İnce tabaka kromatografisinde tekrarlı yürütme tekniğiyle fosfolipid ölçümünün validasyonu
Validation of phospholipid measurement by thin-layer chromatography using the repeated development technique
- Tez No: 1005369
- Danışmanlar: PROF. DR. ÖZGÜR KAYNAR
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Veteriner Hekimliği, Veterinary Medicine
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2026
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Kastamonu Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Veterinerlik Biyokimyası Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Fosfolipidler, hücre zarlarının temel yapısal bileşenleri olmalarının yanı sıra membran akışkanlığı, hücresel sinyal iletimi, enerji metabolizması ve apoptoz gibi birçok biyolojik süreçte görev alan önemli biyomoleküllerdir. Bu nedenle biyolojik örneklerde total fosfolipid miktarının doğru ve güvenilir yöntemlerle belirlenmesi büyük önem taşımaktadır. Günümüzde toplam fosfolipid tayininde enzimatik-kolorimetrik spektrofotometrik yöntemler yaygın olarak kullanılmakla birlikte, daha düşük maliyetli ve çoklu örnek analizine uygun alternatif yöntemlere ihtiyaç duyulmaktadır. İnce tabaka kromatografisi (TLC), uygun optimizasyon ve densitometrik değerlendirme ile bu amaçla kullanılabilecek yöntemlerden biridir. Bu çalışmada, biyolojik örneklerde total fosfolipid miktarının tayininde kullanılan enzimatik-kolorimetrik spektrofotometrik yöntem ile TLC tabanlı densitometrik yaklaşımın analitik uyumu değerlendirilmiştir. Referans yöntem olarak 570 nm'de ölçüm veren ticari bir fosfolipid analiz kitine dayalı spektrofotometrik yöntem kullanılmış, alternatif yöntem olarak ise silika jel 60 TLC plakaları üzerinde gerçekleştirilen, developing ve CuSO₄-fosforik asit temelli charring sonrası bant yoğunluklarının görüntü analizi ile değerlendirildiği bir yaklaşım uygulanmıştır. Çalışmanın ilk aşamasında, TLC analizinde eter ile iki aşamalı developing işleminin etkisi incelenmiştir. Developing uygulanmış plakalarda fosfolipid bantlarının daha keskin, kompakt ve birbirinden daha net ayrıldığı gözlenmiştir. Ayrıca standart miktarındaki artışa paralel olarak bant yoğunluğunda düzenli bir artış elde edilmiştir. Buna karşılık developing uygulanmamış plakalarda bantların daha yaygın, bulanık ve düzensiz olduğu belirlenmiştir. Densitogram sonuçları da bu gözlemleri desteklemiş ve developing işleminin güvenilir kantitatif analiz açısından kritik olduğunu göstermiştir. Yöntem karşılaştırma analizinde toplam 50 eşleştirilmiş ölçüm değerlendirilmiştir. Passing-Bablok regresyon analizinde elde edilen denklem TLC = 0,1134 + 0,9869 × Spektroskopi şeklinde bulunmuştur. Regresyon eğiminin 0,9869 olması ve %95 güven aralığının 0,9435–1,0318 arasında yer alması, yöntemler arasında belirgin oransal sapma bulunmadığını göstermiştir. Kesişim değeri 0,1134 olup %95 güven aralığının -0,0045 ile 0,1951 arasında olması, belirgin sabit bias bulunmadığını ortaya koymuştur. Bu sonuçlar, TLC ile spektroskopi arasında iyi düzeyde doğrusal uyum bulunduğunu göstermektedir. Bland-Altman analizinde, TLC - Spektroskopi farklarının ortalaması 0,0757 olarak hesaplanmıştır. Bu bulgu, TLC ölçümlerinin spektrofotometrik ölçümlere göre ortalama olarak hafif düzeyde daha yüksek sonuç verme eğiliminde olduğunu göstermektedir. Farkların standart sapması 0,2524; %95 uyum sınırları ise -0,4190 ile 0,5704 arasında bulunmuştur. Analize dahil edilen 50 ölçümün yalnızca 3'ünün (%5,9) bu sınırların dışında kalması, yöntemler arasında pratik açıdan kabul edilebilir uyum bulunduğunu göstermiştir. Ayrıca Bland-Altman regresyonunda eğimin 0,00372 ve p değerinin 0,8803 olması, farkların ölçüm büyüklüğüne bağlı olarak sistematik biçimde değişmediğini ortaya koymuştur. Sonuç olarak, TLC tabanlı densitometrik yaklaşımın total fosfolipid tayininde spektrofotometrik yöntem ile yüksek düzeyde uyum gösterdiği belirlenmiştir. Özellikle eter ile iki aşamalı developing işleminin ayrım kalitesini ve densitometrik değerlendirmeyi belirgin şekilde iyileştirdiği saptanmıştır. Elde edilen bulgular, TLC yönteminin uygun kalibrasyon ve standardizasyon ile total fosfolipid analizinde alternatif veya tamamlayıcı bir yöntem olarak kullanılabileceğini göstermektedir.
