Makro gözenekli polimerik kriyojeller ile faktör VIII saflaştırılması
Purification of factor VIII with macroporus polymeric cryogels
- Tez No: 1016210
- Danışmanlar: DOÇ. DR. ÜMİT YILDIKO
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Kimya, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2026
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Kafkas Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Kimya Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Bu çalışma kapsamında Hemofili A hastalığı gibi kanamaya dayalı ya da kanamalı hastalıkların tedavisi için pıhtılaşma faktörlerinden biri olan faktör VIII'in saflaştırılması amaçlanmaktadır. Proteini saflaştırmak amacıyla makro gözenekli ve seçiciliği yüksek Faktör VIII baskılanmış poli(HEMA-MAH-Cu+2) kriyojeller sentezlenmiştir. Farklı oranlarda sentezlenen poli(HEMA-MAH-Cu+2) kriyojelinin karakterizasyonu kapsamında; yüzey morfolojisi ve gözenek dağılımını belirlemek amacıyla Taramalı Elektron Mikroskobu (SEM) analizleri gerçekleştirilmiş, fonksiyonel grupların varlığını ortaya koymak için Fourier Dönüşümlü Kızılötesi Spektroskopisi (FTIR) kullanılmıştır. Su tutma kapasitesinin değerlendirilmesi amacıyla yapılan şişme testlerinde şişme derecesinin %808 olduğu belirlenirken, yapının makrogözeneklilik oranı %80,3 olarak hesaplanmıştır. Elementel kompozisyonun incelenmesi için Enerji Dağılımlı X-Işını Spektroskopisi (EDX) analizi gerçekleştirilmiş, kristal yapının belirlenmesi amacıyla X-ışını difraktometresi (XRD) analizlerinden yararlanılmıştır. Ayrıca, termal kararlılığı incelemek amacıyla yapılan termogravimetrik analiz (TGA) sonuçlarına göre sentezlenen polimerik yapının yaklaşık 300 °C'ye kadar termal dayanıklılığa sahip olduğu tespit edilmiştir. Faktör VIII'in adsorpsiyonuna etki eden optimum koşulların belirlenmesi amacıyla pH, derişim, sıcaklık, iyon şiddeti, temas süresi, akış hızı, seçicilik ve tekrarlanabilirlik parametreleri sistematik olarak incelenmiştir. Elde edilen sonuçlara göre maksimum adsorpsiyonun pH 6'da gerçekleştiği ve adsorpsiyon kapasitesinin 38,55 mg/g olduğu belirlenmiştir. Optimum akış hızının 0,5 mL/dk, optimum sıcaklığın ise 37 °C olduğu; sistemin 60 dakika sonunda maksimum adsorpsiyon değerine ulaştığı saptanmıştır. Desorpsiyon işlemi 0,5 M NaCl çözeltisi kullanılarak gerçekleştirilmiş olup, yeniden kullanılabilirlik çalışmalarında 10 tekrar sonunda adsorpsiyon kapasitesinde %11 oranında azalma gözlenmiştir. Adsorpsiyon izotermleri incelendiğinde, korelasyon katsayısının (R = 0,9901) yüksek olması nedeniyle sistemin Langmuir izotermine daha iyi uyum sağladığı belirlenmiştir. Kinetik analizler sonucunda ise R değerinin 0,9755 olması, adsorpsiyon sürecinin ikinci derece kinetik modele daha uygun olduğunu göstermiştir. Ayrıca seçicilik çalışmaları, sentezlenen kriyojelin Faktör VIII'e karşı fibrinojene kıyasla 9,95 kat ve sığır serum albumine (BSA) kıyasla 11,98 kat daha yüksek seçiciliğe sahip olduğunu ortaya koymuştur. Son olarak yapay plazmadan klinik uygulama yapılmıştır ve ardından saflaştırılan Faktör VIII'in saflığını belirleyebilmek için Sodyum Dodesil Sülfat - Poliakrilamid Jel Elektroforezi (SDS – PAGE) analizi ile çalışma sonlandırılmıştır.
