Geri Dön

Brucella melitensis Rev.1 ΔOmp 19 marker aşı geliştirilmesi

Obtaining Brucella melitensis Rev 1 ΔOmp 19 as a marker vaccine

PDF İndir

  1. Tez No: 892450
  2. Yazar: ALİ USLU
  3. Danışmanlar: PROF. DR. OSMAN ERGANİŞ
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Allerji ve İmmünoloji, Mikrobiyoloji, Veteriner Hekimliği, Allergy and Immunology, Microbiology, Veterinary Medicine
  6. Anahtar Kelimeler: Brucella melitensis, İntihar Plazmid, Gen Delesyonu, Marker Aşı, Fare Modeli, Brucella melitensis, Suicide Plasmid, Gene Deletion, Marker Vaccine, Mouse Model
  7. Yıl: 2020
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Selçuk Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Mikrobiyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 158

Özet

Brusella, birçok konak üzerinde etkili hücre içi zoonoz bir patojendir. Canlı attenüe suş olan B. melitensis Rev.1aşı suşu, piyasada koyun-keçi brusellozisine karşı en etkin aşı suşudur. Koruma gücü açısından koyun-keçilerde hatta sığırlarda güvenle kullanılabilmektedir. Ancak koyun-keçilerde saha enfeksiyonlarından/aşılamaya bağlı oluşan antikorları ayırt edebilmesine yönelik etkin bir aşı suşu olmamakla ile birlikte birçok çalışma mevcuttur. Brusella dış membranında bulunan Omp19 proteini hem virulans hem de koruma ile ilişkili bir antijendir. Bu çalışmada 534 bp uzunluğunda Omp19 ORF silinmesi için 5've 3' homoloji bölgesini bulunduran pJQ200KS isimli intihar plazmidi elektroporasyon ile penisilin, ampisilin ve glisin ile sferoplast haline getirilen B. melitensis Rev.1'lere aktarımı sağladı. Delesyonu doğrulanan mutant suştan (B. melitensis Rev.1 ΔOmp19) aşı hazırlandı. Fare modellerinde B. melitensis Rev.1 aşısı ile etkinlik, immün temizlenme ve Omp19 bölge delesyonunun yarattığı enfeksiyonlardan ayrımının kıyaslanması amaçlandı. Gen aktarım sürecinde E.coli'de mutant vektör oluşturmak için ışı şok transformasyon metodu X-gal'lı besi yerinde mavi beyaz koloni ayrımı, Brusella'ya gen aktarımı için elektroporasyon kullanıldı. Sferoplast dönüşümünü gözlemlemek için S.E.M. elektron mikroskobundan yararlanıldı. Mutant vektör ve delesyon mutantlar PZR ve dizi analizleri ile doğrulandı. Fare model denemeleri bireysel havalandırmalı kafes sistemi içerisinden yürütüldü. Elektroporasyon sonucunda 17, 43, 44, 45 (glisin sferoplast) ve 19, 46 (ampisilin sferoplast) isimli denemelerde gentamisine dirençli B. melitensis Rev.1'ler tespit edildi. Fare modeli etkinlik denemelerinde, 3 ticari aşı OIE standartlarına uygun uyarım sağladığı tespit edildi. Delesyon mutantlarından 19 ve 44-10'nun uyarım gücü açısında ticari aşılarla benzer etkiliğe sahip olmasına karşın Omp19 proteini ile yapılan ELISA testinde negatif kontrolden farksız sonuç tespit edildi. Çalışmada elde edilen 2 adet Rev.1 Omp 19 delesyon mutantı fare modelinde en az ticari aşılar kadar yeterli rezidüel virülans ve protektif immunite oluşmaktadır. Omp19 geni silinmiş B. melitensis Rev.1 ΔOmp19 suşundan aşı hazırlanılması ve kullanılması durumunda serolojik olarak Omp19 proteini taranmasına yönelik ELISA testleri ile aşılı/enfekte ayrımı (DIVA) yapılabileceği tespit edilmiştir.

