Preimplantasyonel embriyonik gelişimde ın vivo ve ın vitro asidoz defans mekanizmalarının karşılaştırılması
Comparison of in vivo and in vitro acidosis defense mechanisms in preimplantation embryonic development
- Tez No: 891811
- Danışmanlar: PROF. DR. ŞEREF ERDOĞAN
- Tez Türü: Tıpta Uzmanlık
- Konular: Fizyoloji, Physiology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2024
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Çukurova Üniversitesi
- Enstitü: Tıp Fakültesi
- Ana Bilim Dalı: Fizyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 82
Özet
Amaç: Hücre içi pH (pHi) düzenlenmesi tüm hücrelerde olduğu gibi preimplantasyon aşamasındaki embriyolar için de hayati önem taşır. Preimplantasyon aşamasındaki embriyolar pHi düzenlenmesi için temel olarak üç farklı iyon değiştirici mekanizma kullanırlar. Bu mekanizmalardan HCO3⁻/Cl- değiştirici hücreyi alkaloza, Na+/H+ ve Na+, HCO₃⁻/Cl- değiştiricileri ise asidoza karşı korurlar. Bu çalışmada, in vivo elde edilen ve in vitro kültürde geliştirilen farklı aşamalardaki embriyoların (2 hücreli, 4 hücreli, morula ve trofoblast) Na+/H+ değiştirici aktivitesinin tek başına ve Na+, HCO₃⁻/Cl- değiştiricisi ile birlikte sağlanan asidoz defans mekanizmalarının karşılaştırılması amaçlandı. Gereç yöntem: Çalışmada 5-8 haftalık Balb/c soyu dişi fareler kullanıldı. In vivo ve in vitro elde edilen embriyoların bir grubu pH-sensitif florofor 2,7 Bis Karboksi Etil 5-6 Karboksi Florosin (BCECF) ile yüklenerek mikrospektrofluorometrik yöntem ile asidozdan iyileşme yanıtları kaydedildi. Na+/H+ değiştirici isoformlarının (NHE1 ve 3) asidozdan iyileşmeye olan katkısını değerlendirebilmek için spesifik inhibitörler (Kariporid, S3226) kullanıldı. Diğer bir grup embriyoya ise Na+/H+ ve Na+ , HCO₃⁻/Cl- değiştirici proteinlerinin spesifik antikorları ile indirekt immunfloresan boyama yöntemi uygulandı. Bulgular: Asidozdan iyileşmede ana düzenleyici mekanizma olan Na+/H+ değiştirici aktivitesi, in vivo ve in vitro aynı aşama embriyolar arasında anlamlı farklılık göstermezken her iki grupta da en yüksek değiştirici aktivitesi 2-h embriyonik aşamada gözlendi. Na+/H+ değiştirici 1 ve 3 isoformlarının asidozan iyileşmede etkili olduğu saptandı. Na+ ,HCO₃⁻/Cl⁻ değiştiricisinin asidozdan iyileşmede tamamlayıcı rol oynadığı ve in vitro kültür ortamında gelişen embriyolarda da benzer fonksiyon gösterdiği saptandı. Sonuç: Asidozdan iyileşmede fonksiyonel değiştirici aktivitelerinin 2 hücreli embriyonik aşamada yüksek olması ve embriyonik gelişim sürecinde anlamlı azalmalar görülmemesi, artan metabolik aktivite ve uterusun asidik ortamına uygun olarak etkin bir asidoz defans mekanızmasının bulunduğunu göstermektedir. In vivo elde edilen ve in vitro gelişimi sağlanan tüm preimplantasyonel embriyonik aşamaların asidoz defans mekanizmalarının etkinliği arasında anlamlı farklılık saptanmamış olması, kültüre edilen ileri aşama embriyoların da IVF uygulamalarındaki embriyo seçiminde düşünebileceğini desteklemektedir. Anahtar sözcükler: Hücre içi pH düzenlenmesi, Na + /H + değiştiricisi, Na + , HCO ₃ ⁻ /Cl - değiştiricisi, preimplantasyonel embriyonik gelişim, immünfloresan boyama
Özet (Çeviri)
