İnsan A549 hücreleri̇nde epi̇teli̇yal-mezenşi̇mal geçi̇şte fokal adezyon ki̇nazlarin rolü
The role of focal adhesion kinases in epithelial-mesenchymal transition in human A549 cells
- Tez No: 992249
- Danışmanlar: PROF. DR. FÜSÜN ÖZTAY
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2025
- Dil: Türkçe
- Üniversite: İstanbul Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Epiteliyal-mezenşimal geçiş (EMT), alveolar epiteliyal hücrelerinin miyofibroblastlara farklılaşmasını sağlayarak pulmoner fibrozis (PF) gelişime katkı sağlar. Çeşitli büyüme faktörleri, profibrotik sitokinler (TGF-β) ve ECM'de biriken kollagen, hücre içi fokal adezyon kinazları (FAK) aktive ederek, hücrenin proliferasyonu, farklılaşması ve sağ kalımını kontrol ederler. FAK'lar, ayrıca, EMT sürecinin yönetilmesinde de önemli rol oynarlar. Bu nedenle, FAK'ların aktivitesinin kontrolü, EMT ve EMT ile ilişkili patolojik süreçlerin (fibrotik yanıt, kanser progressiyonu ve metastaz gibi) regülasyonu ve önlenmesi açısından önemlidir. Son yıllarda, hedef moleküllerin aktivitesinin durdurulması için inhibitör kullanıma alternatif olarak daha güçlü bir yanıt sağlayan hedef proteini yıkan moleküllerin kullanımı denenmektedir. BI-3663, yeni bir FAK yıkıcısı olarak kullanılmaya başlanmıştır. BI-3663'ün EMT ve fibrotik yanıtın durdurulmasında etkili olup olmadığı henüz test edilmemiştir. Bu amaçla, çalışmamızda, yeni sentezlenen FAK yıkıcısı BI-3663'ün insan A549 hücrelerinde EMT'nin durdurulmasına yönelik etkisinin araştırılması amaçlanmaktadır. Çalışmada, A549 hücrelerinden dört çalışma grubu oluşturuldu: (I) Medyum ile uyarıldıktan 24, 48 ve 72 saat sonra toplanan A549 hücreleri (Kontrol grup); (II) BI-3663 ile uyarıldıktan 24, 48 ve 72 saat toplanan A549 hücreleri, (III) TGF-β ile uyarıldıktan 24, 48 ve 72 saat toplanan A549 hücreleri ve (IV) TGF-β+ BI-3663 ile uyarıldıktan 24, 48 ve 72 saat sonra toplanan A549 hücreleri. TGF-β uygulamaları özellikle deneyin 48 ve 72. saatlerinde A549 hücrelerinde E-kaderin protein miktarının azalmasına neden olurken (p<0,05), α-SMA (p<0,05 ve p<0,01), kollagen (p<0,05), fibronektin (p<0,01), FAK (p<0,01 72 saat için), pFAK (p<0,01 72 saat için), ve Kaiso (p<0,001 ve p<0,05) protein miktarlarını arttırdı. TGF-β+BI-3663 uygulamalarının deneyin 24. saatinden itibaren A549 hücrelerinde pFAK seviyesini (p<0,01) ve deneyin 48. saatinden itibaren de pFAK/total FAK oranının (p<0,05) düşürdüğü, deneyin 72. saatinde total FAK ve pFAK seviyesinde azalmanın ve düşük düzeyde FAK aktivasyonun kritik seviyeye getirdiği saptandı (p<0,05). İlaveten, TGF-β+BI-3663 uygulamaları α-SMA, kollagen, fibronektin ve Kaiso seviyelerini azalttı (p<0,05 ve p<0,01). Ancak, E-kaderin protein miktarını arttırmada başarılı olamadı. Buna göre, BI-3663, TGF-β ile uyarılan A549 hücrelerinde FAK yıkımını sağlayarak EMT aracılı miyofibroblast farklılaşmasını gerileten etkili bir PROTAC tabanlı FAK yıkıcısı olduğunu söyleyebiliriz.
Özet (Çeviri)
Epithelial-mesenchymal transition (EMT) contributes to the development of pulmonary fibrosis (PF) by enabling the differentiation of alveolar epithelial cells into myofibroblasts. Various growth factors, profibrotic cytokines (TGF-β), and collagen accumulated in the ECM activate intracellular focal adhesion kinases (FAK), controlling cell proliferation, differentiation, and survival. FAKs also play an important role in managing the EMT process. Therefore, controlling FAK activity is important for the regulation and prevention of EMT and EMT-related pathological processes (such as fibrotic response, cancer progression, and metastasis). In recent years, the use of molecules that degrade target proteins, providing a stronger response than the use of inhibitors to stop the activity of target molecules, has been attempted. BI-3663 has begun to be used as a new FAK degrader. The effectiveness of BI-3663 in inhibiting EMT and the fibrotic response has not yet been tested. To this end, our study aims to investigate the effect of the newly synthesized FAK disrupter BI-3663 on the inhibition of EMT in human A549 cells. In the study, four experimental groups were created from A549 cells: (I) untreated A549 cells (Control group); (II) A549 cells stimulated with TGF-β (5 ng/mL), (III) A549 cells treated with BI-3663 (50 nM) (IV) A549 cells treated with TGF-β+BI-3663. All cells were collected at 24, 48, and 72 h. TGF-β caused a decrease in E-cadherin protein levels in A549 cells, particularly at 48 and 72 h (p<0.05), while it increased α-SMA (p<0.05 and p<0.01), collagen (p<0.05), fibronectin (p<0.01), FAK (p<0.01 at 72 h), pFAK (p<0.01 at 72 h), and kaiso (p<0.001 and p<0.05) protein levels. TGF-β+BI-3663 treatments reduced pFAK levels (p<0.01) from the 24th hour of the experiment and pFAK/total FAK ratio (p<0.05) from the 48th hour of the experiment in A549 cells. Decreased total FAK and pFAK levels and reduced FAK activation were a critical level (p<0.05) at 72h. Additionally, TGF-β+BI-3663 treatments reduced α-SMA, collagen, fibronectin, and kaiso levels (p<0.05 and p<0.01). However, it failed to increase E-cadherin protein levels. Accordingly, BI-3663 can be considered an effective PROTAC-based FAK degrader that suppresses EMT-mediated myofibroblast differentiation by promoting
Benzer Tezler
- İzmir'de Mustafa Kemal Bulvarı'nın peyzaj mimarlığı açısından etüdü ve peyzaj projesi
Başlık çevirisi yok
ENGİN ALPARSLAN
- Çukurova bölgesinde biyoklimatik veriler kullanılarak açık ve yeşil alan sistemlerinin belirlenmesi ilkeleri üzerinde bir araştırma
A research on the determination of the principles in open and green spaces systems by using the bioclimatic data in Çukurova region
MEHMET FARUK ALTUNKASA
- Konut bölgelerinde parsel düzeni uygulamasının kent topraklarının rasyonel kullanımı çerçevesinde mimari açıdan değerlendirilmesi
An Architeet's Criticism of the Currently Practised method of plot formation in residential areas from the point of View of rational utilization of urban deatories
SUZAN ESİRGEN
- Ankara-Kızılcahamam karayolunda meydana gelen trafik kazalarında insan faktörü
Başlık çevirisi yok
CELAL AKBULUT
Yüksek Lisans
Türkçe
1987
Gazi ÜniversitesiKazaların Çevresel ve Teknik Araştırması Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)
Yükleniyor...