Schizosaccharomyces pombe' de cnx1 geninin CRISPR-Cas9 sistemi kullanılarak anlatımının düzenlenmesi
Regulation of expression of cnx1 gene in Schizosaccharomyces pombe using the CRISPR-Cas9 system
- Tez No: 920620
- Danışmanlar: PROF. DR. BEDİA PALABIYIK
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Genetik, Biology, Genetics
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: İstanbul Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Moleküler Biyoteknoloji ve Genetik Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 70
Özet
Bu çalışmada, Schizosaccharomyces pombe model organizmasında calnexin1 geninin işlevsel mekanizmasının aydınlatılması amaçlanmıştır. Endoplazmik retikulumda yer alan calnexin1 proteininin hücresel süreçlerdeki rolü, özellikle protein katlanması ve kalite kontrolündeki etkisi üzerine odaklanılmıştır. Bu bağlamda, genetik mühendislik yöntemleri kullanılarak calnexin1 geninin düzenlenmesi hedeflenmiştir. Araştırmada, CRISPR-Cas9 teknolojisi kullanılarak calnexin1 geninin düzenlenmesi gerçekleştirilmiştir. Genin önüne GFP (yeşil floresan protein) işaretleyicisi ve nmt1 promotörü eklenmiştir. Bu strateji, genin ekspresyonunun hem aşırı eksprese edildiği hem de baskılandığı durumlarda hücresel lokalizasyonunun ve mekanizmasının izlenmesine olanak tanımıştır. Böylece, calnexin1 proteininin fonksiyonel rollerinin daha kapsamlı bir şekilde anlaşılması amaçlanmıştır. Çalışma sonucunda, CRISPR-Cas9 aracılığıyla gerçekleştirilen genetik düzenlemenin başarılı olduğu ve calnexin1 proteininin hücresel lokalizasyonunun GFP işaretleyicisi ile görselleştirilebildiği ortaya konulmuştur. Elde edilen bulgular, calnexin1 geninin protein katlanması ve kalite kontrol süreçlerinde önemli bir rol oynadığını desteklemiştir. GFP sinyali analizi, yeşil floresan veren hücrelerde calnexin1'in aşırı eksprese olduğu durumlarda hücrelerin küçülüp zayıfladığına işaret etmiştir. Ayrıca, elde edilen floresan veriler, ER stres yanıtı koşulları altında şaperon aktivitesinin ve hücresel stres mekanizmalarının analizi için kritik bilgiler sunmuştur.
Özet (Çeviri)
In this study, we aimed to elucidate the functional mechanism of the calnexin1 gene in the model organism Schizosaccharomyces pombe. We focused on the role of calnexin1 protein located in the endoplasmic reticulum in cellular processes, especially in protein folding and quality control. In this context, we aimed to regulate the calnexin1 gene using genetic engineering methods. In the study, the calnexin1 gene was edited using CRISPR-Cas9 technology. GFP (green fluorescent protein) marker and nmt1 promoter were inserted in front of the gene. This strategy allowed the monitoring of the cellular localization and mechanism of the gene's expression, both when it was overexpressed and when it was repressed. Thus, a more comprehensive understanding of the functional roles of the calnexin1 protein was aimed. As a result of the study, it was revealed that genetic editing via CRISPR-Cas9 was successful and the cellular localization of calnexin1 protein could be visualized with GFP marker. The findings supported that the calnexin1 gene plays an important role in protein folding and quality control processes. Analysis of GFP signal indicated that when calnexin1 was overexpressed in cells that fluoresced green, the cells became smaller and weaker. Furthermore, the fluorescence data provided critical information for the analysis of chaperone activity and cellular stress mechanisms under conditions of ER stress response.
Benzer Tezler
- Schizosaccharomyces pombe'de glukoz metabolizmasının biyoinformatik ve transkriptomik analizi
Bioinformatics and transcriptomic analysis of glucose metabolism in schizosaccharomyces pombe
MEDET TAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
Genetikİstanbul ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ SEMİAN KARAER UZUNER
- Schizosaccharomyces pombe'de arginin biyosentezi ile ilişkili bazı genlerin haritalanması
Başlık çevirisi yok
SEMİAN KARAER
- Schizosaccharomyces pombe'de endoplazmik retikulum stresinin hücresel etkilerinin araştırılması
Investigation of cellular effects of endoplasmic reticulum stress in Schizosaccharomyces pombe
NEZAHAT GÖKÇE ÖZSAMUR
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
Genetikİstanbul ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. BEDİA PALABIYIK
- Schizosaccharomyces pombe'de SPBC409.08 ve SPAC9.02c genlerinin karakterizasyonu
Characterization of SPBC409.08 and SPAC9.02c genes in Schizosaccharomyces pombe
İSMAİL GÜNGÖR
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
BiyoteknolojiBilecik Şeyh Edebali ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. İSMAİL POYRAZ
- Schizosaccharomyces pombe'de FAP1 proteininin apoptozdaki etkisinin araştırılması
Investigation of the effect of FAP1 protein on apoptosis in schizosaccharomyces pombe
İREM KARAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2024
Mikrobiyolojiİstanbul ÜniversitesiMoleküler Biyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. BEDİA PALABIYIK