Geri Dön

Epitelyal ovaryan kanser hücrelerinde IAP inhibitörü ve cisplatin kombinasyonunda apoptotik mekanizmaların araştırılması

Investigation of apoptotic mechanisms in combination of IAP inhibitor and cisplatin in epithelial ovarian cancer cells

PDF İndir

  1. Tez No: 920471
  2. Yazar: ELHAM SHAHNAZI
  3. Danışmanlar: PROF. DR. AYŞEGÜL UYSAL
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Onkoloji, Oncology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2025
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Ege Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Temel Onkoloji ve Kanser Biyolojisi Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 139

Özet

Ovaryan kanserler yüksek mortaliteye sahip jinekolojik kanserler olup Epitelyal ovaryan kanserleri en yaygın alt tipidir. Metastatik hastaların çoğunda özellikle platin bazlı ilaçlara karşı kemoterapi direnci, tekrarlayan tümör nükslerinin ortaya çıkmasına neden olur. Platin bazlı kemoterapiye yanıt, tümör biyolojisi ve histolojisi, moleküler değişiklikler ve tümör mikroçevresi gibi çeşitli parametrelere bağlıdır. Platin ajanlar DNA hasarına neden olur ve ardından kanser hücrelerinde apoptozu indükler. Apoptoza direnç, kanser tedavisinin en önemli hedeflerinden biridir. Apoptoz, kaspazların ve transkripsiyon faktörünün (NF-κB) inhibisyonu ve modülasyonu yoluyla IAP proteinleri tarafından düzenlenir. Cisplatin çeşitli malignitelerde birçok epitelyal ovaryan kanserin tedavisinde klinik olarak kullanılmaya devam edilmektedir. Anti-apoptotik aktiviteleri, kötü prognoz ile ilişkileri ve çoklu malignitelerdeki tedavi direnci ile korelasyonları nedeniyle IAP proteinleri, antikanser terapötiklerinin geliştirilmesi için önemli bir hedef haline gelmiştir. SMAC (Kaspazın ikinci mitokondriyal aktivatörü) mimetikler, klinik çalışmalarda monoterapi ve çeşitli kanserlerde farklı kemoterapötik ilaç kombinasyonları çalışılmaktadır. cIAP1 seviyesinin düşük olduğunda, hücre ölümü yolaklarını daha etkili bir şekilde aktive ederek özellikle TNF-α'nın artışıyla birleştiğinde tedaviye yanıt potansiyeli bildirilmektedir. TNF-α bağışıklık sisteminin önemli bir bileşeni olarak, inflamasyon süreçlerini ve hücre ölümünü düzenleyen bir sitokindir, gen ifadesinin yüksek olması inflamatuvar sinyallemenin artmasına, apoptoza duyarlılığı artırabilir. TNF-α tedavi sürecinde özellikle pro-apoptotik sinyallemeyi artıran ilaçlarla birlikte kullanıldığında hedef hücrelerde seçici hücre ölümüne yol açabilir. Bu bilgilerden yola çıkarak projede Birinapant, Cisplatin ve kombinasyonlarının epitelyal ovaryan kanser hücrelerinde apoptotik mekanizmalar üzerindeki etkileri araştırıldı. Bu amaçla in vitro epitelyal ovaryan kanser hücre hatları (SKOV3, MDAH2774) ve sağlıklı insan endometrial stromal (HESC) hücrelerine IC50 uygulama dozunu belirlemek için MTT testi uygulandı. Kontrol ve deney gruplarında apoptoz miktarını kontrol etmek için akış sitometri analizleri yapıldı. IC50 sonuçlarına göre kombinasyon analizlerinde sinerji bulunan hücre hattı olan SKOV3 hücrelerinde ilgili proteinlere yönelik belirlenen antikorlarda (cIAP1, MLKL, Caspase 3, Caspase 8, NFKB) immunfloresan boyamalar yapıldı ve floresan ışıma yoğunlukları elde edilerek Imagej analizleri gerçekleştirildi. Gen ekspresyon analizlerinde ilgili genlerdeki (MLKL, cIAP1, NFKB, Caspase3, Caspase8, TNF-α, MMP9, MMP2, CDH1, Vecadherin, Vimentin) gen ifadelenmeleri için RT-PCR yöntemi uygulandı. MTT ve Kombinasyon analizlerinde, IC50 dozlarının SKOV3 hücreleri için sinerjistik olduğu bulundu. MDAH2774 hücre hattında antagonist etkiler olduğu saptandı. Apoptoz ve Nekroptoz sinyal yolağına ilişkili yapılan immünfloresan boyamalarda deney gruplarında kontrol grubuna göre protein ışıma yoğunluğu Caspase 3, Caspase8 anlamlı olarak yüksek ve cIAP1 anlamlı olarak düşük olduğu bulunmuştur. SKOV3 hücre hatlarında RT-PCR sonuçları kontrol grubuna göre Cisplatin grubunda Caspase3, Caspase8, CDH1 ve MMP9 genlerinde anlamlı upregulasyon bulundu. TNF-α ve Vecadherin deney gruplarında downregülasyon gösterdi. Birinapant grubunda Caspase 3 ve MMP9 genlerinde anlamlı upregulasyon bulundu. Deney gruplarında NFKB, TNF-α Vecadherin ve MMP2 downregülasyon meydana geldi. Kombinasyon grubunda TNF-α ve MMP2 genlerinde anlamlı upregulasyon bulundu. MMP9, cIAP1, Caspase 3, Caspase 8 ve Vecadherin deney gruplarında downregülasyon meydana geldi. TNF-α'nın apoptotik süreçleri düzenlemedeki rolü, kombinasyon grubunda belirginleştiği saptandı. Bu sitokinin artışı özellikle TNF-α aracılı apoptotik sinyallerin etkinleşmesi ile kanser hücre ölümünü arttırabileceği düşünülmektedir. Gen ekspresyon seviyelerinde farklılık gösteren genler ile ileri biyoinformatik analizler, epitelyal ovaryan kanser tedavisine yönelik moleküler hedefler ve mekanizmalar hakkında önemli katkılar sağlayabileceği düşünülmektedir.

