Kainik asit ile eksitotoksisite oluşturulmuş nöroblastoma hücrelerinde GLT-1 (Glutamat Transporter 1) yıkım yolağının, SIRT 4 (Sırtuın 4) ile düzenlenmesinin araştırılması
Investigation of the regulation of the GLT-1 (glutamate transporter 1) degradation pathway by SIRT 4 (sirtuin 4) in excitotoxic neuroblastoma cells induced by kainic acid
- Tez No: 879101
- Danışmanlar: DOÇ. DR. BAKİYE GÖKER BAĞCA, PROF. DR. GİZEM DÖNMEZ YALÇIN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Tıbbi Biyoloji, Medical Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2024
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Aydın Adnan Menderes Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 69
Özet
Amaç: Çalışmada; SIRT4'ün, nöroblastoma hücrelerinde, GLT-1'in ekspresyonunu ve degradasyonunu nasıl düzenlediği ve GLT-1 promotorundaki transkripsiyon faktörleri üzerine etkisinin aydınlatılması amaçlandı. Bunun yanında özellikle kainik asit kaynaklı eksitotoksisite durumunda bu düzenlemenin nasıl değiştiğinin gözlemlenmesi hedeflendi. Gereç ve Yöntem: SH-SY5Y insan nöroblastoma hücre hattında, SIRT4 genini susturmak için SIRT4 shRNA içeren lentiviral partiküller kullanıldı ve SIRT4 geni susturulmuş kararlı SH-SY5Y hücre hattı elde edildi. SIRT4'ün susturulduğunu göstermek Western Blot yöntemi kullanıldı. Uygun şartları sağlayan tek bir hücre hattı seçilerek diğer deneylerde kullanılmak üzere çoğaltılmaya devam edildi. Kontrol SH-SY5Y hücreleri ve SIRT4 geni susturulmuş SH-SY5Y hücreleri kainik asit (1mM) ile muamele edilerek eksitotoksisite modeli oluşturuldu. Toplam dört deney grubu meydana getirildi. Bunlar; kontrolgrubu, kainik asit ile eksitotoksisite modeli oluşturulmuş grup, SIRT4 susturulmuş grup ve kainik asit ile eksitotoksisite modeli oluşturulan ve SIRT4 susturulmuş gruptur. Dört deney grubundaki GLT-1 ifadeleri Western Blot yöntemi kullanılarak analiz edildi. Dört deney grubundaki GLT-1 mRNA seviyeleri qPCR yöntemi kullanılarak belirlendi. GLT-1 promotoru ve transkripsiyon faktörlerinin (CREB ve REST) etkileşimi CHIP (Kromatin İmmünopresipitasyon) metodu ile dört deney grubunda gösterildi. Bulgular: Kontrol grubu, Kainik asit ile eksitotoksisite modeli oluşturulmuş grup, SIRT4 susturulmuş grup ve Kainik asit ile eksitotoksisite modeli oluşturulan ve SIRT4 susturulmuş gruplarındaki GLT-1 ekspresyon düzeyinin belirlenmesi için her gruptan protein izolasyonu yapılarak Western Blot yöntemi uygulandı. Elde edilen sonuçlarda GLT-1'in nöroblastoma hücrelerinde oligomerik yapılar oluşturduğu görüldü. SIRT4 geni susturulmuş iki grup arasında eksitotoksisite oluşturmak toplam GLT-1 ifadesini istatistiksel olarak anlamlı şekilde azaldığı gözlemlendi. Bunun yanında eksitotoksisite oluşturulmuş iki grup arasında SIRT4 genini susturmanın yine toplam GLT-1 ifadesini istatistiksel olarak anlamlı şekilde azalttığı bulundu. Ardından dört deney grubunda GLT-1 mRNA seviyeleri, qPCR yöntemi kullanılarak belirlendi. Elde edilen sonuçlara göre dört deney grubu arasında, GLT-1 mRNA seviyesinin, istatistiksel olarak anlamlı bir fark göstermediği gözlemlendi. Sonuç: Elde edilen sonuçlar, nöroblastoma hücrelerinde SIRT4'ün susturulmasının ve eksitotoksisite durumunun GLT-1 ifadesini, mRNA düzeyinden ziyade protein düzeyinde etkilediğini göstermektedir.
