Geri Dön

Identification of MRG15 (MORFL1) as a barrier to somatic cell reprogramming

Somatik hücre yeniden programlamaya engel olarak MRG15 (MORFL1) tanımlanması

  1. Tez No: 846432
  2. Yazar: ELİFSU KARTAL
  3. Danışmanlar: PROF. DR. TEVFİK TAMER ÖNDER
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Moleküler Tıp, Molecular Medicine
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2024
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Koç Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Hücresel ve Moleküler Tıp Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 89

Özet

Hücresel programlamayla somatik hücreleri uyarılmışpluripotent kök hücrelere (UPKH) dönüştürmek, OCT4, SOX2, KLF4 ve c-MYC transkripsiyon faktörlerinin ifadesi tarafından belirlenir. Ancak, programlamanın sınırlı bir başarı oranı vardır, bu da bu dönüşüme engellerin varlığını gösterir. DNA metilasyonu ve histon kuyruklarındaki translasyonel sonrası modifikasyonlar gibi epigenetik mekanizmalar, programlamayı engelleyebilir. Ön çalışmalar, SETD2, H3 lizin 36 tri- metiltransferazının hücresel programlamayı engellediğini göstermiştir. H3K36me3-okuyucu proteinler üzerinde yapılan bir CRISPR/Cas9 taraması, özellikle MRG15 ile birlikte programlama verimliliğinde umut verici sonuçlar vermiştir. Bu tezde, MRG15'in iPSC üretimindeki rolünü araştırdım. İlk olarak, SETD2 inhibitörünün hücresel programlama üzerindeki etkisini inceledim. Bu inhibitör, selektif olarak SETD2 aktivitesini engelledi, H3K36me3 seviyelerini azalttı ve SETD2 susturulmuş hücrelerinde benzer şekilde programlama verimliliğini artırdı. Sonra, MRG15 silinmiş fibroblastlar üzerinde programlama verimliliğini test ettim ve UPKH üretimini dört kat artırdığını gözlemledim. Doğal fenotip MRG15'in aşırı ifadesi, UPKH yapılmış fenotipi kurtardı ve bu da yeniden proglamanın verimliliğinin Cas9 hedef dışı olaylarından kaynaklanmadığını doğruladı. MRG15'in SETD2'nin alt akışında hücresel programlamayı engelleyen bir faktör olduğunu hipotez ettim. Ancak, MRG15 ve SETD2 susturulmuş hücrelerde, UPKH üretiminde a ek bir artış gözlemledim. Bu da MRG15'in doğrudan bir SETD2 alt akış etkileyeni olmadığını gösteriyor. Daha sonra, MRG15 silinmiş UPKH'leri oluşturdum ve OCT4, SOX2, NANOG, ve SSEA4 pluripotensi işaretleyicilerini inceledim. Sonuçlar, UPKH bakımının MRG15'e ihtiyaç duymadığını gösterdi. MRG15 silinmiş fibroblast örnekleri ile RNA sekanslama yapıldı ve gen seti zenginleştirme analizi, MRG15 silinmiş örneklerinin pluripotent gen setlerinde önemli ölçüde zenginleştiğini gösterdi. Ayrıca, MRG15 silinmiş, hücre döngüsü ile ilgili gen seti ifadesini yükseltti, bu da MRG15 silinmiş UPKH üretimini daha yüksek çoğalma aracılığıyla artırdığını gösterebilir. MRG15 aynı zamanda SIN3B/ HDAC2 baskılayıcı histon deasetilasyon kompleksinde bulunabilir, bu nedenle son bir dizi deneyde MRG15 silinmiş hücrelerde H3K14 asetilasyonunda dört kat artışa neden olduğunu gözlemledim. Bu sonuçlar, MRG15 ve SETD2'nin, şu anda zayıf olan UPKH üretim verimliliğini artırmak için ayrı mekanizmalarla hücresel programlamaya engel olduğunu göstermektedir.

