Yonca yaprağından fenil alanin amonyum liyaz enziminin izolasyonu ve kinetik özelliklerinin incelenmesi
Purification of phenylalanine ammonium lyase enzyme from alfalfa leaf and determination of its kinetic properties
- Tez No: 985023
- Danışmanlar: PROF. DR. EMİNE KARAKUŞ, DR. ÖĞR. ÜYESİ ÇİĞDEM BİLEN
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Trifolium pratense, Trifolium pratense
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Yıldız Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Biyokimya Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Bu tez çalışmasında, Fenilalanin amonyum liyaz (PAL) enzimi, yüksek antioksidan özelliklere sahip kırmızı çiçekli yonca bitkisinin (Trifolium.pratense.L.) yapraklarından afinite kromatografisi yöntemi kullanılarak ilk kez saflaştırılmıştır. PAL enziminin kinetik özelliklerinin aydınlatılabilmesi amacıyla karakterizasyon çalışmaları yapılarak maksimum aktivite gösterdiği optimum koşullar belirlenmiştir. Buna göre; PAL aktivite tampon konsantrasyonu, pH seviyesi ve sıcaklık değerleri sırasıyla 0.1 M, 7 ve 25 ˚C olarak belirlenmiştir. Bu tez çalışmasında, Fenilalanin amonyum liyaz (PAL) enzimi, yüksek antioksidan özelliklere sahip kırmızı çiçekli yonca bitkisinin (Trifolium.pratense.L.) yapraklarından afinite kromatografisi yöntemi kullanılarak ilk kez saflaştırılmıştır. PAL enziminin kinetik özelliklerinin aydınlatılabilmesi amacıyla karakterizasyon çalışmaları yapılarak maksimum aktivite gösterdiği optimum koşullar belirlenmiştir. Buna göre; PAL aktivite tampon konsantrasyonu, pH seviyesi ve sıcaklık değerleri sırasıyla 0,1 M, 7 ve 25 ˚C olarak belirlenmiştir. Enzimin L- fenilalanin (L-Phe) substratı için Vmax ve KM kinetik sabitleri, sırasıyla 0,97 EU ve 0,68 mM olarak belirlenmiştir. Bütün kinetik çalışmalar, spektrofotometrik olarak 283 nm dalga boyunda yapılmıştır. Afinite kromatografisi ile saflaştırılan PAL enziminin SDS-PAGE analiz sonucuna göre 45 kDa civarında belirgin ve tek bir bant oluşumu gözlenmiştir. Sefaroz-4B-L-tirozin-4-aminosinnamik asit (S-4B-TACA) çalışmamızda ilk kez sentezlenmiş ve afinite jeli olarak kullanılmıştır. PAL enzimi, S-4B-TACA jeli kullanılarak 19,4 saflaştırma katsayısı ile saflaştırılmıştır. Kırmızı yonca yapraklarından PAL enziminin afinite kromatografisi ile saflaştırılması ve S-4B-TACA afinite jelinin sentez çalışmalarına literatürde rastlanmamıştır. PAL enziminin yaklaşık beş hafta boyunca yüksek enzim aktivitesini koruyabilme yeteneği çok çeşitli endüstriyel uygulamalarda potansiyel kullanımına olanak sağlamaktadır. Ayrıca, bu sonuç kırmızı çiçekli yonca yaprağından izole edilen PAL (RCL-PAL) enzimlerinin çeşitli immobilizasyon ve biyosensör çalışmalarında kullanımını da desteklemektedir.
