Development of anti-MCAM chimeric antigen receptor T cells
Anti-MCAM kimerik antijen reseptör T hücrelerin geliştirilmesi
- Tez No: 984212
- Danışmanlar: DR. ADAM HURLSTONE
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Onkoloji, Allerji ve İmmünoloji, Moleküler Tıp, Oncology, Allergy and Immunology, Molecular Medicine
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2024
- Dil: İngilizce
- Üniversite: The Unıversıty Of Manchester
- Enstitü: Yurtdışı Enstitü
- Ana Bilim Dalı: Biyolojik Bilimler Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Kanser Biyolojisi Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Arka Plan: Hematolojik kanserlerle elde edilen başarıya kıyasla, katı tümörler için CAR-T hücre tedavileri, yüksek derecede spesifik hedef proteinlerin yokluğu nedeniyle önemli“hedefe yönelik/yanlış hedefe yönelik”toksisitelerle engellenmiştir. CD146 (aynı zamanda MCAM olarak da bilinir), endotel hücreleri, perisitler ve düz kas hücreleri de dahil olmak üzere iyi huylu hücrelerde ekspresyon gösteren bir glikoproteindir. Ancak, tümörlerde zenginleştiği belirlenen ve“tümör-spesifik (ts) CD146”olarak adlandırılan farklı bir konformasyon tespit edilmiştir. Bu çalışmada, özellikle deri ve yumurtalık kanserlerinde yaygın olarak ekspresyon gösteren tsCD146'ya hedeflenerek CAR-T hücrelerinde tümör spesifisitesinin sağlanması amaçlanmıştır. Yöntemler: İlk aşamada, CAR aktivitesi, CD146-pozitif ve CD146-negatif insan deri ve yurmutalık kanseri hücre hatları ile ortak kültürlenmesi sonrası CAR-ekspresyonu gösteren Jurkat hücrelerinde erken aktivasyon belirteci olan CD69 yüzey ekspresyonu kullanılarak akış sitometrisi ile değerlendirilmiştir. Daha sonra, primer CAR-T hücrelerinin etki fonksiyonları, in vitro olarak—hedef hücrelerin bağıl lüminesans aktivitesi ve IFN-gamma ve TNF-alfa salınımı için ELISA testi ile—ve in vivo olarak, CAR-T hücrelerinin derialtı ve intraperitoneal tümör büyümesi üzerindeki etkisi analiz edilmiştir. Bulgular: Birkaç aşamalı protein mühendisliği ile, tümör-zenginleşmiş CD146 izoformuna özgü yanıt veren CAR yapı taşları geliştirilmiştir. Bu CAR yapıları, CD146-pozitif insan deri ve yumurtalık kanseri hücre hatları ile ortak kültür edildiğinde antijen bağımlı olarak Jurkat hücrelerini aktive etmiştir ve pan-CD146 hedefleyen bir CAR ile karşılaştırılabilir sonuçlar göstermiştir. Bu hücre hatlarıyla ortak kültür edilen primer CAR-T hücreleri hem sitotoksik aktivite hem de diğer etki fonksiyonlarını sergilemiştir. In vivo, WM266-4 hücreleriyle nakledilen fareler üzerinde yapılan çalışmalar, CAR-T hücreleri tedavi edilen farelerin, transdüze olmayan T hücreleriyle tedavi edilenlere göre daha az tümör yükü taşıdığını ve daha uzun sağkalım gösterdiğini ortaya koymuştur. Sonuçlar: Anti-tsCD146 antikorunun antijen bağlama bölgesi, bir CAR iskeletine başarıyla entegre edilmiştir. TsCD146 CAR primer T hücrelerinin, CD146-ekspresyon gösteren kanser hücrelerini özel olarak hedefleme yeteneği, katı tümörlerde hedeflenmiş immünoterapi için umut verici bir stratejiyi temsil etmektedir.