Özet (Çeviri)
Objective: In this study, we aimed to investigate how SIRT4 regulates the expression and degradation of GLT-1 in neuroblastoma cells and to clarify its effect on transcription factors in the GLT-1 promoter. In addition, it was aimed to observe how this regulation changes especially in the case of kainic acid-induced excitotoxicity. Material and Methods: In SH-SY5Y human neuroblastoma cell line, lentiviral particles containing SIRT4 shRNA were used to silence the SIRT4 gene and a stable SH-SY5Y cell line with silenced SIRT4 gene was obtained. Western blotting was used to demonstrate SIRT4 silencing. A single cell line that met the appropriate conditions was selected and continued to be propagated for further experiments. Control SH-SY5Y cells and SIRT4 gene silenced SH-SY5Y cells were treated with kainic acid (1 mM) and excitotoxicity model was established. A total of four experimental groups were formed. These are; control group, kainic acid-induced excitotoxicity model, SIRT4 silenced group and kainic acid-induced excitotoxicity model and SIRT4 silenced group. GLT-1 expressions in the four groups were analyzed using Western Blot method. GLT-1 mRNA levels in the four groups were determined using qPCR method. The interaction of GLT-1 promoter and transcription factors (CREB and REST) was demonstrated by CHIP (Chromatin Immunoprecipitation) method in four groups. Results: In order to determine the GLT-1 expression level in the control group, Kainic acid-excitotoxicity induced group, SIRT4 silenced group and Kainic acid-excitotoxicity induced and SIRT4 silenced groups, protein isolation was performed from each group and Western Blot method was applied. The results showed that GLT-1 formed oligomeric structures in neuroblastoma cells. A statistically significant decrease in total GLT-1 expression was observed between the two SIRT4 gene silenced groups to induce excitotoxicity. In addition, silencing the SIRT4 gene between the two excitotoxicity-induced groups was found to statistically significantly reduce total GLT-1 expression. GLT-1 mRNA levels in the four experimental groups were then determined using qPCR method. According to the results obtained, it was observed that GLT-1 mRNA levels did not show a statistically significant difference between the four groups. Conclusion: Our results suggest that SIRT4 silencing and excitotoxicity in neuroblastoma cells affect GLT-1 expression at the protein level rather than the mRNA level.
Benzer Tezler
- Kainik asit ile hücrelerde eksitotoksisite modelinin oluşturulması ve glutamat taşıyıcısı-1 (GLT-1)'in incelenmesi
The formation of an excitotoxicity model with kainic acid in cells and the examination of glutamate transporter-1(GLT-1
RABİA UYARICI
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
Tıbbi BiyolojiAydın Adnan Menderes ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. GİZEM DÖNMEZ YALÇIN
- Hücre modelinde sırt4 (sirtuin4)'ün eksitotoksisiteye karşı koruyucu etkisinin araştırılması
Investigation of the protective effect of sirt4 (sirtuin4) against exitotoxicity in A cellular model
MERVE ÇOLAK
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
Tıbbi BiyolojiAydın Adnan Menderes ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. GİZEM DÖNMEZ YALÇIN
- Kainik asitle indüklenen eksitotoksisite'de naloksonve endomorfin uygulamalarının CREB ve ilişkili bazı sinyal moleküllerinin mRNA ekspresyon düzeyleri üzerindeki etkisi
Başlık çevirisi yok
MEHMET MAHSUM KAPLAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2014
Eczacılık ve FarmakolojiEge ÜniversitesiSinir Bilimi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AYFER YALÇIN
- Kainik asit ile oluşturulan eksitotoksitite modelinde endoplazmik retikulum stres markerlarının araştırılması
Investigation of endoplasmic reticulum stress markers in A kainic acid formed excitotoxicity model
ALİME SARI
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
Tıbbi BiyolojiAydın Adnan Menderes ÜniversitesiTıbbi Biyoloji Bilim Dalı
DOÇ. DR. GİZEM DÖNMEZ YALÇIN
- Kainik asitle indüklenen eksitotoksisite'de bazı spesifik beyin bölgelerinde mitokondriyal dna hasarı ve gama-glutamil sitein etil ester'in potansiyel koruyucu etkisinin araştırılması
Mitochondrial dna damage in spesific brain regions in kainic acid induced excitotoxicity and investigation of potential protective effect of gamma-glutamyl cysteine ethyl ester
GİZEM ÇİZMECİ