Sıçanlarda spermatogenezis ile ilgili düzenleyici genlerin tanımlanması ve moleküler mekanizmalarının araştırılması
Identification of the regulatory genes related with spermatogenesis and investigation of their molecular mechanisms in rats
- Tez No: 872709
- Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ HALİME TUBA CANBAZ, DR. ÖĞR. ÜYESİ ABU SHAMEEM MD. SAADAT KHANDAKAR
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Genetik, Histoloji ve Embriyoloji, Genetics, Histology and Embryology
- Anahtar Kelimeler: Apoptozis, Gen ifadesi, Gen susması, Genler, Kısırlık-erkek, Nekroz, Protein analizleri, Protein profili, Spermatogenez, Transkripsiyon faktörleri, Apoptosis, Gene expression, Gene silencing, Genes, Infertility-male, Necrosis, Protein analysis, Protein profile, Spermatogenesis, Transcription factors
- Yıl: 2024
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Sağlık Bilimleri Üniversitesi
- Enstitü: Hamidiye Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Histoloji ve Embriyoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Amaç: Bu doktora tezi projesinde, düzenleyici rollere sahip olduğu düşünülen ARID3A ve ARID3B genlerinin spermatogenez üzerindeki rollerinin belirlenmesi ve bu genlerin moleküler mekanizmalarının araştırılması amaçlanmıştır. Gereç ve Yöntem: Faz I deney hayvanları çalışmasında, ARID3A ve ARID3B genlerine özgü siRNA'ların etkin konsantrasyonu ve etkinlik süresinin belirlenmesi için 20 adet yetişkin erkek Sprague Dawley sıçanı kullanılmıştır. Bu sıçanlar, 24, 48 ve 72 saat olmak üzere farklı zaman aralıklarında incelenmiştir. Kullanılan siRNA'ların konsantrasyonu ve etkinlik süresinin belirlenmesinin ardından, Faz II deney hayvanları çalışması için 20 adet yetişkin erkek Sprague Dawley sıçanı kullanılmıştır. ARID3A ve ARID3B genlerinin sıçan testis dokusunda in vivo olarak susturma işlemi gerçekleştirildikten sonra ilgili genlerin başarılı bir şekilde susturulmasının doğrulanması için cnPCR, qRT‑PCR ve Western Blot yöntemleri kullanılmıştır. Ayrıca, çalışmada incelenen tüm moleküllerin gen ifadelerinin analizi için qRT‑PCR yöntemi kullanılmıştır. Bu genlerin kodladığı protein ifadelerinin analizi için ise Western Blot yöntemi kullanılmıştır. Protein lokalizasyonlarının tespiti için immünofloresans boyama yöntemi uygulanmıştır. Ek olarak, ARID3A ve ARID3B'nin sıçan testis dokusunda in vivo olarak susturulduktan sonra ortaya çıkabilecek patolojilerin gözlemlenmesi için H&E, TRI ve PAS boyama yöntemleri uygulanmıştır. Son olarak da ARID3A ve ARID3B'nin sıçan testis dokusunda in vivo olarak susturulmasının sperm üzerindeki etkilerini incelemek için sperm parametreleri analiz edilmiştir. Bulgular: Elde edilen verilere göre hem ARID3A hem de ARID3B'nin spermatogenezde düzenleyici rolleri olduğu belirlenmiş ve bu genlerin baskılanmasının germ hücre arrestine ve ölümüne neden olduğu, sonuç olarak da testiküler nekroza yol açtığı bulunmuştur. Sonuç: ARID3A ve ARID3B'nin hem spermatogenezin düzgün ilerlemesi hem de testis dokusu homeostazının sağlanmasında kritik öneme sahip olduğu bulunmuştur.
Özet (Çeviri)
Aim: In this doctoral dissertation project, our goal was to uncover whether ARID3A and ARID3B have regulatory roles in spermatogenesis, alongside investigating their associated molecular mechanisms. Materials and Methods: In the Phase I experimental animal study, 20 adult male Sprague Dawley rats were utilized to determine the effective concentration and duration of effectiveness of specific siRNAs targeting the ARID3A and ARID3B genes. The rats were examined at different time intervals, specifically at 24, 48, and 72 hours. Following the determination of siRNA concentrations and efficacy duration, 20 adult male Sprague Dawley rats were used for the Phase II experimental animal study. Following the in vivo silencing of ARID3A and ARID3B genes in rat testicular tissue, the successful silencing of the respective target genes was confirmed using cnPCR, qRT-PCR, and Western Blot methods. Moreover, the qRT-PCR method was used for the analysis of gene expressions of all molecules examined in the study. Western Blot method was used for the analysis of protein expressions encoded by these genes. Immunofluorescence staining method was applied for the detection of protein localization. Additionally, for the observation of potential pathologies arising after the in vivo silencing of ARID3A and ARID3B in rat testicular tissue H&E, TRI, and PAS staining methods were applied. Finally, sperm parameters were examined to explore the impact of in vivo silencing of ARID3A and ARID3B on sperm characteristics. Results: According to the obtained data, it has been determined that both ARID3A and ARID3B have regulatory roles in spermatogenesis. It has been found that suppression of these genes leads to germ cell arrest and apoptosis, ultimately resulting in testicular necrosis. Conclusion: It has been found that both ARID3A and ARID3B are crucially important for the proper progression of spermatogenesis and the maintenance of testicular tissue homeostasis.
Benzer Tezler
- Atherosklerotik kalp hastalıklarında risk faktörleri
Risk factors in the coronary artery disease
MURAT SUHER
- Acil yardım ve tedavi hastanelerinin idari mali ve teknik yönden planlaması
Başlık çevirisi yok
SERVET OKUYUCU
Yüksek Lisans
Türkçe
1985
HastanelerGazi ÜniversitesiKazalarda Acil Yardım ve Rehabilitasyon Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. HİKMET PEKCAN
- Toprak ve tarım reformu uygulamasında öncelikli köylerin tesbitine ilişkin bir yöntem uygulaması
Başlık çevirisi yok
SABİR ATASEVER
- Diyabetus mellitus'da gözlenen mikrovasküler komplikasyonların prostaglandinler ile olan ilişkisi
The Relation of microvaskular complications observed in diabetes mellitus with prostoglandins
CANAN NEBİGİL
Doktora
Türkçe
1985
Eczacılık ve FarmakolojiCumhuriyet ÜniversitesiFarmakoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. YUSUF SARIOĞLU