Aim:Intracellular pH (pHi) regulation is crutial for all cell types including preimplantiton embryos. There are three mechanisms that are used for pHi regulation in preimplantation embryos. HCO3⁻/Cl- exchanger alleviates alkalosis while Na+/H+ and Na+, HCO₃⁻ /Cl- exchangers alleviate acidosis. In this study, we aimed to compare acidosis defence mechanisms provided by Na+/H+ exchanger activity alone and together with Na+,HCO₃⁻/Cl- exchanger activity in in vivo and in vitro embryos. Materials and Methods: Embryos were collected from 5-8 week old Balb/c strain female mice. In vivo and in vitro embryos loaded with 2,7 bis carboxyethyl 5-6 carboxy fluorescein (BCECF) and recovery rates from induced acidosis were recorded by microspectrofluorometric method. Specific inhibitors (Cariporide, S3226) were used to determine the contribution of Na+/H+ exchanger isoforms (NHE1 and 3) to recovery from acidosis. In a group of embryos Na+/H+ and Na+, HCO₃⁻/Cl- exchanger proteins visualised through indirect immunofluorescence protocol. Results: Na+/H+ exchanger activity was not significantly different between in vivo and in vitro same stage embryos. NHE1 and 3 isoforms contributed to recovery from acidosis. We found that the major mechanism for defence against acidosis is the Na+/H+ exchanger and the Na+, HCO₃-/Cl- exchanger plays a complementary role, and embryos developed in vitro also showed similar results. Conclusion: The exchanger activities were high at the 2-cell stage of the embryos and there was no significant decrease during the developmental stages of the embryos. These results suggest that there are effective acidosis defence mechanisms in accordance with the increased metabolic activity during embryonic development and the acidic environment of the uterus. The absence of significant changes in acidosis defence mechanisms between in vivo and in vitro embryos at all developmental stages may indicate that cultured advanced stage embryos can also be used for IVF treatment. Key Words:Intracellular pH regulation, Na+/H+ exchanger, Na+ ,HCO₃⁻/Cl- exchanger, preimplantation embryo development, immunofluorescence staining
Benzer Tezler
- Oosit gelişiminde ve preimplantasyon dönem embriyolarında in vivo ve in vitro ortamlarda apoptozisin rolü
The role of apoptosis during developing oocyte and preimplantation embryos in in vitro and in vivo conditions
SERAP CİLAKER
Yüksek Lisans
Türkçe
2005
GastroenterolojiCelal Bayar ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ.DR. SEDA VATANSEVER
- Dondurma öncesi ve sonrası oosit ve embriyolarda UPR (Unfolding protein response ) sinyal yolunun araştırılması ve preimplantasyon embriyo gelişimine etkisinin araştırılması
The investigation of UPR (Unfolding protein response) signaling cascade in oocyte and embryos before and after cryopreservation and its impact on preimplantation embryo development
İDİL BOZKURT
Yüksek Lisans
Türkçe
2011
Histoloji ve EmbriyolojiDokuz Eylül ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. IŞIL TEKMEN
DOÇ. DR. ÜMİT A. KAYIŞLI
- Dietary lipid effects on the endocrine status of ewes and the development, metabolism and cryopreservation qualities of their in vitro and in vivo produced embryos
Koyunların endokrin durumu ve in vitro ve in vivo üretilmiş embriyolarının gelişimi, metabolizması ve kriyoprezervasyon kaliteleri üzerine diyet lipid etkileri
ALİ GALİP ÖNAL
- İnsan ve sıçan plasentasında feto-maternal glikoz taşınım mekanizmalarının araştırılması
Investigation of feto-maternal glucose transport mechanisms in the human and rat placenta
EMİN TÜRKAY KORGUN
Doktora
Türkçe
2002
MorfolojiAkdeniz ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ.DR. TOM HAHN
PROF.DR. RAMAZAN DEMİR
- Bortezomib'in farelerde preimplantasyon dönemi embriyo gelişimine olan etkilerinin in vitro olarak araştırılması
An investigation of bortezomib effects on mouse preimplantation embryo development in vitro
CENNET SİNEM ÇOBAN
Yüksek Lisans
İngilizce
2019
Histoloji ve EmbriyolojiBurdur Mehmet Akif Ersoy ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ DUYGU MUTLUAY