Orakotundan (falcaria vulgaris bernh.) polifenol oksidazınsaflaştırılması ve biyokimyasal karakterizasyonu
Purification and biochemical characterization ofpolyphenol oxidase from sickleweed (falcaria vulgaris bernh.)
- Tez No: 924767
- Danışmanlar: DR. ÖĞR. ÜYESİ AYŞE TÜRKHAN
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Orakotu (Falcaria vulgaris Bernh.), Polifenol oksidaz, Saflaştırma, Karakterizasyon, İnhibisyon, Sickleweed (Falcaria vulgaris Bernh.), Polyphenol oxidase, Purification, Characterization, Inhibition
- Yıl: 2024
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Iğdır Üniversitesi
- Enstitü: Lisansüstü Eğitim Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 59
Özet
Bu çalışmada, polifenol oksidaz (PFO), afinite kromatografisi ile %23,61 verimle 15,65 kat saflaştırıldı. Katekol, 4-metilkatekol ve DHPPA substratları için optimum pH ve sıcaklık ayrı deneylerde belirlendi. Her üç substrat için optimum pH 7,0, optimum sıcaklık ise 20 °C olarak bulundu. Substrat özgüllüğünü değerlendirmek için katalitik etkinlik oranı (Vmaks/Km) kullanıldı. Vmaks/Km değereleri katekol, 4-metil katekol ve DHPPA için sırasıyla 2000 (EU.mL-1.dk-1.mM-1), 2500 (EU.mL-1.dk-1.mM-1)ve 1249,84 (EU.mL1.dk-1.mM-1) olarak hesaplandı. En yüksek Vmaks/Km oranı en büyük substrat afinitesini yansıttığından, 4-metilkatekol Orakotu PFO için en uygun substrat olarak tespit edildi.pH kararlılığı ve termal kararlılık 4-metilkatekol varlığında incelendi. Yaygın olarak kullanılan anti-esmerleşme ajanları olan sodyum metabisülfit, sitrik asit ve askorbik asidin polifenol oksidaz aktivitesi üzerindeki inhibitör etkileri araştırıldı. Sonuçlar askorbik asidin en etkili inhibitör olduğunu gösterdi.
Özet (Çeviri)
In this study, polyphenol oxidase (PPO) was purified 15.65-fold with a yield of 23.61% by affinity chromatography. Optimum pH and temperature for catechol, 4- methylcatechol and DHPPA substrates were determined in separate experiments. For all three substrates, the optimum pH was found to be 7.0, while the optimum temperature was 20°C. The catalytic efficiency ratio (Vmax/Km) was employed to assess the substrate specificity. Vmax/Km values were calculated as 2000 (EU.mL-1.min-1.mM-1), 2500 (EU.mL-1.min-1.mM-1) and 1249.84 (EU.mL-1.min-1.mM-1), for catechol, 4- methyl catechol and DHPPA, respectively. Since the highest Vmax/Km ratio reflects the greatest substrate affinity, 4-methylcatechol was identified as the substrate with the highest affinity for Sickleweed PPO based on these values. pH stability and thermal stability were examined in the presence of 4-methylcatechol. The inhibitory effects of widely used anti-browning agents, sodium metabisulphite, citric acid and ascorbic acid on polyphenol oxidase activity were investigated. The results show that ascorbic acid was found to be the most efficent inhibitor.