Geri Dön

Trehaloz ve iodiksanol içeren Tris bazlı sulandırıcılarla dondurulan köpek epididimal spermatozoalarının eritme sonrası spermatolojik özellikleri

Post-thaw spermatological characteristics of canine epididymal spermatozoa frozen with Tris based extenders containing trehalose and iodixanol

PDF İndir

  1. Tez No: 851924
  2. Yazar: MAMET ÇEŞMECİ
  3. Danışmanlar: PROF. DR. ALPER BARAN
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Veteriner Hekimliği, Veterinary Medicine
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2024
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: İstanbul Üniversitesi-Cerrahpaşa
  10. Enstitü: Lisansüstü Eğitim Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Dölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı​
  12. Bilim Dalı: Dölerme ve Suni Tohumlama Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 134

Özet

: Bu çalışmada köpek epididimal spermatozoonlarının dondurulmasında Tris temel sperma sulandırıcısına farklı dozlarda trehaloz ve iodiksanol ilavesinin spermatolojik özellikler üzerine etkisini ve bu maddelerin optimal dozlarını saptayarak her ikisinin birlikte kullanımında olası sinerjik etkisini ortaya koymak amaçlanmıştır. Çalışmada kısırlaştırma amacıyla barınağa getirilen 2-4 yaş arasında, 15-30 kg vücut ağırlığına sahip, karışık ırk sokak köpeklerinin bilateral orşiektomi operasyonu sonrası testislerinden elde edilen epididimal spermatozoon örnekleri kullanıldı. Çalışma iki aşamada gerçekleştirildi. Birinci aşamada Tris bazlı sulandırıcıya katılan trehaloz (Tr50- 50 mM, Tr75- 75 mM ve Tr100- 100 mM) ve iodiksanol'ün (İo%1- %1, İo%1,5- %1,5 ve İo%2- %2) optimal dozları belirlendi (kontrol grubuna hiçbir ekleme yapılmadı), ikinci aşamada ise optimal dozlarda trehaloz (Tr100) ve iodiksanol (İo%2) ve optimal dozların kombine kullanımının (Tr100 ve İo%2) spermatolojik özelliklere etkileri değerlendirildi (kontrol grubuna hiçbir ekleme yapılmadı). Üç-dört adet erkek köpeğin testislerinden her bir epididimis 0,5 ml'lik bir enjektör yardımıyla Tris bazlı sulandırıcı ile petri kabına yıkanarak epididimal spermatozoonlar toplandı. Kazanılan epididimal spermatozoonların toplam motilite, progresif motilite ve yoğunluğu belirlendi. Bu değerlendirmeler köpek spermasına ait standart parametrelere göre ayarlanmış SCA® (Sperm Class Analyzer) CASA (Computer Assisted Sperm Analyzer) cihazı kullanılarak yapıldı. Toplanan spermatozoonlar oda sıcaklığında (23-25C) 5 dakika