Özet (Çeviri)
Phospholipids are important biomolecules that serve not only as the main structural components of cell membranes but also play critical roles in membrane fluidity, cellular signaling, energy metabolism, and apoptosis. Therefore, the accurate and reliable determination of total phospholipid levels in biological samples is of great importance. Although enzymatic-colorimetric spectrophotometric methods are widely used for total phospholipid quantification, there is still a need for alternative methods that are less costly and more suitable for the simultaneous analysis of multiple samples. Thin-layer chromatography (TLC), when combined with appropriate optimization and densitometric evaluation, may serve as such an alternative approach. In this study, the analytical agreement between an enzymatic-colorimetric spectrophotometric method and a TLC-based densitometric approach for the determination of total phospholipid levels in biological samples was evaluated. The reference method was a commercial phospholipid assay kit measured at 570 nm, whereas the alternative method was based on densitometric analysis of band intensities obtained after developing and CuSO₄-phosphoric acid charring on silica gel 60 TLC plates. In the first stage of the study, the effect of a two-step ether developing process on TLC analysis was examined. Plates subjected to developing showed sharper, more compact, and better-resolved phospholipid bands. In addition, band intensity increased regularly with increasing phospholipid amount. In contrast, plates without developing displayed broader, more diffuse, and irregular bands. Densitogram results supported these observations and demonstrated that the developing step was critical for reliable quantitative analysis. A total of 50 paired measurements were included in the method comparison analysis. Passing-Bablok regression yielded the equation TLC = 0.1134 + 0.9869 × Spectrophotometry. The regression slope was 0.9869, with a 95% confidence interval of 0.9435-1.0318, indicating no significant proportional bias between the two methods. The intercept was 0.1134, with a 95% confidence interval of -0.0045 to 0.1951, demonstrating the absence of significant constant bias. These findings indicated a good linear agreement between TLC and spectrophotometry. In the Bland-Altman analysis, the mean difference (TLC - Spectrophotometry) was calculated as 0.0757, indicating that TLC measurements tended to yield slightly higher values on average than the spectrophotometric method. The standard deviation of the differences was 0.2524, and the 95% limits of agreement ranged from -0.4190 to 0.5704. Only 3 of the 50 measurements (5.9%) fell outside these limits, supporting an acceptable practical agreement between the two methods. Furthermore, the Bland-Altman regression slope was 0.00372 with a p value of 0.8803, indicating that the differences did not change systematically with increasing concentration. In conclusion, the TLC-based densitometric approach showed a high level of agreement with the spectrophotometric method for total phospholipid determination. In particular, the two-step ether developing process significantly improved separation quality and densitometric evaluation. These findings indicate that, with proper calibration and standardization, TLC may be used as an alternative or complementary method for total phospholipid analysis.
Benzer Tezler
- Gıda ürünlerinde şeker yerine kullanılan doğal ve sentetik maddelerin analizi için yeni yöntem geliştirmek
Investigation of new methods for the analysis of natural and synthetic compounds used as sugar substitutes in foods
MUHARREM YILMAZ
- İnce tabaka kromatografisinde yeni bir teknikle kırmızıbiberde aflatoksin tayini
Determination of aflatoxins in red pepper by a new thin layer chromatography tecnique
TÜRKAN KARAKAŞ
Yüksek Lisans
Türkçe
2014
Gıda MühendisliğiYüzüncü Yıl ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. FİKRET NAFİ ÇOKSÖYLER
- Bazı bazik ilaç maddelerinin ince tabaka kromatografisi yardımıyla analizi ve biyolojik matriksin analize etkisinin incelenmesi
Başlık çevirisi yok
R.SEMA AYDEMİR
Yüksek Lisans
Türkçe
1989
Eczacılık ve FarmakolojiMarmara ÜniversitesiFarmasötik Toksikoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. F. ÖMER ERSOY
- Farklı fiziksel koşullar altında kalan belgeler üzerindeki mavi tükenmez kalem kürekkeplerinin spektroskopik yöntemler ve ince tabaka kromatografisiyle analizi
An analysis of blue ballpoint inks on documents that are subjected to different physical conditions by spectroscopic methods and thin layer chromatography
ÖZLEM KARSLI
Yüksek Lisans
Türkçe
2005
Adli TıpAnkara ÜniversitesiKriminalistik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. HATİCE KÖKTEN
- The Analysis of platinum metals in platinum catalysts by thin layer chromotography
İnce tabaka kromatografisi ile platin katalizörlerindeki platin metallerinin analizi
MELEK MERDİVAN
