Akciğer kanser hücre modelinde mitokondrialmutant gen ekspresyonlarının susturulmasınınkarsinogenez üzerindeki etkilerinin araştırılması
Investigation of the effects of silencing mitochondrial mutant geneexpressions on carcinogenesis in a lung cancer cell model
- Tez No: 887896
- Danışmanlar: PROF. DR. CUMHUR GÜNDÜZ, DR. ÖĞR. ÜYESİ BESRA ÖZMEN YELKEN
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Genetik, Tıbbi Biyoloji, Genetics, Medical Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2024
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ege Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 75
Özet
Çalışmamızda, insan küçük hücreli dışı akciğer kanseri hücre hattı A549'da bulunan MT-ND2 m.4587T>C (Phe40Leu) varyantının siRNA transfeksiyonu ile mRNA düzeyinde susturulmasının mitokondriyal fonksiyonlar ve karsinogenez üzerindeki etkilerini araştırmayı amaçladık. Ayrıca, akciğer kanseri gibi ölümcül hastalıklarda mtDNA mutasyonlarının RNA tabanlı terapötik ajanlarla nasıl hedeflenebileceğini anlamayı hedefledik. Bu bağlamda, siRNA transfeksiyonu ile mitokondriyal süreçler deregüle edilerek, hücre proliferasyonu, apoptoz, klonojenik sağkalım ve yara iyileşmesi üzerindeki etkileri çeşitli deneylerle değerlendirildi Akım sitometri analiz bulgularına göre, A549 hücre hattında apoptoz analizlerinde (Annexin V, Kaspaz-3 ve JC-1) zamana bağlı istatistiksel anlamlı değişiklikler gözlemlendi. T2A hücre hattında ise, mitokondriyal membran değişimi üzerinde zamana bağlı etkiler gözlenmemiş, ancak Annexin V ve Kaspaz-3 bulgularına göre özellikle 72. saatte zamana bağlı istatistiksel değişiklikler gözlemlendi Bulgularımız, apoptozla ilgili genler CASP3, CASP7, CASP9 ve BAX genlerinin ekspresyonunda siRNA transfeksiyonunun 72 saatte artışlar gözlemlendi. Diğer taraftan TP53 geninin ekspresyonunda da 72. saatte artışlar gözlendi ve bu artışın MT-ND2 m.4587T>C varyantının hücrelerde tümör supresör etkilerini artırabileceği ve apoptoz yolaklarını etkileyebileceği tahmin edilmektedir. A549 hücre hattında yara iyileşmesi deneyi bulguları analizlerimiz, 0-120 saatlik zaman periyodunda uygulama ve kontrol grupları arasında zamana bağlı istatistiksel anlamlı farklar olduğunu gösterdi. T2A hücrelerinde ise uygulama ve kontrol grupları arasında zamana bağlı istatistiksel anlamlı farklar olduğunu ancak 96 saat sonunda bu etkinin azaldığı gözlemlendi A549 hücre hattında 72 saatlik zaman periyodunda uygulama ve kontrol grupları arasında mitokondriyal fonksiyonlar üzerindeki etkiler ROS üretim analizi ile değerlendirildi ve zamana bağlı belirgin bir değişiklik olmadığı gözlemlendi. Diğer taraftan bulgularımız T2A hücre hattında ise 72 saatlik zaman periyodunda uygulama ve kontrol grupları arasında zamana bağlı istatistiksel anlamlı farklar olduğunu gösterdi. Hücre proliferasyonu ve klonojenik sağkalım üzerinde susturmanın anlamlı bir etkisi saptanmadı Bu çalışma, MT-ND2 m.4587T>C varyantının siRNA ile hedeflenmesinin A549 hücrelerinde etkiler yarattığını, ancak bu tür terapötik yaklaşımların karsinogenez üzerindeki potansiyelini anlamak için daha fazla araştırma yapılması gerektiğini gösterdi. Gelecekte, farklı siRNA formülasyonları ve stratejileriyle bu sonuçların doğrulanması ve mtDNA mutasyonlarının kanser terapilerindeki rolünün daha iyi anlaşılması için kapsamlı çalışmalar yapılması gerekmektedir.
