Encephalıtozoon ıntestınalıs enfeksiyonlarında toll-like reseptörlerin araştırılması
Investigation of toll-like receptors in encephalitozoon intestinalis infections
- Tez No: 851045
- Danışmanlar: DOÇ. DR. ÜLFET ÇETİNKAYA
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Veteriner Hekimliği, Veterinary Medicine
- Anahtar Kelimeler: Encephalitozoon intestinalis, TLR, MDCK, Hücre kültürü, Gen ekspresyonu
- Yıl: 2024
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Erciyes Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Veteriner Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 58
Özet
Bu çalışmada, Encephalitozoon intestinalis (E. intestinalis) sporları ile stimüle edilen Madin Darby Canine Kidney (MDCK) hücrelerinde TLR gen ekspresyonlarındaki değişimin hücre kültürü ortamında araştırılması amaçlandı. Çalışmada üç grup oluşturuldu. Birinci gruba E.intestinalis için hazırlanan besiyeri eklendi ve kontrol grubu olarak kaydedildi. İkinci gruba +4 °C'de bekleyen 108 canlı spor eklendi. Üçüncü gruba ısı ile inaktive edilmiş 108 spor eklendi. Her üç grupta 37ºC'de % 5 CO2'li ortamda inkübe edildi. Bu gruplardan 1., 3., 6., 12. ve 24. saatlerde alınan örneklerden RNA izolasyonu ve cDNA sentezi gerçekleştirildi. Elde edilen cDNA'lardan TLR1-10 genlerinin ekspresyonları real time PCR ile değerlendirildi. Çalışmada housekeeping gen olarak GAPDH ve ACTB genleri kullanıldı. Bu iki genin ortalaması alınarak hedef genler normalize edildi ve 2-ΔΔCt formülü uygulanarak istatistiksel analiz yapıldı. Eşik değerinin (threshold 1) üzerinde tespit edilen genlerin ekspresyonun arttığı, eşik değerinin altında tespit edilen genlerin ekspresyonun azaldığı kabul edildi. İnaktive sporlar ile stimüle edilen hücrelerin gen ekspresyonlarında istatistiksel olarak anlamlı bir değişim görülmezken, canlı sporlar ile stimüle edilen hücrelerde TLR3 ve TLR4 gen ekspresyonlarında anlamlı bir artış görülmüştür. TLR3 gen ekspresyonunda birinci saatte anlamlı bir artış (kontrolün 1.6 katı) olduğu fakat üçüncü saatte ekspresyon düzeyinin azalmaya başladığı (kontrolün 1.4 katı), altıncı saatte ise kontrol seviyesine döndüğü gözlendi. TLR4 gen ekspresyonunun ise 24. saate kadar kontrole paralel gittiği 24. saatte ise anlamlı şekilde arttığı (kontrolün 2.1 katı) gözlendi. Sonuç olarak, bu çalışma E.intestinalis ile stimule edilen MDCK hücrelerinde on farklı toll like reseptörün ekspresyon değişimleri farklı saatlerde değerlendirildiği ve TLT3 gen ekspresyonunda değişimin bildirildiği ilk çalışmadır.
Özet (Çeviri)
This study aimed to investigate the changes in TLR gene expression in Madin Darby Canine Kidney (MDCK) cells stimulated with Encephalitozoon intestinalis (E. intestinalis) spores in a cell culture medium. Three groups were formed in the study. Medium prepared for E.intestinalis was added to the first group and recorded as the control group. In the second group, 108 live spores waiting at +4 °C were added. Heat-inactivated 108 spores were added to the third group. All three groups were incubated at 37ºC with 5% CO2. RNA isolation and cDNA synthesis were performed from samples taken from these groups at the 1st, 3rd, 6th, 12th and 24th hours. Expression of TLR1-10 genes from the obtained cDNAs was evaluated by real-time PCR. GAPDH and ACTB genes were used as housekeeping genes in the study. Target genes were normalised by taking the average of these two genes and statistical analysis was performed by applying the 2-ΔΔCt formula. It was accepted that the expression of genes detected above the threshold value (threshold 1) increased and the expression of genes detected below the threshold value decreased. While there was no statistically significant change in gene expression in cells stimulated with inactivated spores, a significant increase was observed in TLR3 and TLR4 gene expression in cells stimulated with live spores. It was observed that there was a significant increase in TLR3 gene expression in the first hour (1.6 times the control), but the expression level started to decrease in the third hour (1.4 times the control) and returned to the control level in the sixth hour. TLR4 gene expression was parallel to the control until the 24th hour and increased significantly at the 24th hour (2.1 times the control). In conclusion, this study is the first study in which the expression changes of ten different toll-like receptors were evaluated at different hours in MDCK cells stimulated with E. intestinalis and changes in TLT3 gene expression were reported. Keyword: Encephalitozoon intestinalis, TLR, MDCK, Cell culture, Gene expression
Benzer Tezler
- Farklı hasta gruplarında encephalitozoon intestinalis'in araştırılması
Investigation of encephalitozoon intestinalis in different patient groups
ÜLFET ÇETİNKAYA
Doktora
Türkçe
2014
ParazitolojiErciyes ÜniversitesiParazitoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SÜLEYMAN YAZAR
- İmmün sistemi baskılanmış ishalli hastalarda enterocytozoon bieneusi ve encephalitozoon intestinalis varlığının IFA ve real time PCR yöntemleri ile araştırılması
Investigation of enterocytozoon bieneusi and encephalitozoon intestinalis in patients with immunocompromised diarrhea by İFA and real time PCR methods
SELAHATTİN AYDEMİR
Doktora
Türkçe
2022
ParazitolojiVan Yüzüncü Yıl ÜniversitesiParazitoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ZEYNEP TAŞ CENGİZ
DR. ÖĞR. ÜYESİ AHMED GALİP HALİDİ
- Hemodiyaliz, diyabet ve onkoloji hastaları ile immunsuprese hastalarda giardia intestinalis, cryptosporidium spp., encephalitozoon intestinalis ve enterocytozoon bieneusi varlığının araştırılması
Investigation of the presence of giardia intestinalis, cryptosporidium spp., encephalitozoon intestinalis and enterocytozoon bieneusi in hemodialysis, diabetes and oncology patients and immunosuppressed patients
ŞEHRİBAN YÜREKTÜRK
Doktora
Türkçe
2024
ParazitolojiVan Yüzüncü Yıl ÜniversitesiTıbbi Parazitoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HASAN YILMAZ
- İshalli olgularda Microsporidia sıklığının calcofluor beyazı ve Uvitex 2B kemilüminesans boyama yöntemleriyle araştırılması ve moleküler tiplendirilmesi
Researching Frequency of Microsporidia on diarrheic patients with Calcofluor white and Uvitex 2B Chemiluminescence painting methods and molecular typing of Microsporidia
İLKİZ OĞUZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
MikrobiyolojiGazi ÜniversitesiTıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. FUNDA DOĞRUMAN AL
- İshalli dışkılarda Microsporidium spp. ve Cryptosporidium spp.'nin saptanması,PCR yöntemi ile tür tayininin yapılması
Detection of Microsporidium spp. and Cryptosporidium spp. in diarrheic stool samples, ıdentification of species by PCR
SELMA USLUCA
Doktora
Türkçe
2009
BiyolojiDokuz Eylül ÜniversitesiMikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ÜMİT AKSOY