Özet (Çeviri)
Background: In comparison to the success observed with haematological cancers, CAR-T cell therapies for solid tumours have been hindered by significant“on-target/off-tumour”toxicities due to the lack of highly specific target proteins. Although CD146 (also known as MCAM) is a glycoprotein expressed on benign cells, including endothelial cells, pericytes, and smooth muscle cells, a distinct conformation has been identified that appears to be enriched in tumours, referred to as tumour-specific (ts) CD146. In this study, we aimed to achieve tumour specificity in CAR-T cells by targeting tsCD146, which is widely expressed in solid tumours, particularly in melanoma and ovarian cancer. Methods: CAR activity was assessed in the first instance using flow cytometry to measure CD69 surface expression, an early activation marker, on CAR-expressing Jurkat cells following co-culture with CD146-positive and CD146-negative human melanoma and ovarian cancer cell lines. The effector functions of primary CAR-T cells were then evaluated both in vitro— through the relative luciferase activity of target cells and by ELISA for IFN-gamma and TNF-alpha secretion after co-culturing—and in vivo by analysing the impact of CAR-T cells on subcutaneous and intraperitoneal tumour growth. Results: Through multiple rounds of protein engineering, we developed CAR constructs that respond specifically to a tumour-enriched CD146 isoform. These CAR constructs demonstrated antigen-dependent activation of Jurkat cells when co-cultured with CD146- positive human melanoma and ovarian cancer cell lines, showing results comparable to those of a CAR targeting pan-CD146. Primary CAR-T cells co-cultured with these cell lines exhibited both cytotoxic activity and other effector functions. In vivo, studies involving mice engrafted with WM266-4 cells revealed that CAR-T cell-treated mice experienced reduced tumour burden and prolonged survival in comparison to those treated with untransduced T cells. Conclusions: We have successfully integrated the antigen-binding domain of an anti-tsCD146 antibody into a CAR scaffold. The capability of tsCD146 CAR primary T cells to specifically target CD146-expressing cancer cells represents a promising strategy for targeted immunotherapy in solid tumours.
Benzer Tezler
- P90RSK inhibitörlerinin anjiyogenez üzerine etkisinin in vitro ve in vivo yöntemleri ile araştırılması
Investigation of the angiogenesis effect of P90RSK inhibitors on invitro and in vivo assays
ŞİMA MERTOL
Doktora
Türkçe
2025
Veteriner Hekimliğiİstanbul Üniversitesi-CerrahpaşaVeterinerlik Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ELİF İLKAY ARMUTAK
PROF. DR. KONSTANINOS DIMAS
- Koca engerek, Macrovipera lebetinus obtusa (dwigubsky, 1832) venomunun kimyasal profil ve biyolojik aktivite yönünden incelenmesi
Investigation of chemical profile and biological activities of blunt-nosed viper, Macrovipera lebetinus obtusa (dwigubsky, 1832) venom
NOOR SUBHEE AZZ-ALDEEN AZZ-ALDEEN
Doktora
Türkçe
2025
Biyolojiİstanbul ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. EBRU GÜREL GÜREVİN
DR. ÖĞR. ÜYESİ HÜLYA TUBA KIYAN
- Piridin türevi içeren bazı geçiş metal komplekslerinin sentezi, elektronik yapı hesaplamaları ve α-glukozidaz inhibisyonları
Synthesis, electronic structure calculations, and α-glucosidase inhibitions of some transition metal complexes containing pyridine derivatives
ÖZGEN ÖZGE
Doktora
Türkçe
2025
Fizik ve Fizik MühendisliğiSakarya ÜniversitesiFizik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. DAVUT AVCI
- Trona mineralinden ticari ölçek soda üretim proseslerinin bilgisayar destekli tasarım ve maliyetlendirilmesi
Computer aided desing and cost estimation model of commercial soda ash production processes from trona mineral
NİLÜFER DURMAZ
- Biyolojik numunelerde anti kanser ilacın elektrokimyasal tespiti için modifiye cam karbon sensör geliştirilmesi
Development of a modified glassy carbon sensor for electrochemical detection of anti-cancer drug in biological samples
GHAZALEH KHOLAFAZADEHASTAMAL