Özet (Çeviri)
This study aims to purify factor VIII, a clotting factor used in the treatment of bleeding-related or hemorrhagic diseases such as Hemophilia A. To purify the protein, macroporous and highly selective factor VIII-impregnated poly(HEMA-MAH-Cu+2) cryogels were synthesized. In the characterization of poly(HEMA-MAH-Cu+2) cryogel synthesized at different ratios, Scanning Electron Microscopy (SEM) analyses were performed to determine the surface morphology and pore distribution, and Fourier Transform Infrared Spectroscopy (FTIR) was used to reveal the presence of functional groups. Swelling tests conducted to evaluate water retention capacity revealed a swelling degree of 808%, while the macroporosity ratio of the structure was calculated as 80.3%. Energy Dispersive X-ray Spectroscopy (EDX) analysis was performed to examine the elemental composition, and X-ray diffractometry (XRD) analyses were used to determine the crystal structure. Furthermore, thermogravimetric analysis (TGA) results, conducted to investigate thermal stability, showed that the synthesized polymeric structure has thermal resistance up to approximately 300 °C. To determine the optimum conditions affecting the adsorption of Factor VIII, pH, concentration, temperature, ionic strength, contact time, flow rate, selectivity, and repeatability parameters were systematically investigated. According to the results, maximum adsorption occurred at pH 6, with an adsorption capacity of 38.55 mg/g. The optimum flow rate was found to be 0.5 mL/min, and the optimum temperature was 37 °C; the system reached its maximum adsorption value after 60 minutes. The desorption process was performed using a 0.5 M NaCl solution, and reusability studies showed an 11% decrease in adsorption capacity after 10 repetitions. When the adsorption isotherms were examined, the high correlation coefficient (R = 0.9901) indicated that the system fit the Langmuir isotherm better. Kinetic analyses showed an R value of 0.9755, suggesting that the adsorption process was more consistent with the second-order kinetic model. Furthermore, selectivity studies revealed that the synthesized cryogel exhibited 9.95-fold higher selectivity for Factor VIII compared to fibrinogen and 11.98-fold higher selectivity compared to bovine serum albumin (BSA). Finally, clinical applications were performed using artificial plasma, and the study was concluded with Sodium Dodecyl Sulfate-Polyacrylamide Gel Electrophoresis (SDS-PAGE) analysis to determine the purity of the purified Factor VIII.
Benzer Tezler
- E. coli hücrelerinden polimerik mikrokriyojeller ile RNA saflaştırılması
RNA purification by polimeric microcryogels from E.coli cells
MELEK ÖZSEVGİÇ
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
BiyomühendislikHacettepe ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ADİL DENİZLİ
- Polivinil alkol/kitosan kriyojellerin biyomimetik hidroksiapatit ile kaplanmış kompozitlerinin üretilmesi ve karakterizasyonu
Production and characterization of biomimetic hydroxyapatite coated polyvinyl alcohol/chitosan composites
GÜLŞAH GÜL
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
Kimya MühendisliğiMersin ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. NİMET KARAGÜLLE
- N-halamin esaslı klor depolayabilen kriyojellerin sentezi ve karakterizasyonu
Synthesis and characterization of N-halamine based chlorine storage cryogels
ZEYNEP AKSOY
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
Polimer Bilim ve TeknolojisiBursa Teknik ÜniversitesiLif ve Polimer Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HASAN BASRİ KOÇER
- Effect of cryogenic conditions on the properties of synthetic and biological cryogels
Sentetik ve biyolojik kriyojellerin özelliklerine kriyojenik koşulların etkisi
GAMZE DÖŞER
- Butil kauçuk esaslı kriyojellerin sentezi ve özelliklerinin incelenmesi
Preparation of cryogels based on butyl rubber and investigation of their properties
SEVIL MUSLUMOVA