Özet (Çeviri)

Brucella is an intracellular zoonotic pathogen that acts on many hosts. B. melitensis Rev.1, a live attenuated strain, is the most effective vaccine strain against sheep-goat brucellosis in the market. It can be used safely in sheep-goats and even cattle against antibody titer and challenge. However, there is not an effective vaccine strain in sheep-goats to distinguish antibody titer from field infections/vaccination, but there are many studies. The Omp19 region on the brucella outer membrane is both virulence and a protective antigen. In this study, the suicide plasmid pJQ200KS, which contains 5 and 3 'homology region for the removal of 534 bp Omp19 ORF, was transferred to B. melitensis Rev.1, which was transformed into spheroplasts with penicillin, ampicillin, and glycine in electroporation. Vaccines verified deletion mutant mouse models in fields inTurkey B. melitensis Rev. 1 vaccines with activity aimed to infection by comparison of the distinction of the immune clearance of deletions and Omp19.In the gene, the transfer process, the blue and white colony separation was used in breeding the site with X-gal in the light shock transformation method to create a mutant a vector in E.coli, and electroporation was used for gene transfer to Brucella.S.E.M. to observe the spheroplast transformation. the electron microscope was used. Mutant vector and deletion mutants were confirmed by PCR and sequence analysis. Mouse model trials were conducted through the IVS cage system. As a result of electroporation, gentamicin resistant B. melitensis Rev.1 was detected in trials named 17, 43, 44, 45 (glycine spheroplast) and 19, 46 (ampicillin spheroplast). In mouse model efficacy trials, 3 commercial vaccines were found to comply with OIE standards. Although the deletion mutants had similar efficacy with commercial vaccines in terms of stimulation power of 19 and44-10, the ELISA test with Omp19 protein showed no different results from the negative control. The 2 Rev.1 Omp19 deletion mutants obtained in the study consisted of sufficient residual virulence and protective immunity as at least as commercial vaccines. With this study, it has been determined that if the vaccine is prepared and used from B.melitensis Rev.1 strain whose ΔOmp19 gene has been deleted, the vaccine / infected separation (DIVA) can be performed by ELISA tests for screening Omp19 protein.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    203352

    Konjuktival yolla uygulanan azaltılmış (reduced) doz brucella rev. 1 aşı etkinliğinin incelenmesi

    Investigation of effectiveness of reduced dose brucella rev. 1 vaccine application by conjunctival route

    SENEM HACIÖMEROĞLU

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2008

    MikrobiyolojiUludağ Üniversitesi

    Mikrobiyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. AYŞİN ŞEN

  2. Tez No

    346584

    Attenüe Brucella melitensis (REV-1) aşısının farklı stabilizatörlerle liyofilizasyonu

    Attenuated Brucella melitensis (REV-1) vaccine in different stabilizers lyophilization

    YUSUF AVCIOĞLU

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    BiyoteknolojiKilis 7 Aralık Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. İSMET HASENEKOĞLU

  3. Tez No

    490022

    Brucella melitensis dış membran protein geninin klonlanması

    Cloning of outer membran protein gene of brucella melitensis

    ERMAN ORYAŞIN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    MikrobiyolojiAdnan Menderes Üniversitesi

    Mikrobiyoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SÜHEYLA TÜRKYILMAZ

  4. Tez No

    142052

    Brucella melitensis dış membran antijeninin lipozom formulasyonlarının farelerde oluşturduğu sıvısal bağışık yanıtın incelenmesi

    Investigating the humoral immun responce of brucella melitensis outer membrane antigen encapsulated with liposom formulations in mice

    FATMA KAYNAK

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2005

    MikrobiyolojiGazi Üniversitesi

    Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. UFUK ABBASOĞLU

  5. Tez No

    678973

    Brucella melitensis suşlarının genetik profillerinin MLVA (Multilokus Değişken Sayıda Ardışık Tekrar Analizi), MLST (Multilokus Dizi Tiplendirme) yöntemleriyle değerlendirilmesi

    Evaluation of genetic profiles of brucella melitensis strain by using mlva MLVA (Multilocus Variable Number Tandem Repeat Analysis) and MLST (Multilocus Sequence Typing) techniques

    KADİR AKAR

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2021

    MikrobiyolojiSelçuk Üniversitesi

    Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. OSMAN ERGANİŞ

Geri Dön