Özet (Çeviri)
In our study, we aimed to investigate the effects of silencing the MT-ND2 m.4587T>C (Phe40Leu) variant at the mRNA level using siRNA in the human non-small cell lung cancer cell line A549 on mitochondrial functions and carcinogenesis. Additionally, we sought to understand how mtDNA mutations in deadly diseases like lung cancer can be targeted with RNA-based therapeutic agents. In this context, the effects of siRNA transfection on mitochondrial processes were evaluated through various experiments, assessing cell proliferation, apoptosis, clonogenic survival, and wound healing. According to flow cytometry analysis results, statistical significant changes were observed over time in apoptosis analyses (Annexin V, Caspase-3, and JC-1) in the A549 cell line. In the T2A cell line, although no time-dependent effects were observed on mitochondrial membrane changes, statistical changes were notably observed at 72 hours according to Annexin V and Caspase-3 results. Our findings indicate that siRNA transfection led to increases in the expression of apoptosis-related genes CASP3, CASP7, CASP9, and BAX at 72 hours. Additionally, an increase in the expression of the TP53 gene was observed at 72 hours, suggesting that the MT-ND2 m.4587T>C variant might enhance tumor suppressor effects and affect apoptosis pathways in the cells. Wound healing assay results for the A549 cell line showed statistically significant time-dependent differences between the treatment and control groups over the 0-120 hour period. In the T2A cells, time-dependent statistically significant differences were observed between the treatment and control groups, but this effect decreased at 96 hours. In the A549 cell line, mitochondrial functions were evaluated through ROS production analysis over a 72-hour period, and no significant time-dependent changes were observed. Conversely, our findings in the T2A cell line showed time-dependent statistically significant differences between the treatment and control groups. No significant effects of silencing on cell proliferation or clonogenic survival were detected. This study demonstrates that targeting the MT-ND2 m.4587T>C variant with siRNA has effects in A549 cells; however, further research is needed to understand the potential of such therapeutic approaches in carcinogenesis. Future work should include validation of these results with different siRNA formulations and strategies, and comprehensive studies to better understand the role of mtDNA mutations in cancer therapies.
Benzer Tezler
- Epibrassinolidin kolon kanserine karşı anti-tümöral etkisinin scıd fare ksenograft modelinde gösterimi
The determination of anti-tumoral effect of epibrassinolide in colon carcinoma scid mice xenograft model
KAAN ADACAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
Onkolojiİstanbul Kültür ÜniversitesiMoleküler Biyokimya ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. PINAR OBAKAN YERLİKAYA
- Insights from a 3D culture model : Exploring the synergistic ımpact of tissue stiffness and matrix composition on tumor progression
3B kültür modelinden içgörüler: Doku sertliği ve matris bileşiminin tümör i̇lerlemesi üzerindeki sinerjistik etkisini keşfetmek
DENİZ ÖRNEK
Yüksek Lisans
İngilizce
2023
BiyomühendislikKoç ÜniversitesiHücresel ve Moleküler Tıp Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ ECE ÖZTÜRK
- İnsan karbonik anhidraz III geninin transkripsiyonel regülasyonu
Transcriptional regulation of human carbonic anhydrase III gene
DERYA OKUYAN ALTAN
- Küçük hücreli akciğer kanseri modelinde çok ilaca dirençli kanser hücrelerinde lenfokinle-aktive öldürücü hücre duyarlılığı
Başlık çevirisi yok
BURHAN SAVAŞ
- Deneysel meme kanseri modelinde splenektominin immünolojik etkisi
Effect of immunological experimental splenectomy model of breast cancer
MURAT SEVMİŞ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2015
Genel CerrahiHacettepe ÜniversitesiGenel Cerrahi Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. DERYA KARAKOÇ