Functional characterization of human polo-like kinase 2 in the cell cycle and identification of its putative in-vitro substrates
İnsan polo benzeri kinaz 2'nin hücre döngüsünde fonksiyonel karakterizasyonu ve varsayılan in vitro substratlarının tanımlanması
- Tez No: 892073
- Danışmanlar: PROF. DR. INGRİD HOFFMANN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2004
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Ruprecht-Karls-Universität-Heidelberg
- Enstitü: Yurtdışı Enstitü
- Ana Bilim Dalı: Biyolojik Bilimler Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 78
Özet
Plk2 aktivitesi, memeli hücrelerinde G1-S geçişi için gereklidir (Warnke vd., 2004). Bu çalışmanın temel amacı, farklı deneysel koşullar kullanarak Plk2'nin rolünü ve hücre içi lokalizasyonunu doğrulamaktır. Plk2'nin kinaz inaktif versiyonunun aşırı ifadesi, hem U2OS hem de telomeraz negatif insan deri fibroblastlarında (BJ hücreleri) sentrozomal lokalizasyon göstermiştir. HeLa hücrelerinde sentetik inhibitör dubleks RNA'lar (siRNA'lar) kullanılarak Plk2 protein seviyelerine müdahale edilmesi, S-fazındaki hücrelerin yüzdesinde bir artışa yol açmakta, ve uzun süreli bir sentez fazına işaret etmektedir. Bu bulgu, Plk2'nin S-fazında meydana gelen sentrozomal duplikasyonda işlev gördüğüne dair önceki verilerle uyumludur. Bu nedenle, Plk2 protein seviyelerinin aşağı regüle edilmesi, S-fazındaki artan hücre miktarını açıklayabilen sentrozomal duplikasyon sürecini geciktirmiş olabilir. Plk2'nin hücresel substratlarının tanımlanması, etki şeklini anlamak için çok önemlidir. Bu nedenle, olası kinaz-substrat ilişkilerinin araştırılması bu çalışmanın amaçları arasında yer almıştır. Plk2'nin nükleofosmin (NPM) ve perisentriolar materyal-1'i (PCM1) fosforile ettiği gösterilmiş, ancak her iki proteinin fosforilasyon derecesinin, yapay substrat alfa-kazeinin fosforilasyonuna kıyasla daha zayıf olduğu belirlenmiştir. Son olarak, Plk2'nin, önceki bir maya-iki hibrid taramasında Plk2 ile ilişkili olduğu gösterilen c-Myb ile biyokimyasal olarak etkileşime girdiği bulunmuştur (S. Warnke, Doktora Tezi, DKFZ, Heidelberg, 2004). Bu etkileşimin işlevsel sonuçları henüz net olmasa da, c-Myb muhtemelen önemli bir Plk2 substratı olabilir. Şüphesiz Plk2'nin, hücre döngüsüne bağlı hücre içi lokalizasyonuna ve fizyolojik sübstratlarına daha fazla ışık tutulmalıdır. Plk2'nin daha kapsamlı bir karakterizasyonu tamamen yeni öngörülere kapı aralayabilir.
Özet (Çeviri)
Plk2 activity is essential for the G1-S transition in mammalian cells (Warnke et al., 2004). The main aim of this study was to confirm the role and subcellular localization of Plk2 using different experimental settings. Overexpression of a kinase inactive version of Plk2 displayed centrosomal localization in both U2OS and telomerase-negative human foreskin fibroblasts (BJ cells). Interfering with Plk2 protein levels by using synthetic inhibitory duplex RNAs (siRNAs) in HeLa cells led to an increase in the precentage of the cells in S-phase, which might be indicative of a prolonged synthesis phase. This finding is in conformity with the previous data that Plk2 functions in centrosomal duplication that takes place in S-phase. Therefore downregulating Plk2 protein levels might have retarded the centrosomal duplication process, which could explain the increased amount of cells in S-phase. Identifying the cellular substrates of Plk2 is of pivotal importance to deduce its mode of action. Therefore studying possible kinase-substrate relationships were among the aims of the current study. Plk2 was shown to phosphorylate nucleophosmin (NPM) and pericentriolar material-1 (PCM1), although the extent of phosphorylation of both proteins was weaker in comparison to the phosphorylation of the articifial substrate alpha-casein. Finally Plk2 was found to be interacting biochemically with c-Myb, which was shown to associate with Plk2 in a previous yeast-two hybrid screen (S. Warnke, PhD Thesis, DKFZ, Heidelberg, 2004). Although the functional consequences of this interaction are not yet clear, c-Myb could likely turn out to be a key Plk2 substrate. Clearly, more light has to be shed on the cell-cycle dependent sub-cellular localization and physiological substrates of Plk2. A more comprehensive characterization of Plk2 could open up entirely new perspectives.
Benzer Tezler
- Functional characterization of human UDP-glucuronosyltransferase 1A5 (UGT1A5): expression systems and structure-function
Başlık çevirisi yok
LEYLA KAYA
Yüksek Lisans
İngilizce
2011
Eczacılık ve FarmakolojiFlinders UniversityProf. JOHN O MINERS
Prof. PETER I MACKENZIE
- Functional characterization of human CRY1 interactome
İnsan CRY1 interaktomunun fonksiyonel karakterizasyonu
BUKET SÜNBÜL
Yüksek Lisans
İngilizce
2024
BiyolojiGebze Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NURİ ÖZTÜRK
- Mechanistic dissection of the centriole duplication and ciliogenesis proximity interaction maps
Sentriyol duplikasyonu ve sil biyogenezi proksimite etkileşim haritalarının aydınlatılması
EFRAİM CULFA
Yüksek Lisans
İngilizce
2018
BiyolojiKoç ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ ELİF NUR FIRAT KARALAR
- Mikro kompartmanlı In Vitro kültür sistemleri kullanılarak nöron ve kardiyomiyosit etkileşimlerinin araştırılması
Investigating neuron and cardiomyocyte interactions using mixed and compartmentalized In Vitro culture systems
GİZEM YÖRÜKOĞLU
Yüksek Lisans
Türkçe
2024
Biyolojiİstanbul Medipol ÜniversitesiTıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ESRA ÇAĞAVİ
- Expression, purification, and characterization of recombinant human IL-2
Rekombinant insan IL-2'nin ekspresyonu, saflaştırılması ve karakterizasyonu
BUSE AKGÜN
Yüksek Lisans
İngilizce
2022
Biyolojiİstanbul Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GİZEM DİNLER DOĞANAY