Geri Dön

Schizosaccharomyces pombe'de FAP1 proteininin apoptozdaki etkisinin araştırılması

Investigation of the effect of FAP1 protein on apoptosis in schizosaccharomyces pombe

  1. Tez No: 891815
  2. Yazar: İREM KARAN
  3. Danışmanlar: PROF. DR. BEDİA PALABIYIK
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Mikrobiyoloji, Microbiology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2024
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: İstanbul Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Moleküler Biyoteknoloji ve Genetik Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: 84

Özet

Endoplazmik retikulum (ER) ökaryot hücrelerde yer alan, proteinin sentezlenmesi,taşınmasının yanısıra kalsiyum depolanması ve lipitlerin sentezinde de önemli bir rol oynayan organeldir. ER çeşitli etkenlerden kaynaklı strese maruz kaldığı durumlarda homeostazi bozulur ve yanlış katlanmış ya da katlanmamış olan proteinler hücre içerisinde birikmeye başlar. Bu duruma ER stresi adı verilmektedir. Hücreler ER stresi durumunda, homeostazinin tekrardan eski durumuna dönebilmesi amacıyla ilk olarak bu yanlış katlanma ya da katlanamama sonucu olarak UPR olarak adlandırılan yolak meydana getirir. Oluşan bu UPR yolağı insanda ve mayada farlılık göstermektedir. Ire1 (inositol gerekli enzim 1), ATF6 (aktive edici transkripsiyon faktörü 6), PERK (protein kinaz RNA benzeri ER kinaz), insanda bulunan bağımsız 3 yolaktır. Mayalarda ise bunlardan sadece korunmuş bir şekilde Ire1 (inositol gerekli enzim 1) fazla miktarda yer almaktadır. UPR yolağı çeşitli sebeplerle oluşan yanlış katlanmış veya katlanmamış proteinlerin birikimini indirgeyebilmek için protein yıkım mekanizmasını çalıştırır. Ayrıca ER stresini azaltabilmek için aktif hale gelen UPR yolağı proteinlerin doğru bir şekilde katlanabilmesini sağlar. Hücre gereğinden fazla şiddette ya da sürede strese maruz kaldığında homoeostazın sağlanabilmesi mümkün olmaz. Bunun sonucuna bağlı olarak otofaji ve apoptoz gibi programlanmış hücre ölümleri UPR yolağı tarafından tetiklenir. ER stresinin tetiklediği apoptozda moleküler mekanizmaların aydınlatılması için yapılan çalışmalarda S.pombe büyük önem taşımaktadır. S. pombe SPBC354.15 (fap1) geni L-pipekolat oksidaz, (“L-pipecolate oxidase”) enzimini şifreler. Pipekolat enziminin memeli hücrelerinde H2O2 stresine karşı koruma sağladığı bilinmektedir. Bu çalışmada, S.pombe'de tunikamisin ile tetiklenen ER stresine karşı geliştirilen hücresel yanıtlardan biri olan apoptoz sürecinde fap1 proteininin rolü ve hücresel stres yanıt yolakları araştırılmıştır. S. pombe fap1 geni kuvvetli bir nmt1 promotörü ve 3' klonlama bölgesinde GFP marker geni içeren pSGP572 plazmidinde klonlanlandı ve rekombinant plazmid (pSGP:fap1, IK02) S. pombe parental ve fap1 delesyonlu ırklara transfer edilerek rekombinant ırklar oluşturuldu. Elde edilen rekombinant İK02 plazmidindeki fap1:GFP füzyon proteininin hücre içi yerleşimi konfokal mikroskopta izlendi. Tunikamisin ile tetiklenen ER stresine karşı fap1 proteininin gösterdiği etkiler incelendi.

Özet (Çeviri)

Endoplasmic reticulum (ER) is an organelle located in eukaryotic cells that plays an important role in protein synthesis and transport, as well as calcium storage and lipid synthesis. When the ER is exposed to stress due to various factors, homeostasis is disrupted and misfolded or unfolded proteins begin to accumulate within the cell. This situation is called ER stress. In case of ER stress, cells first create a pathway called UPR as a result of this misfolding or failure to fold, in order to restore homeostasis. This UPR pathway differs in humans and yeast. Ire1 (inositol required enzyme 1), ATF6 (activating transcription factor 6), PERK (protein kinase RNA-like ER kinase) are 3 independent pathways found in humans. In yeast, only Ire1 (inositol essential enzyme 1) is present in large amounts in a conserved form. The UPR pathway activates the protein degradation mechanism to reduce the accumulation of misfolded or unfolded proteins that occur for various reasons. In addition, the UPR pathway, which is activated to reduce ER stress, ensures that proteins can be folded correctly. When the cell is exposed to stress of greater intensity or duration than necessary, it is not possible to maintain homoeostasis. As a result, programmed cell deaths such as autophagy and apoptosis are triggered by the UPR pathway. S.pombe is of great importance in studies carried out to elucidate the molecular mechanisms in apoptosis triggered by ER stress. The S. pombe SPBC354.15 (fap1) gene encodes the enzyme L-pipecolate oxidase. It is known that the pipecolate enzyme provides protection against H2O2 stress in mammalian cells. In this study, the role of fap1 protein and cellular stress response pathways in the process of apoptosis, which is one of the cellular responses developed against ER stress triggered by tunicamycin in S.pombe, were investigated. The S. pombe fap1 gene was cloned in the pSGP572 plasmid containing a strong nmt1 promoter and the GFP marker gene in the 3' cloning region, and the recombinant plasmid (pSGP: fap1, IK02) was transferred to S. pombe parental and fap1 deletion strains to create recombinant strains. The intracellular localization of the fap1: GFP fusion protein in the resulting recombinant İK02 plasmid was monitored under a confocal microscope. The effects of fap1 protein against ER stress triggered by tunicamycin were examined.

Benzer Tezler

  1. Schizosaccharomyces Pombe'de timidilat sentaz geninin izolasyonuna ilişkin çalışmalar

    Studies on the isolation of thymidylate synthase gene in schizosaoccharomyces pombe

    M. SABA ULUSOY

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    1999

    Biyolojiİstanbul Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GÜLER TEMİZKAN

  2. Schizosaccharomyces pombe'de metforminin hücre yaşlanmasına etkisi üzerine çalışmalar

    Studies on the effect of metformin on cellular aging in schizosaccharomyces pombe

    CEREN ŞEYLAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    Biyolojiİstanbul Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ ÇAĞATAY TARHAN

  3. Schizosaccharomyces pombe'de heksoz taşıyıcılarının düzenlenmesine katılan transkripsiyon faktörlerinin araştırılması

    The investigation of transcription factors involved in the regulation of hexose transporters in Schizosaccharomyces pombe

    MERVE SEDA İBİŞOĞLU

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    Biyolojiİstanbul Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. BEDİA PALABIYIK

    PROF. DR. AYŞEGÜL SARIKAYA

  4. Schizosaccharomyces pombe'de magnezyum eksikliğinin hücre döngüsü üzerine etkisi

    The effect of magnesium deficiency on the cell cycle in Schizosaccharomyces pombe

    GÜLŞEN UZ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2022

    Genetikİstanbul Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. BEDİA PALABIYIK

    PROF. DR. AYŞEGÜL SARIKAYA

  5. Schizosaccharomyces pombe'de glukoz metabolizmasının biyoinformatik ve transkriptomik analizi

    Bioinformatics and transcriptomic analysis of glucose metabolism in schizosaccharomyces pombe

    MEDET TAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    Genetikİstanbul Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ SEMİAN KARAER UZUNER