Özet (Çeviri)

Ovarian cancers are gynecologic cancers with high mortality and epithelial ovarian cancers are the most common subtype. In most metastatic patients chemotherapy resistance, especially to platinum-based drugs, leads to recurrent tumor relapses. Response to platinum-based chemotherapy depends on several parameters such as tumor biology and histology, molecular alterations and tumor microenvironment. Platinum agents cause DNA damage and subsequently induce apoptosis in cancer cells. Resistance to apoptosis is one of the most important targets of cancer therapy. Apoptosis is regulated by IAP proteins through inhibition and modulation of caspases and transcription factor (NF-κB). Cisplatin continues to be used clinically in the treatment of many epithelial ovarian cancers in various malignancies. Due to their anti-apoptotic activity, association with poor prognosis and correlation with treatment resistance in multiple malignancies, IAP proteins have become an important target for the development of anticancer therapeutics. SMAC (second mitochondrial activator of caspase) mimetics are being studied in clinical trials as monotherapy and in combinations of different chemotherapeutic drugs in various cancers. When cIAP1 levels are low, it activates cell death pathways more effectively, especially when combined with an increase in TNF-α, the potential for response to treatment is reported. TNF-α as an important component of the immune system, is a cytokine that regulates inflammation processes and cell death and high gene expression may increase susceptibility to increased inflammatory signaling and apoptosis. TNF-α may cause selective cell death in target cells, especially when used in combination with drugs that increase pro-apoptotic signaling in the treatment process. Based on this information, we investigated the effects of Birinapant, Cisplatin and their combinations on apoptotic mechanisms in epithelial ovarian cancer cells. For this aim, MTT assay was applied to in vitro epithelial ovarian cancer cell lines (SKOV3, MDAH2774) and healthy human endometrial stromal (HESC) cells to determine the IC50 application dose. Flow cytometry analysis was performed to control the amount of apoptosis in control and experimental groups. According to the IC50 results, immunofluorescent staining was performed in antibodies (cIAP1, MLKL, Caspase 3, Caspase 8, NFKB) determined for the relevant proteins in SKOV3 cells, the cell line with synergy in combination analysis and Imagej analyzes were performed by obtaining fluorescence intensities. In gene expression analyses, RT-PCR method was applied for gene expressions in related genes (MLKL, cIAP1, NFKB, Caspase 3, Caspase 8, TNF-α, MMP9, MMP2, CDH1, Vecadherin, Vimentin). In MTT and combination assays, IC50 doses were found to be synergistic for SKOV3 cells. Antagonist effects were found in MDAH2774 cell line. In immunofluorescence staining related to the Apoptosis and Necroptosis signaling pathway, it was found that the protein luminescence intensity Caspase 3, Caspase 8 were significantly higher and cIAP1 was significantly lower in the experimental groups compared to the control group. RT-PCR results in SKOV3 cell lines showed significant upregulation of Caspase 3, Caspase 8, CDH1 and MMP9 genes in the Cisplatin group compared to the control group. TNF-α and Vecadherin showed downregulation in the experimental groups. Significant upregulation was found in Caspase 3 and MMP9 genes in the birinapant group. NFKB, TNF-α, Vecadherin and MMP2 downregulation occurred in the experimental groups. Significant upregulation was found in TNF-α and MMP2 genes in the combination group. MMP9, cIAP1, Caspase 3, Caspase 8 and Vecadherin were downregulated in the experimental groups. The role of TNF-α in regulating apoptotic processes was found to be prominent in the combination group. It is thought that the increase in this cytokine may increase cancer cell death, especially with the activation of TNF-α-mediated apoptotic signals. Further bioinformatic analyses with genes showing differences in gene expression levels may provide important contributions to molecular targets and mechanisms for epithelial ovarian cancer treatment.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    411913

