Nikotinamid mononükleotid aracılı insülin duyarlılığında rol oynayan miRNA ekspresyon seviyelerinin belirlenmesi
Determination of miRNA expression levels involved in NMN-mediated insulin sensitivity
- Tez No: 1013726
- Danışmanlar: DOÇ. DR. MUSTAFA ÖRKMEZ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2026
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Gaziantep Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Tıbbi Biyokimya Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Amaç: Bu çalışmada, pankreatik beta hücrelerinde Nikotinamid Mononükleotid (NMN) aracılı insülin duyarlılığı ile ilişkili olduğu bilinen miR-29a-3p ve miR-29b-3p mikroRNA'larının ekspresyon düzeylerinin belirlenmesi amaçlanmıştır. Ayrıca bu mikroRNA'ların insülin sekresyonu üzerindeki potansiyel düzenleyici rollerinin ortaya konulması ve bu etkinin hücre kültür ortamının glukoz içeriğine bağlı olarak değişip değişmediğinin değerlendirilmesi hedeflenmiştir. Gereç ve Yöntem: Çalışmada RIN-5F sıçan pankreatik beta hücre hattı kullanılmıştır. Hücreler standart glukoz içeriğine sahip RPMI-1640 ve yüksek glukozlu DMEM besiyerlerinde kültüre edilmiştir. Deney gruplarında hücreler farklı konsantrasyonlarda NMN ile 24 saat süreyle muamele edilmiştir. Hücre canlılığı, NMN'nin olası sitotoksik etkilerini dışlamak amacıyla MTT testi ile değerlendirilmiştir. Hücre süpernatantlarındaki insülin düzeyleri Sandwich ELISA yöntemi kullanılarak kantitatif olarak ölçülmüştür. Total RNA izolasyonu sonrası mikroRNA ekspresyon analizleri gerçekleştirilmiş; miR-29a-3p ve miR-29b-3p düzeyleri U6 snRNA'ya normalize edilerek RT-qPCR yöntemi ile belirlenmiştir. Elde edilen veriler istatistiksel olarak analiz edilerek gruplar arası farklılıklar değerlendirilmiştir. Bulgular: NMN'nin insülin sekresyonu üzerindeki etkisinin kültür ortamına bağlı olarak değiştiği saptanmıştır. RPMI-1640 ortamında 1.25 mM NMN uygulaması insülin düzeylerinde kontrol grubuna kıyasla istatistiksel olarak anlamlı artış sağlamıştır (p<0.05). Buna karşılık DMEM ortamında yalnızca en yüksek doz olan 10 mM NMN anlamlı etki göstermiştir (p<0.05). RT-qPCR sonuçları, RPMI-1640 koşullarında NMN'nin miR-29a-3p ve miR-29b-3p ekspresyonunu doza bağlı olarak anlamlı biçimde baskıladığını göstermiştir (p<0.001). DMEM ortamında ise bu baskılanma daha sınırlı düzeyde kalmıştır. Sonuç: Bulgular, NMN uygulamasının pankreatik beta hücrelerinde insülin sekresyonunu ve miR-29 ailesi ekspresyonunu kültür ortamının glukoz içeriğine bağlı olarak modüle ettiğini göstermektedir. Düşük doz NMN'nin özellikle daha düşük glukoz içeriğine sahip RPMI koşullarında insülin sekresyonunu artırması, miR-29 ailesinin beta hücre fonksiyonları üzerindeki olası negatif düzenleyici rolü ile ilişkili olabilir. Bu durum, hücresel enerji metabolizması ile mikroRNA aracılı gen düzenlenmesi arasında çift yönlü bir etkileşim olabileceğini düşündürmektedir. Elde edilen bulgular, NMN'nin diyabet tedavisine yönelik potansiyel bir metabolik düzenleyici olabileceğini desteklemekte; ancak bu etkinin doz, glukoz düzeyi ve hücresel metabolik durum gibi faktörlere güçlü biçimde bağlı olduğu anlaşılmaktadır. Bu nedenle, NMN'nin terapötik kullanım potansiyelinin netleştirilmesi için farklı hücre modelleri ve in vivo çalışmalarla desteklenen ileri düzey araştırmalara ihtiyaç duyulmaktadır.
