Geri Dön

Brucella alt birim aşısının geliştirilmesi için brucella OMP25 proteininin tütün bitkisindeagrobacterium aracılığıyla ekspresyonu

Development of the brucella subunit vaccine by expression of brucella OMP25 protein intobacco plant via agrobakterium-mediated transformation

PDF İndir

  1. Tez No: 1011845
  2. Yazar: MANSOURE QASHQAI
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. ŞENAY VURAL KORKUT, PROF. DR. SEMİHA ERİŞEN
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyoloji, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Brusella, Brusella aşısı, Brusella-abortus, Brucella, Brucella vaccine, Brucella-abortus
  7. Yıl: 2026
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Yıldız Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Bilim Dalı
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

Bruselloz, Brucella türlerinin neden olduğu zoonotik bir hastalık olup gelişmekte olan ülkelerde yaygın olarak görülmektedir. Hayvanlarda üreme bozuklukları, süt veriminde azalma ve kısırlık gibi ekonomik kayıplara yol açmaktadır. Günümüzde bruselloz kontrolünde kullanılan canlı zayıflatılmış aşılar, insanlarda patojenite riski taşımakta ve hayvanlarda düşük, orşit ve kısırlık gibi yan etkilere neden olabilmektedir. Ayrıca, enfekte hayvanları aşılanmış hayvanlardan ayırt etmek serolojik testlerle zor olmaktadır. Bu nedenlerle, daha güvenli ve etkili aşıların geliştirilmesine ihtiyaç duyulmaktadır. Bu çalışmada, B. abortus dış zar proteini OMP25'in tütün bitkilerinde ekspresyonu sağlanarak transgenik bir bitki modeli oluşturulmuştur. Yüksek immünojenisiteye sahip ve korunmuş bir transmembran protein olan OMP25, Boundary Pairing (BP) reaksiyonu ile Gateway pDONR vektörüne klonlanmış ve Left-Right (LR) reaksiyonu kullanılarak bir binary hedef vektöre transfer edilmiştir. Hedef vektör, Agrobacterium tumefaciens'e aktarılmış ve ardından Agrobacterium aracılığıyla tütün bitkilerine transformasyon yapılmıştır. Transgenik bitkiler, kanamisin içeren selektif ortamda seçilmiş ve yeşil flüoresan protein (GFP) floresansı kullanılarak transgen ifadesi doğrulanmıştır. Seçici ortamda mikrokalus oluşumu ve sürgün gelişimi, kanamisin direncini ve transgen entegrasyonunu başarılı bir şekilde doğrulamıştır. Fenotipik seleksiyonun ardından seçilen transgenik bitkilerden genomik DNA izole edilmiş ve bu DNA, OMP25 genine özgü primerler kullanılarak Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PZR) ile analiz edilmiştir. Pozitif PZR sonuçları, OMP25 geninin bitki genomuna başarılı şekilde entegre edildiğini doğrulamıştır. Gen ekspresyonu, RNA düzeyinde gerçek zamanlı kantitatif PCR (qRT-PCR) ve protein düzeyinde Western blot analizi ile kapsamlı şekilde doğrulanmıştır. Elde edilen bulgular, B. abortus'a karşı daha güvenli, enjeksiyon gerektirmeyen, düşük maliyetli ve hem sistemik hem de mukozal immün yanıtı indükleyebilen yenilebilir aşı geliştirilmesi için güçlü bir temel ortaya koymaktadır.

Özet (Çeviri)

Brucellosis is a zoonotic disease caused by Brucella species, with a high prevalence in developing countries. It results in significant economic losses in livestock due to reproductive disorders, decreased milk yield, and infertility. Currently, live attenuated vaccines used for brucellosis control pose a pathogenicity risk to humans and may lead to adverse effects, including low fertility and orchitis, in animals. Additionally, distinguishing between infected and vaccinated animals through serological tests remains challenging. Therefore, there is a pressing need for the development of safer and more effective vaccines. In this study, a transgenic plant model was developed for the expression of B. abortus outer membrane protein OMP25 in N. tabacum (tobacco) plants. The OMP25 gene, a conserved and highly immunogenic transmembrane protein, was cloned into a Gateway pDONR vector via Boundary Pairing (BP) reaction and subsequently transferred to a binary destination vector through the Left-Right (LR) reaction. The recombinant vector was introduced into Agrobacterium tumefaciens, which was then employed for Agrobacterium-mediated transformation of tobacco plants. Transgenic plants were selected on kanamycin-containing selective media, and transgene expression was confirmed using green fluorescent protein (GFP) fluorescence. Microcallus formation and shoot development in selective media validated kanamycin resistance and successful transgene integration. After phenotypic selection, genomic DNA was extracted from transgenic plants and analyzed by Polymerase Chain Reaction (PCR) using primers specific to the OMP25 gene. Positive PCR results confirmed the successful integration of the OMP25 gene into the plant genome. Gene expression was further confirmed at the RNA level using real-time quantitative PCR (qRT-PCR) and at the protein level through Western blot analysis. The findings provide a strong foundation for the development of an edible vaccine against B. abortus that is safer, does not require injection, is cost-effective, and is capable of inducing both systemic and mucosal immune responses.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    443704

    Konjunktival brusella aşısının koyunlarda bazı biyokimyasal parametre düzeylerine etkisi

    Effect of the conjunctival brucella vaccine on some biochemical parameters in sheep

    ÖZKAN YİĞİT

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    Veteriner HekimliğiOndokuz Mayıs Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. GÜLAY ÇİFTCİ

  2. Tez No

    260111

    Brucella seropozitif hastalarda serum antikor titreleri ile bazı yangısal ve biyokimyasal parametrelerin karşılaştırılması

    Comparison of some inflammatory and biochemical parameters with respect to serum antibody titers among brucella seropositive patients

    BERRİN PANCARCI

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2010

    BiyokimyaKafkas Üniversitesi

    Veterinerlik Mikrobiyolojisi Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. AHMET ÜNVER

  3. Tez No

    473996

    Brucella tanısında coombs testinin yeri

    The importance of coombs test in brucella

    ORHAN TURAN

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    MikrobiyolojiGaziantep Üniversitesi

    Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. TEKİN KARSLIGİL

  4. Tez No

    471471

    Brucella ve alfa-proteobacterıa grubuna ait bazı bakteri cinsleri arasındaki serolojik çapraz reaksiyonların brusellozun serolojik tanısında potansiyel uygulanabirliği yönünden araştırılması

    Evaluation of usage serological cross-reactivities between brucella and some bacterial genera of alpha-proteobacteria in serologic diagnosis of brucellosis

    AHMET SELMAN MIZRAKLIDAĞ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    MikrobiyolojiHarran Üniversitesi

    Veterinerlik Mikrobiyolojisi Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. SEVİL ERDENLİĞ GÜRBİLEK

  5. Tez No

    833655

    Türkiye'nin çeşitli bölgelerindeki ruminantlardan izole edilen Brucella türlerinin tüm genom dizileme temelli analizi

    Whole genome sequencing based analysis of Brucella species isolated from ruminants in various regions of Türkiye

    SONGÜL ÖTKÜN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    Veteriner HekimliğiHarran Üniversitesi

    Veterinerlik Mikrobiyolojisi Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SEVİL ERDENLİĞ GÜRBİLEK

Geri Dön