    Glokomlu olgularda konjonktivada apoptozisin kantitatif analizi ve topikal antiglokom ilaçların apoptozis oranına etkileri

    Quantitative analysis of apoptosis in conjunctiva of patients with glaucoma and effects of topical antiglaucoma drugs on apoptosis rates

    AYSUN ŞANAL DOĞAN

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2002

    Göz HastalıklarıHacettepe Üniversitesi

    Göz Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MEHMET ORHAN

  2. Tez No

    411946

    Overin yüzey epitelyal-stromal tümörlerinde tp53, p21, p27, nm23 ve ki-67 ekspresyonu (Güncel Görüşler Işığında, Overin Malign, 'Borderline' ve Benign Yüzey Epitelyal-Stromal Tümörlerinin, Non-Tümöral Over Epiteli ile Karşılaştırmalı, Histopatolojik ve İmmünohistokimyasal Değerlendirmesi)

    TP53, P21, P27, NM23 ve KI-67 expression of ovarian surface epithelial-stromal tumors

    DENİZ FİLİNTE

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2008

    Kadın Hastalıkları ve DoğumKocaeli Üniversitesi

    Tıbbi Patoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SEVGİYE ÖZKARA

  3. Tez No

    412450

    Deneysel hipertiroidi oluşturulmuş gebe sıçanların uterus ve plasenta dokularında osteonektin (SPARC) ve TGFβ-1 dağılımının immünohistokimyasal olarak incelenmesi

    The immunohistochemical analysis of osteonectin (SPARC) ve TGFβ-1 distribution in the placenta and uterin tissues of pregnant rats with experimentally induced hyperthyroid

    RUKİYE KARABACAK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    Histoloji ve EmbriyolojiTrakya Üniversitesi

    Morfoloji (Histoloji ve Embriyoloji) Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. TURAN KARACA

  4. Tez No

    412475

    MCF-7 meme kanseri hücre soyunda Türkiye'de yetişen morus nigra meyvesinin sitotoksik ve apoptotik etkilerinin incelenmesi

    Investigation of morus nigra fruit's cytotoxic and apoptotic effects which is growing in Turkey on MCF-7 breast cancer cell line

    SİNEM RADAY

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    Moleküler Tıpİstanbul Üniversitesi

    Moleküler Tıp Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. HÜLYA YILMAZ AYDOĞAN

  5. Tez No

    412536

    Akut bronşiyolitli çocuklarda epitel geçirgenlik göstergeleri ve oksidatif stresin rekürrense etkisi

    Başlık çevirisi yok

    YEŞİM YİĞİT

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2015

    Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıCelal Bayar Üniversitesi

    Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. HASAN YÜKSEL

    DOÇ. DR. ÖZGE YILMAZ

Geri Dön