Özet (Çeviri)
In this thesis study, phenylalanine ammonia lyase (PAL) enzyme was purified for the first time from the leaves of red-flowered clover (Trifolium pratense L.), which has high antioxidant properties, using affinity chromatography. In order to elucidate the kinetic properties of PAL enzyme, characterization studies were carried out to determine the optimum conditions for maximum activity. Accordingly, PAL activity buffer concentration, pH level, and temperature were determined as 0.1 M, 7, and 25 ˚C, respectively. Vmax and KM kinetic constants of the enzyme for L-phenylalanine (L-Phe) substrate were determined as 0.97 EU and 0.68 mM, respectively. All kinetic studies were carried out spectrophotometrically at a wavelength of 283 nm. According to the SDS-PAGE analysis of the PAL enzyme purified by affinity chromatography, the formation of a distinct and single band around 45 kDa was observed. Sepharose-4B-L-tyrosine-4-aminocinnamic acid (S-4B-TACA) affinity gel was synthesized and used as the novel affinity gel in our study. PAL enzyme was purified with a purification coefficient of 19.4 using the S-4B-TACA gel. Studies on the purification of PAL enzyme from red clover leaves by affinity chromatography and the synthesis of S-4B-TACA affinity gel have not been studied in literature yet. The ability of PAL to maintain high enzymatic activity for approximately five weeks provides opportunities for its potential application in various industrial processes. Moreover, this finding supports the utilization of PAL isolated from red clover leaf (RCL-PAL) enzymes in diverse immobilization strategies and biosensor studies.
Benzer Tezler
- Yonca silajına farklı seviyelerde ilave edilen kurutulmuş akasya ağacı (Robinia pseudoacacia) yaprakları ve melasın silaj kalitesi, in vitro rumen fermantasyonu, metan üretimi ve ham besin madde sindirilebilirliği üzerine etkileri
Effects of different levels of acacia (Robinia pseudoacacia) tree leaves and molasses on alfalfa silage quality, in vitro rumen fermentation, methane production and nutrient digestibility
MAHMOOD UL HASSAN MAHMOOD UL HASSAN
Yüksek Lisans
İngilizce
2023
Veteriner HekimliğiAtatürk ÜniversitesiHayvan Besleme ve Beslenme Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET GÜL
- Bazı kaba yemlere farklı seviyelerde ilave edilen söğüt (Salix alba) yaprağının in vitro metan üretimi üzerine etkisinin araştırılması
Investigating the effect of willow tree (Salix alba) leafs added at different levels to some roughages on in vitro methane production
AHMET ORUÇ
Yüksek Lisans
Türkçe
2016
Veteriner HekimliğiHarran ÜniversitesiHayvan Besleme ve Beslenme Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET AVCI
- Farklı seviyelerde okaliptus (Eucalyptus camaldulensis) yaprağının bazı kaba yemlerin in vitro metan gazı üretimi üzerine etkisinin araştırılması
Effect of levels eucalyptus (Eucalyptus camaldulensis) leaf on in vitro methane production of some roughages
EYYÜP AKÇİL
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
Veteriner HekimliğiHarran ÜniversitesiHayvan Besleme ve Beslenme Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NİHAT DENEK
- Yonca(Medicago sativa L.)bitkisinin hidrojenle zenginleştirilmiş su ile yıkanmasının yıkama suyuna geçen ağır metal içeriğine etkisi
The effect of washing the alfalfa (Medicago sativa L.) plant with hydrogen-enriched water on the heavy metal content transferred to the washing water
FATMA NUR BEDİR
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
BiyomühendislikIğdır ÜniversitesiBiyomühendislik ve Bilimleri Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)
PROF. DR. DUREYT VEZİROĞLU
DR. ÖĞR. ÜYESİ YASEMİN ÇELEBİ
- Kuzularda rasyona farklı düzeylerde katılan domates serası budama artıklarının bazı biyokimyasal, fizyolojik ve oksidatif stres parametreleri üzerine etkilerinin araştırılması
Investigation of the effects of tomato greenhouse pruning by-products added to the ration at different levels on some biochemical, physiological and oxidative stress parameters in lambs
BEYZA AYDOĞAN
Doktora
Türkçe
2022
Veteriner HekimliğiAfyon Kocatepe ÜniversitesiVeteriner Biyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ABDURRAHMAN FATİH FİDAN
DOÇ. DR. ALİ ÇALIK