bekletildikten sonra tüplere aktarıldı ve bir araya (pooling) getirildi. Elde edilen örneklerin, hacim açısından en az 0,5 ml olması, motilitenin ≥%70 ve yoğunluğun ≥200-300×106 spermatozoon/ml düzeyinde olması sağlandı. Spermatozoon yoğunluğu belirlendikten sonra sperma 1:3 oranında kademeli bir şekilde sulandırıldı. Soğutma, gliserolizasyon (final gliserol oranı %4) ve ekilibrasyon aşamalarından sonra 0,25 ml'lik payetlerde önce 110C'de donduruldu ve 196C'de saklandı. Dondurulmuş iki adet payet 37°C'lik su banyosunda, 30 saniyede eritildi. Ekilibrasyon, eritme, dayanıklılık ve termal stres sonrası spermatozoon toplam motilite, progresif motilite, kinematik hareket parametreleri CASA cihazında, HOS testi faz-kontrast mikroskobunda ve akrozom ve membran bütünlüğü ise flow sitometri cihazında incelendi. Farklı miktarlarda trehaloz'un ilave edildiği sulandırıcı gruplarının ekilibrasyon ve eritme sonrasına ait spermatolojik bulgular kontrol grubuyla karşılaştırıldığında incelenen spermatolojik özellikler yönünden herhangi bir fark saptanmadı (P>0,05), eritme sonrası aşamada 50 mM trehaloz kullanılan gruba ait LIN değerinin diğer gruplara göre önemli düzeyde yüksek olduğu belirlendi (P0,05). Eritme sonrası flow sitometrik analizlerde %2 iodiksanol ilave edilen grupta (İo%2) akrozomu sağlam canlı hücre oranı kontrol grubuna göre önemli derecede yüksek bulundu (P0,05). Eritme sonrası yapılan dayanıklılık testleri bakımından 2 saat inkübasyon sonrası kontrol grubuna ait LIN ve STR değerleri hariç incelenen diğer spermatolojik özelliklerin birbirine benzer olduğu belirlendi. Kontrol grubuna ait LIN değerinin diğer gruplara göre daha yüksek olduğu, ancak istatistiksel açıdan OpTr100 (P0,05). STR değeri bakımından kontrol grubunun OptTr100 ve Opİo%2 gruplarından istatistiksel olarak daha üstün olduğu belirlendi (P0,05). Sonuç olarak, köpek epididimal spermatozoonlarının 100 mM trehaloz ilave edilen Tris temel sperma sulandırıcısı ile dondurulup eritilmesi sonrasında daha yüksek oranda sağlam akrozom ve plazma membran bütünlüğü ile sonuçlandığını gösterdi. Aynı zamanda sperma sulandırıcısına %2 oranında iodiksanol ilavesinin ise eritme sonrası akrozomu sağlam hücre oranı açısından daha başarılı bulundu. İodiksanol ve trehaloz eklenen Tris sulandırıcısı ile kriyoprezerve edilen köpek epididimal spermatozoasının fertilizasyon kabiliyetini tam olarak ortaya koyabilmek için in vitro fertilizayon (İVF) ve suni tohumlama çalışmalarına ihtiyaç bulunmaktadır.

