effect of beta-cryptoxanthin on muscle tissue FOXOL/PGC-1α signal pathway in exercised rats
BEYZA NUR TURAN
- Schizosaccharomyces pombe'de endoplazmik retikulum stresinin hücresel etkilerinin araştırılması
Investigation of cellular effects of endoplasmic reticulum stress in Schizosaccharomyces pombe
NEZAHAT GÖKÇE ÖZSAMUR
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
Genetikİstanbul ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. BEDİA PALABIYIK
- Investigation of cellular pathways in HBV associated liver fibrosis
HBV bağımlı karaciğer fibrozunda hücresel yolakların araştırılması
ŞEYMA KATRİNLİ
Doktora
İngilizce
2016
Biyolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY
- Prematür adrenarşlı olgularda inflamatuar belirteçlerin değerlendirilmesi
Evaluation of inflammatory markers in cases with premature adrenarch
GÖZDE KÖYLÜ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2021
Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıSivas Cumhuriyet ÜniversitesiÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. NURULLAH ÇELİK
- Cıva (II) iyonuna seçici, merkaptopropiyonik asit ile türevlendirilmiş kromenilyum-siyanin tabanlı yeni bir turn-on floresan sensörün geliştirilmesi
Development of a new – mercury (II) ion selective, chromenyllium-cyanine based turn-on fluorescent sensor derivatived wi̇th mercapto propionic acid
VUSLAT BASAN