Geri Dön

Knock out of GSH2 gene and production of γ-GC in nicotiana benthamiana leaves with Cas9 vector/cell penetrating peptide complex

Cas9 vektörü/hücreye nüfuz eden peptit kompleksi ile nicotiana benthamiana yapraklarinda GSH2 geninin knock out edilmesi ve γ-GC üretimi

  1. Tez No: 858116
  2. Yazar: OĞUZHAN YAPRAK
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. CEYHUN KAYIHAN
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Biyoteknoloji, Genetik, Biology, Biotechnology, Genetics
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2024
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Başkent Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 77

Özet

Gama glutamat sistein (γ-GC), terapötik ve besin takviyesi potansiyeli olan bir bileşiktir, ancak mevcut üretim yöntemleri maliyetli ve verimsizdir. Bu tez, Nicotiana benthamiana bitki yapraklarında gen düzenleme teknikleri ile bu bileşiği daha verimli bir şekilde üretmeyi amaçlamaktadır. Bu yenilikçi yöntemin bitki ve sağlık biyoteknolojisi alanında önemli bir parametre olacağına inanılmaktadır. N. benthamiana bitkilerinde γ-GC üretimini artırmak için yeni bir teknik kullanılmıştır. İlk adımda, özel olarak tasarlanmış bir CRISPR/Cas9 vektörü (pKI1.1R) ve KLA-10 hücreye nüfuz eden peptitler (CPP) kullanılmıştır. Tasarlanan gRNA, CPP-pDNA kompleksi oluşturmak için KLA-10 peptidi ile birleştirildi ve CPP-pDNA kompleksi farklı N/P oranlarında N. benthamiana yapraklarına infiltre edildi. Bu aşamada Agrobacterium tabanlı transformasyon yöntemi de kullanılmış ve seçilen yöntemin etkinliği kontrol edilmiştir. Araştırmamızda, N/P:1'in üzerindeki oranların bitki yapraklarında nekroza neden olduğu tespit edilmiştir. Hem Agrobacterium tabanlı bitki transformasyon yönteminde hem de geliştirilen yöntemde glutatyon sentetaz 2 (GSH2) geninde istenen mutasyon tespit edilmiştir. Ancak moleküler analizler tüm sonuçların karışık profilde olduğunu göstermiş ve GSH miktarında önemli bir azalma gözlenmiştir.

Özet (Çeviri)

Gamma glutamate cysteine (γ-GC) is a compound with the potential for therapeutic and nutritional supplements, but current production methods are costly and inefficient. This thesis aims to produce this compound more efficiently by gene editing techniques in Nicotiana benthamiana plant leaves, This innovative method is believed to be an important parameter in the field of plant and health biotechnology. A novel technique was used to increase γ-GC production on N. benthamiana plants. In the first step, a specially designed CRISPR/Cas9 vector (pKI1.1R) and KLA-10 cell penetrating peptides (CPP) were used. The designed gRNA was combined with KLA-10 peptide to form a CPP-pDNA complex and the CPP-pDNA complex was infiltrated into N. benthamiana leaves at different N/P ratios. At this stage, the Agrobacterium-based transformation method was also used, and the efficiency of the selected method was checked. In our research, it was found that ratios above N/P:1 caused a necrosis in plant leaves. In both the Agrobacterium-based plant transformation method and the method developed, the desired mutation in the glutathione synthetase 2 (GSH2) gene was detected. However, molecular analyses showed that all results were mixed profile and a significant decrease in GSH amount was observed.

Benzer Tezler

  1. CRISPR/CAS yöntemi ile makak morpheus geninin (NPIPA1) knock-out edilmesi

    Making knock-out of macaque morpheus gene (NPIPA1) using CRISPR/CAS method

    KÜBRA PASPAL

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    GenetikUludağ Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. ELİF UZ

  2. REV 1 geninin DT40 hücrelerinde 'knock out' edilerek somatik hipermutasyona etkisinin incelenmesi

    The analysis of REV1 gene for somatic hypermutation by knock-out in DT40 cells

    NESİBE NUR SARIBAŞAK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2005

    BiyolojiMarmara Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. İSMAİL PEKER

  3. Investigations into the function and regulation of the C-terminal binding protein (CTBP-1) in C. elegans

    C. elegans'ta C-terminal Binding Protein'in (CTBP-1) fonksiyonunun ve düzenlenmesinin araştırılması

    DUYGU YÜCEL

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2012

    Tıbbi BiyolojiUniversity of Sydney

    Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ HANNAH NICHOLAS

  4. Kanser hücrelerinde serin-glisin amino asit kısıtlamasının moleküler incelenmesi ve LC-MS/MS yöntemi ile metabolit analizi

    Molecular investigation of serine-glycine amino acid restriction in cancer cells and metabolite analysis by LC-MS/MS method

    SANİYE KOÇ ADA

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    Biyokimyaİstanbul Medeniyet Üniversitesi

    Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MUSTAFA BAKİ ÇEKMEN

    DOÇ. DR. BURCU YÜCEL

  5. Glioma hücrelerinde stres proteinlerinin anlatımında HSF1'in rolü

    The role of HSF1 on stress proteins expressions in glioma cells

    ELÇİN GÜNGÖR

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    Genetikİstanbul Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. EVREN ÖNAY UÇAR