Özet (Çeviri)

In this study, it was aimed to determine the effect of different doses of trehalose and iodixanol addition to Tris basic semen diluent on spermatological properties in freezing of canine epididymal spermatozoa and to determine the optimal doses of these substances and to reveal the possible synergistic effect of using both together. In the study, epididymal spermatozoon samples obtained from the testes of 2-4 years old, 15-30 kg body weight, mixed breed street dogs brought to the shelter for sterilisation after bilateral orchiectomy operation were used. The study was carried out in two stages. In the first stage, the optimal doses of trehalose (Tr50 - 50 mM, Tr75 - 75 mM and Tr100 - 100 mM) and iodixanol (Io1% - 1%, Io1.5% - 1.5% and Io2% - 2%) added to the Tris-based diluent were determined (no addition was made to the control group), In the second stage, the effects of optimal doses of trehalose (Tr100) and iodixanol (Io2%) and the combined use of optimal doses (Tr100 and Io2%) on spermatological properties were evaluated (no addition was made to the control group). Epidididymal spermatozoa were collected from the testes of three to four male dogs by washing each epididymis with Tris-based diluent using a 0.5 ml syringe into a petri dish. Total motility, progressive motility and density of the recovered epididymal spermatozoa were determined. These evaluations were performed using the SCA® (Sperm Class Analyser) CASA (Computer Assisted Sperm Analyser) device adjusted according to the standard parameters of canine semen. The collected spermatozoa were kept at room temperature (23-25°C) for 5 minutes, then transferred to tubes and pooled. The samples obtained were ensured to be at least 0.5 ml in volume, motility ≥70% and density ≥200-300×106 spermatozoa/mL. After the spermatozoon density was determined, the semen was diluted gradually at a ratio of 1:3. After cooling, glycerolisation (final glycerol ratio 4%) and equilibration, 0.25 ml straws were first frozen at 110°C and stored at 196°C. Two frozen aliquots were thawed in a 37°C water bath in 30 seconds. After equilibration, thawing, endurance and thermal stress, spermatozoon total motility, progressive motility, kinematic motion parameters were analysed by CASA device, HOS test by phase-contrast microscopy and acrosome and membrane integrity by flow cytometry device. When the spermatological findings of the diluent groups to which different amounts of trehalose were added were compared with the control group, no difference was found in terms of the spermatological properties examined (P>0.05), the LIN value of the group using 50 mM trehalose at the post-thawing stage was significantly higher than the other groups (P0.05). In post-thawing flow cytometric analyses, the proportion of viable cells with intact acrosome was significantly higher in the group containing 2% iodixanol (Io2%) compared to the control group (P0.05). In terms of post-thawing endurance tests, except for LIN and STR values of the control group after 2 hours of incubation, the other spermatological properties examined were similar to each other. It was determined that the LIN value of the control group was higher than the other groups (P0.05). In terms of STR value, it was determined that the control group was statistically superior to OptTr100 and Opİo2% groups (P0.05). The results showed that freezing and thawing of canine epididymal spermatozoa with Tris basic semen diluent to which 100 mM trehalose was added resulted in a higher proportion of intact acrosomes and plasma membrane integrity. At the same time, the addition of 2% iodixanol to the semen diluent was found to be more successful in terms of acrosome intact cell ratio post-thawing. In vitro fertilization (IVF) and artificial insemination studies are needed to fully demonstrate the fertilisation ability of canine epididymal spermatozoa cryopreserved with Tris base diluent to which iodixanol and trehalose were added.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    412468

    Iodixanolün farklı kombinasyonlarının koç spermasının dondurulmasının üzerindeki etkileri

    Effects of different combinations of iodixanol on cryopresevation of ram semen

    MEHMET FERİT ÖZMEN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    Veteriner Hekimliğiİstanbul Üniversitesi

    Dölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı​

    PROF. DR. KEMAL AK

  2. Tez No

    523587

    Trehaloz'un dondurulmuş çözdürülmüş koç spermleri ince yapısı üzerine kriyoprotektif etkisinin araştırılması

    Ultrastructural investigation of the cryoprotecti̇ve effects of trehalose on frozen-thawed ram spermatozoa

    CENNET ALTINTAŞ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    Histoloji ve EmbriyolojiPamukkale Üniversitesi

    Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. NAZAN KESKİN

  3. Tez No

    713872

    Saccharomyces cerevisiae maya türünde SIR2 histon deasetilaz geninin NTH1 ve TPS1 gen ekspresyonlarına etkisi

    The effects of SIR2 histon deasetylase gene on NTH1 and TPS1 gene expressions in yeast Saccharomyces cerevisiae

    ÇAĞLA ÇAKALOĞLU

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    GenetikÇanakkale Onsekiz Mart Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ TÜLAY TURGUT GENÇ

  4. Tez No

    315527

    Bazı maya türlerinde trehaloz ve glikojen metabolizmasına etki eden faktörlerin analizi

    Analysis of factors affecting metabolism of trehalose and glycogen metabolisms in some yeast species

    HÜLYA KARACA GENÇER

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2012

    BiyolojiAnadolu Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MERİH KIVANÇ

  5. Tez No

    119434

    Trehalose and glycogen metabolism of gcrl mutants of Saccharomyces cerevisiae

    Saccharomyces cerevisiae gcrl mutantlarında trehaloz ve glikojen metabolizması

    TAMAY ŞEKER

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2002

    BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. HALUK HAMAMCI

    DOÇ. DR. MUSTAFA TÜRKER

Geri Dön