Özet (Çeviri)

Reprogramming somatic cells into induced pluripotent stem cells (iPSCs) is specified by the expression of OCT4, SOX2, KLF4, and c-MYC transcription factors. However, reprogramming has a limited success rate, suggesting the presence of barriers to this conversion. Epigenetic mechanisms such as DNA methylation and post-translational modifications on histone tails can hinder reprogramming. Preliminary studies demonstrated that SETD2, H3 lysine 36 tri-methyltransferase hinders cellular reprogramming. A CRISPR/Cas9 screen on H3K36me3-reader proteins yielded promising results in reprogramming efficiency, specifically with MRG15. In this thesis, I investigated the molecular processes behind MRG15's role as a barrier to iPSC production. First, I examined the effect of a SETD2 inhibitor in cellular reprogramming. This inhibitor selectively inhibited SETD2 activity, decreased H3K36me3 levels, and, similar to SETD2 knockdown, increased reprogramming efficiency. Next, I tested MRG15 knockout fibroblasts for reprogramming efficiency, and it increased iPSC generation four-fold. Overexpression of wildtype MRG15 rescued the knockout phenotype, confirming that the increase in reprogramming efficiency is not caused by Cas9 off-target events. I hypothesized that MRG15 acts downstream of SETD2 to block cellular reprogramming. However, double knockout of MRG15 and SETD2 yielded an additive increase in iPSC generation, which suggests MRG15 is not a direct SETD2 downstream effector. Next, I created MRG15 knockout iPSCs and examined OCT4, SOX2, NANOG, and SSEA4 pluripotency markers. Results indicated that iPSC maintenance does not require MRG15. RNA sequencing was performed with MRG15 knockout fibroblast samples, and gene set enrichment analysis demonstrated that MRG15 knockout samples are significantly enriched in pluripotent gene sets. Additionally, MRG15 knock-out upregulated cell cycle-related gene set expression, which may indicate that MRG15 knockout enhances iPSC production through higher proliferation. MRG15 can also be found in the SIN3B/HDAC2 repressive histone deacetylation complex; therefore, in a final set of experiments, I observed that MRG15 knockout led to a four-fold increase in H3K14 acetylation. Taken together, these results demonstrate that MRG15 and SETD2 operate as obstacles to cellular reprogramming through separate mechanisms; inhibiting these factors enhances the currently poor efficiency of generating iPSCs.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    779715

    Türkiye'de küçük ruminantlarda mide bağırsak nematodu türlerinin popülasyon genetiği ve antelmentik direnç durumunun tespiti

    Population genetics and detection of anthelmintic resistance of gastro-intestinal nematode species in small ruminants in Turkey

    MAHMUT SİNAN EREZ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    GenetikAfyon Kocatepe Üniversitesi

    Parazitoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ESMA KOZAN

  2. Tez No

    82838

    Identification of by products in hydrogen producing bacteria Rhodobascter sphaeradies OU 001 grown in waste water of a sugar refinery

    Şeker fabrikası atık suyundan hidrojen üretebilen Rhadobacter sphaeradies OU 001'in yan ürünlerinin karakterizasyonu

    DENİZ ÖZGÜR YİĞİT

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1999

    BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. UFUK GÜNDÜZ

  3. Tez No

    83558

    Lactococcus cinsine ait suşlarda faj dirençlilik sistemlerinin tanımlanması

    Identification of phage resistance in genus: Lactococcus

    PINAR ŞANLIBABA

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    1999

    Gıda MühendisliğiAnkara Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MUSTAFA AKÇELİK

  4. Tez No

    83565

    Türkiye'de izole edilen lactococcus lactis subsp. lactis suşlarında laktoz fermentasyon yeteneğinin genetik determinantlarının, konjugal aktarımının ve stabilitesinin tanımlanması

    Identification of genetic determinants, conjugal transfer and stability of lactose fermentation ability in lactococcus lactis subsp. lactis strains isolated from Turkey

    ÇAĞLA TÜKEL

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    1999

    Gıda MühendisliğiAnkara Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. MUSTAFA AKÇELİK

  5. Tez No

    83719

    Identification of the role of p33ING1 protein in the cellular activities of p53 tumor suppressor protein

    p33ING1 proteininin p53 tümör baskılıyıcı proteininin hücresel aktiviteleri üzerindeki etkisinin belirlenmesi

    N.C. TOLGA EMRE

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1999

    Biyolojiİhsan Doğramacı Bilkent Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. RENGÜL ÇETİN-ATALAY

Geri Dön