Özet (Çeviri)
Abstract Objective: This study aimed to determine the expression levels of microRNAs miR-29a-3p and miR-29b-3p, which are known to be associated with nicotinamide mononucleotide (NMN)–mediated insulin sensitivity in pancreatic beta cells. In addition, we sought to investigate the potential regulatory roles of these microRNAs on insulin secretion and to evaluate whether these effects vary depending on the glucose content of the culture medium. Materials and Methods: The RIN-5F rat pancreatic beta cell line was used in this study. Cells were cultured in RPMI-1640 medium containing standard glucose levels and in high-glucose DMEM. Experimental groups were treated with different concentrations of NMN for 24 hours. Cell viability was assessed using the MTT assay to exclude possible cytotoxic effects of NMN. Insulin levels in the culture supernatants were quantitatively measured using a sandwich ELISA method. Following total RNA isolation, microRNA expression analyses were performed. The expression levels of miR-29a-3p and miR-29b-3p were determined by RT-qPCR and normalized to U6 snRNA. The obtained data were statistically analyzed to evaluate differences between groups. Results: The effect of NMN on insulin secretion was found to be dependent on the culture medium. In RPMI-1640 medium, treatment with 1.25 mM NMN resulted in a statistically significant increase in insulin levels compared to the control group (p<0.05). In contrast, in DMEM medium, only the highest NMN concentration (10 mM) produced a significant effect (p<0.05). RT-qPCR results demonstrated that NMN significantly suppressed the expression of miR-29a-3p and miR-29b-3p in a dose-dependent manner under RPMI-1640 conditions (p<0.001). In DMEM, this suppression was more limited. Conclusion: The findings demonstrate that NMN treatment modulates insulin secretion and miR-29 family expression in pancreatic beta cells in a manner dependent on the glucose content of the culture environment. The observation that low-dose NMN enhances insulin secretion particularly under lower-glucose RPMI conditions may be associated with the potential negative regulatory role of the miR-29 family in beta cell function. This suggests the presence of a bidirectional interaction between cellular energy metabolism and microRNA-mediated gene regulation. The obtained results support the notion that NMN may act as a potential metabolic regulator for diabetes therapy; however, its effects appear to be strongly influenced by factors such as dosage, glucose concentration, and the metabolic status of the cells. Therefore, further advanced studies using different cell models and in vivo experimental systems are needed to clarify the therapeutic potential of NMN.
Benzer Tezler
- Nikotinamid mononükleotid ve nikotiamid ribozid ile mitokondriyal stres inhibisyonunun DHEA ile indüklenmiş polikistik over sendromlu ratlarda anovulasyon üzerine etkilerinin araştırılması
Investigation of the effects of mitochondrial stress inhibition with nicotinamide mononucleotide and nicothiamide riboside on anovulation in DHEA-induced polycystic ovary syndrome rats
ZELİHA YETİM
Doktora
Türkçe
2021
Histoloji ve EmbriyolojiAtatürk ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. OSMAN NURİ KELEŞ
- Nikotinamid mononükleotid (NMN) ve nikotinamid ribozid (NR) ile mitokondriyal stres inhibisyonunun orta yaşlı sıçanlarda anovulasyon üzerine etkilerinin araştırılması
Investigation of effects of mitochondrial stress inhibition by nicotinamide mononucleotide (NMN) and nicotinamide riboside (NR) on anovulation in middle-aged rats
NAZLI PINAR ARSLAN
Doktora
Türkçe
2022
Histoloji ve EmbriyolojiAtatürk ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. OSMAN NURİ KELEŞ
- Yeni nikotinamit fosforiboziltransferaz (NAMPT) inhibitör adaylarının sanal tarama yöntemi ile keşfi ve biyolojik etkilerinin belirlenmesi
Identification of novel nicotinamide phosphoribosyltransferase (NAMPT) inhibitior candidates via virtual screening campaign and evaluation of their biological activities
FİKRİYE ÖZGENCİL
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
Eczacılık ve FarmakolojiGazi ÜniversitesiFarmasötik Kimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. GÖKÇEN EREN
- Nikotinamid molekülünün titreşimsel spektrumunun deneysel ve teorik yöntemlerle incelenmesi
Experimental and theoretical studies of the vibrational spectrum of nicotinamide
OLCAY BÖLÜKBAŞI
Yüksek Lisans
Türkçe
2003
Fizik ve Fizik Mühendisliğiİstanbul ÜniversitesiFizik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SEVİM AKYÜZ
- Nikotinamid ve benzoat ligandları içeren kadmiyum ve kobalt komplekslerinin kristal yapı analizi
Crystal structure analyses of cadmium and cobalt complexes with nicotinamide and benzoate ligands
ÖZNUR DİNCEL
Yüksek Lisans
Türkçe
2013
Fizik ve Fizik MühendisliğiKarabük ÜniversitesiFizik Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. MUSTAFA BARIŞ TERCAN
PROF. DR. TUNCER HÖKELEK