İshalli olgularda moleküler yöntemlerle microsporidia karakterizasyonu
Characterization of microsporidia using molecular methods in diarrheic cases
- Tez No: 1017975
- Danışmanlar: PROF. DR. FUNDA DOĞRUMAN AL
- Tez Türü: Tıpta Uzmanlık
- Konular: Mikrobiyoloji, Microbiology
- Anahtar Kelimeler: Microsporidia, Enterocytozoon bieneusi, Encephalitozoon spp, E. intestinalis, E. hellem, E. cuniculi, RT-PCR, nested PCR, Uvitex 2B, modifiye trikrom, Microsporidia, Enterocytozoon bieneusi, Encephalitozoon spp, E. intestinalis, E. hellem, E. cuniculi, RT-PCR, nested PCR, Uvitex 2B, modified trichrome
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Gazi Üniversitesi
- Enstitü: Tıp Fakültesi
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Tıbbi Mikrobiyoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
İshalli Olgularda Moleküler Yöntemlerle Microsporidia Karakterizasyonu Bu çalışma ishalli (n=165) ve ishalsiz (n=185) toplam 350 hastaya ait dışkı örneğinde Microsporidia prevalansının belirlenmesi ile cins ve tür tanımlamasının moleküler yöntemlerle gerçekleştirilmesi amacıyla yapılmıştır. Çalışmaya dahil edilen tüm dışkı örnekleri, serum fizyolojik, Lugol, formol etil asetat konsantrasyon, Uvitex 2B ve modifiye trikrom boyama yöntemleri ile değerlendirilmiştir. Çalışmaya dahil edilen 350 dışkı örneği Uvitex 2B ve modifiye trikrom boyama yöntemleriyle incelenmiş, boyama yöntemlerinin en az birisi ile pozitif veya şüpheli olarak değerlendirilen 200 örnek RT-PCR yöntemi ile değerlendirilmiştir. RT-PCR analizlerinde Encephalitozoon spp. pozitifliği 73 örnekte (%36,5) saptanmış, Enterocytozoon bieneusi ise hiçbir örnekte tespit edilememiştir. Ortalama Ct değerlerinin yüksek seyretmesi (≈34,9), örneklerdeki hedef DNA miktarının düşük düzeyde olduğunu göstermiştir. Internal Transcribed Spacer (ITS) bölgesini hedefleyen nested PCR ile tür düzeyinde yapılan tanımlamada 18 örnek pozitif bulunmuş; bunların 10'u E. intestinalis, beşii E. cuniculi ve üçü E. hellem olarak belirlenmiştir. RT-PCR ile Encephalitozoon spp. pozitifliği saptanan olgularda Uvitex 2B ve trikrom boyama yöntemlerinde yüksek pozitiflik oranlarının elde edilmesi (Uvitex 2B: %64,4; Trikrom: %65,8) konvansiyonel boyama yöntemlerinin Encephalitozoon spp. ön tanısında pratik ve maliyet açısından avantajlı bir tarama aracı olarak kullanılabileceğini göstermektedir. Buna karşın kesin tanı ve tür düzeyinde doğrulama için moleküler yöntemlerin tamamlayıcı olarak kullanılmasının önemli olduğu belirlenmiştir. Encephalitozoon spp. pozitif olguların çoğunun (%75,3) ishalsiz bireylerden oluşması ve pozitifliğin özellikle“reflü, dispepsi, mide ağrısı, şişkinlik”gibi nonspesifik gastrointestinal şikayetlerle başvuran olgularda daha yüksek oranda (%46,6) saptanması, Microsporidia enfeksiyonlarının yalnızca diyare veya akut enterit ile sınırlı olmadığını olmadığını, nonspesifik gastrointestinal yakınmalarla da seyredebildiğini düşündürmektedir. Bu çalışma ülkemizde insan dışkı örneklerinde Microsporidia'nın moleküler düzeyde araştırıldığı kapsamlı araştırmalardan biri olup, konvansiyonel ve moleküler yöntemlerin birlikte kullanıldığı çok aşamalı bir tanı protokolü ile yürütülmüştür.
