Geri Dön

Generation of induced pluripotent stem cells from human fibroblast cell lines

İnsan fibroblast hücre hatlarından uyarılmış pluripotent kök hücre eldesi

PDF İndir

  1. Tez No: 958635
  2. Yazar: MUHAMMET FATİH AYDIN
  3. Danışmanlar: PROF. DR. AHTER DİLŞAD ŞANLIOĞLU
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Genetik, Biology, Genetics
  6. Anahtar Kelimeler: İndüklenmiş pluripotent kök hücre, Sodyum bütirat, Lentiviral vektör, Induced pluripotent stem cells, Sodium butyrate, Lentiviral vectors
  7. Yıl: 2025
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Akdeniz Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Gen ve Hücre Tedavisi Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 48

Özet

Amaç: İndüklenmiş pluripotent kök hücreler (iPKH'ler), her üç germ tabakasına ait hücrelere farklılaşabilme ve kendini sürekli yenileyebilme yetenekleri ile dikkat çeken, insan biyolojisinin in vitro modellenmesinde ve gen ve hücre tedavilerinde çok önemli potansiyel atfedilen hücrelerdir. Ancak iPKH oluşturma süreçleri, etkinliği düşük ve uzun süreli kültür gerektiren metodolojilerdir ve etkinlik ve güvenlilik açısından geliştirilmeleri gerekmektedir. Çalışmamızda, HFF-1 insan fibroblast hücrelerinin yeniden programlama faktörlerini kodlayan entegre olmayan lentiviral vektörler (integrase-deficient lentiviral vectors; IDLV-OSK'lar) aracılığıyla ve etkinliği artırıcı küçük molekül sodyum butirat desteği ile iPKH'lere yeniden programlanmasını hedefledik. Yöntem: Çalışmamızda, HFF-1 fibroblast hücrelerinin pluripotensiye yeniden programlanması amacıyla, Oct4, Sox2 ve Klf4 transkripsiyonel regülatörlerini kodlayan IDLV-OSK vektörler kullanıldı. Viral vektörün yanı sıra, epigenetik modülatör destek molekül olarak histon deasetilaz inhibitörü olan sodyum butirat protokole dahil edildi. Uygulanan yeniden programlama protokolümüz ile 9-12 gün içinde pasajlanabilir koloniler elde edildi. Elde edilen iPKHler, morfolojik karakterizasyonun yanı sıra hücre yüzeyinde ifade edilen (alkalin fosfataz, Tra-1-81, Tra-1-60) ve nüklear konumlu (Oct4, Klf4, c-myc, Nanog) pluripotensi belirteçlerinin ekspresyonları ile karakterize edildi. Bulgular: Tez çalışmamızda, IDLV-OSK'lar kullanılarak ve histon deasetilaz desteği ile iPKH'ler elde edildi. Elde edilen koloniler, beklenen morfolojik özellikleri sergiledi. Kolonilerde yüzey ve nüklear pluripotensi belirteçlerinin ekspresyonları gösterildi. Sonuç: Çalışmamızda IDLV-OSK vektör sistemi ve sodyum butiratın birlikte kullanıldığı geriye programlama yaklaşımı, farklı hücrelerin etkin ve güvenlilik potansiyeli yüksek bir metodoloji aracılığıyla geriye programlanarak in vitro modelleme ve deneysel terapötik çalışmalarda kullanılma potansiyeli açısından önemlidir.

Özet (Çeviri)

Objective: Induced pluripotent stem cells (iPSCs) possess the remarkable abilities to differentiate into cell types from all three germ layers and to self-renew indefinitely. These features make them highly valuable for in vitro modeling of human biology and gene and cell therapies. However, current methods for iPSC generation are often inefficient and require prolonged culture periods, necessitating improved protocols with enhanced safety and efficacy. In this study, we aimed to reprogram HFF-1 human fibroblasts into iPSCs using integration-deficient lentiviral vectors (IDLV-OSKs) encoding the reprogramming factors Oct4, Sox2, and Klf4, along with sodium butyrate as a supporting small molecule to increase efficiency. Methods: In our study, IDLV-OSK vectors encoding the transcriptional regulators Oct4, Sox2, and Klf4 were used to reprogram HFF-1 fibroblast cells into pluripotency. In addition to the viral vector, the epigenetic modulator sodium butyrate, which is a histone deacetylase inhibitor, was used as a supportive molecule. With our applied reprogramming protocol, colonies suitable for passaging were obtained within 9–12 days. The resulting iPSCs were characterized morphologically and also by the expression of pluripotency markers expressed on the cell surface (alkaline phosphatase, Tra-1-81, Tra-1-60) and those located in the nucleus (Oct4, Klf4, c-Myc, Nanog). Results: We generated iPSCs using IDLV-OSKs with the support of a histone deacetylase inhibitor. The resulting colonies exhibited the expected morphological characteristics. The expression of surface and nuclear pluripotency markers was demonstrated in the colonies. Conclusion: Our findings demonstrate that IDLV-OSK vectors, along with sodium butyrate, constitute an efficient and potentially safe approach for reprogramming human fibroblasts into iPSCs with our protocol. This method holds promise for efficient and safer applications in disease modeling and the development of experimental therapeutic strategies.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    911612

    İnsan fibroblast hücrelerinin viral olmayan taşıyıcı kullanılarak yeniden programlanması ve elde edilen IPSClerin kardiyomiyositlere farklandırılması

    Reprogramming of human fibroblast cells to IPSC using a non-viral carrier and differantiating cardiomyocyte

    HANİFE SEVGİ VARLI MA

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    BiyoteknolojiYıldız Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NELİSA TÜRKOĞLU

  2. Tez No

    560666

    Beyin tümörlerinde uyarılmış pluripotent kök hücre (UPKH)'lerden elde edilmiş nöral kök hücre (NKH) kullanarak terapi yaklaşımları

    Therapeutic approaches using induced pluripotent stem cell (IPS)-derived neural stem cells (NSCS) in brain tumors

    NASTARAN LANGARIZADEH

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2019

    BiyoteknolojiEge Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SİNAN AKGÖL

    YRD. DOÇ. DR. TUĞBA BAĞCI ÖNDER

  3. Tez No

    528009

    Determining the effects of DOT1L interacting proteins on cellular reprogramming

    DOT1L ile etkileşen proteinlerin hücrenin yeniden programlama tekniğine etkilerinin belirlenmesi

    DENİZ UĞURLU ÇİMEN

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2018

    Moleküler TıpKoç Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. TEVFİK TAMER ÖNDER

  4. Tez No

    511519

    Uzun QT sendromlu transgenik ve vahşi tip farelerden pluripotent kök hücre üretilmesi ve kardiyomiyosite farklılaştırılarak hastalık fenotipinin incelenmesi

    Generation of induced pluripotent stem cell derived cardi̇omyocytes from long QT-syndrome mouse model for disease modeling

    GÖKÇE İLAYDA GÖRGÜLÜ SÖZTEKİN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    Tıbbi Biyolojiİstanbul Medipol Üniversitesi

    Tıbbi Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ESRA ÇAĞAVİ

  5. Tez No

    351354

    Pluripotent kök hücre sinyal yolaklarına etki eden kimyasal uyaranlarının değerlendirilmesi

    Evaluation of chemical inducers influencing on pluripotent stem cell signaling pathways

    HAKAN DARICI

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2013

    GenetikSüleyman Demirel Üniversitesi

    Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MERAL ÖNCÜ

Geri Dön