Özet (Çeviri)
Characterization Of Microsporidia Using Molecular Methods İn Diarrheic Cases This study was conducted to determine the prevalence of Microsporidia in stool samples from a total of 350 patients with diarrhea (n=165) and without diarrhea (n=185) and to identify the genus and species using molecular methods. All stool samples included in the study were evaluated using physiological saline, Lugol's solution, formalin ethyl acetate concentration, Uvitex 2B, and modified trichrome staining methods. The 350 stool samples included in the study were examined using Uvitex 2B and modified trichrome staining methods. Of these, 200 samples that were evaluated as positive or suspicious using at least one of the staining methods were further evaluated using the RT-PCR method. Encephalitozoon spp. positivity was detected in 73 samples (36.5%) in RT-PCR analyses, while Enterocytozoon bieneusi was not detected in any sample. The high average Ct values (≈34.9) indicate that the target DNA amount in the samples was low. In species-level identification using nested PCR targeting the Internal Transcribed Spacer (ITS) region, 18 samples tested positive; 10 of these were identified as E. intestinalis, five as E. cuniculi, and three as E. hellem. In cases where Encephalitozoon spp. positivity was detected by RT-PCR, high positivity rates were obtained with the Uvitex 2B and trichrome staining methods (Uvitex 2B: 64.4%; Trichrome: 65.8%) indicates that conventional staining methods can be used as a practical and cost-effective screening tool for the preliminary diagnosis of Encephalitozoon spp. However, it has been determined that the complementary use of molecular methods is important for definitive diagnosis and species-level confirmation. The fact that most Encephalitozoon spp. positive cases (75.3%) consisted of individuals without diarrhea and that positivity was detected at a higher rate (46.6%) in cases presenting with nonspecific gastrointestinal complaints such as“reflux, dyspepsia, stomach pain, bloating”suggests that Microsporidia infections are not limited to diarrhea or acute enteritis, but can also present with nonspecific gastrointestinal complaints. This study is one of the comprehensive investigations conducted in our country on the molecular level of Microsporidia in human fecal samples, and it was carried out using a multi-stage diagnostic protocol that combined conventional and molecular methods.
Benzer Tezler
- İshalli olgularda Microsporidia sıklığının calcofluor beyazı ve Uvitex 2B kemilüminesans boyama yöntemleriyle araştırılması ve moleküler tiplendirilmesi
Researching Frequency of Microsporidia on diarrheic patients with Calcofluor white and Uvitex 2B Chemiluminescence painting methods and molecular typing of Microsporidia
İLKİZ OĞUZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
MikrobiyolojiGazi ÜniversitesiTıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. FUNDA DOĞRUMAN AL
- PCR ve modifiye trikrom boyama yöntemiyle kanser hastalarının dışkı örneklerinde Microsporidia etkeninin saptanması
Detection of Microsporodia agent in stool samples of cancer patients by PCR and modified trichrome staining method
SELDA DOĞAN
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2026
MikrobiyolojiHarran ÜniversitesiTıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET BAYRAKTAR
- İshalli dışkılarda Microsporidium spp. ve Cryptosporidium spp.'nin saptanması,PCR yöntemi ile tür tayininin yapılması
Detection of Microsporidium spp. and Cryptosporidium spp. in diarrheic stool samples, ıdentification of species by PCR
SELMA USLUCA
Doktora
Türkçe
2009
BiyolojiDokuz Eylül ÜniversitesiMikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ÜMİT AKSOY
- İshalli immünsupresif ve immünkompetan olgularda mikroskobik, serolojik ve moleküler yöntemlerle cryptosporidium SPP.'nin araştırılması
Investigation of cryptosporidium SPP in immunosuppressive and immunocompetent cases with diarrhea by microscobic, serological and moleculer methods
AHMET YILMAZ
Doktora
Türkçe
2015
MikrobiyolojiAtatürk ÜniversitesiTıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HAKAN USLU
- İmmün yeterli ve immün yetmezlikli ishalli olgularda gözden kaçan protozoonların konvansiyonel ve moleküler yöntemlerle araştırılması
The investigation of neglected protozoans in immunocompetent and immunodeficient diarrheal patients using by both conventional and molecular methods
FAKHRIDDIN SARZHANOV
Doktora
Türkçe
2020
MikrobiyolojiGazi ÜniversitesiTıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. FUNDA DOĞRUMAN AL