Geri Dön

Mayada polimeraz zincir reaksiyonu (PCR) yoluyla gen yapısının bozulması

Polymerase chain reaction (PCR) mediated gene disruption in yeast

  1. Tez No: 105338
  2. Yazar: SEDAT ENGİN
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. AYŞEGÜL TOPAL-SARIKAYA
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2001
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: İstanbul Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 65

Özet

VI ÖZET Mayada Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR) Yoluyla Gen Yapısının Bozulması Metaller biyolojik sistemlerde iz miktarlarda gerekli olmakla beraber yüksek konsantrasyonlarda toksik etkilere neden olurlar. Kadmiyum (Cd+2) metalinin biyolojik fonksiyonu bilinmemekle beraber düşük konsantrasyonlarda bile oldukça toksiktir. Günümüz sanayi ve enerji üretim işlemlerinde kullanılan kadmiyum, sitotoksik ve kanserojen etkisi yüzünden çok önemli bir çevresel kirleticidir. Kadmiyum kirliliği gelecekte çok önemli bir problem olacaktır. Bu yüzden canlı organizmalarda kadmiyum detoksifıkasyonunun moleküler temellerinin anlaşılması çok önemlidir. Maya kadmium faktör (YCF1), Cd+2 ve bazı ilaçlan glutation konjugatlan şeklinde vakuole taşıyan ATP'ye bağımlı ABC (“ATP Binding Cassette”) ailesi proteinidir. YCF1, insan kistik fibrosis transmembran regülatör (CFTR) ve“multi drug”dirençlilik protein (MRPl)'e yüksek derecede homoloji gösterir. Bununla beraber Schizosaccharomyces pombe ' de aynı aileye ait Cd+2 detoksifikasyonundan sorumlu vakuol membranında bulunan HMTİ proteininin, yapılan dendrogram haritalarına göre YCF1 ve CFTR' den farklı olduğu anlaşılmıştır. & pombe de ağır metal toleransında etkili olan genin fizyolojik rolünü bulmak için PCR yoluyla gen bozulması metodu kullanılarak delesyonlu gen oluşturuldu. Gen yapısının bozulması ura4+ ün prob olarak kullanılmasıyla“Dot”melezleme tekniği ile de gösterildi. SAİ olarak adlandırılan mutant Cd+2 yokluğunda üreyebilirken, 5 0-1 00 uM Cd+2 içeren besi ortamında yabani tipe göre üremesi güçlü bir şekilde inhibe edilmektedir. Homolog rekombinasyon yoluyla, ura4D18 haploid hücrelerinde istediğimiz bölgedeki gen yapısının bozulması sonucunda oluşan mutantın minimal besi ortamında üreyebilmesi genin ürünün vegetatif üreme için gerekli olmadığını göstermektedir. Aym genin S. pombe' de Cd+2 toleransında da önemli rol oynadığı anlaşılmıştır.“SWISS-PROT”protein dizi bilgi bankası programına göre bu genin YCF1, MRP1 ve CFTR' ye dizi benzerliği gösteren yeni bir ABC taşıyıcı protein kodladığı doğrulanmaktadır.

Özet (Çeviri)

VII SUMMARY Polymerase Chain Reaction (PCR) -mediated Gene Disruption in Yeast Metals serve both essential and toxic roles in biological systems. The metal cadmium ( Cd+2) however, is of no known biological utility but is highly toxic at relatively low concentrations. Cadmium pollution occurs as a result of energy generating and manufacturing processes. Therefore cadmium is an environmental contaminant of increasing importance due to its potent cytotoxic effects and its potential carcinogenicity. It is therefore critical to understand the molecular basis of cadmium detoxification in living organisms. The yeast cadmium factor (YCF1) is a vacuolar membrane protein that transport Cd+2 and several drugs as glutathione conjugates (GS-conjugates) and belongs to the superfamily of ABC transporters. YCF1 has strong sequence similarity with human cystic fibrosis transmembrane conductance regulator (CFTR) and multi-drug resistance associated protein (MRP1). However, in Schizosaccharomyces pombe, a vacuolar associated ABC protein (HMT1) plays important roles in Cd+2 detoxification; it is distinct from YCF1 and hCFTR according to the dendrogram created using protein sequences of representative members of the ABC transporter superfamily. To investigate the physiological role of the gene involved heavy metal tolerance, we generated a deletion within the gene by PCR mediated gene disruption in S. pombe. Gene disruption was also verified by Dot hybridization using the ura4+ gene as a probe. This mutant was called SAL In the absence of Cd+2, SA1 grew normally whereas it was effectively inhibited by 50- lOOuM Cd+2 than the wild type. Disruption of the gene in ura4D18 haploid cells, through homologous recombination, demonstrated that the gene product is not required for vegetative growth, but it is essential for Cd+2 tolerance in S. pombe. Based upon primary structural features according to the SWISS-PROT protein sequence database shows that SA1 probably exhibits a new disrupted ABC transporter which has sequence similitary to YCF1, hMRPl and hCFTR.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    324885

    Hepatit B virüsü 'e' antijeni gen bölgesinin mayada ekspresyonu

    Expression of Hepatitis B virus 'e' antigen gene region in yeast

    BERKSAN ŞİMŞEK

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2012

    MikrobiyolojiGATA

    Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. KENAN ŞENER

  2. Tez No

    363684

    Optimization and use of DNA sequencing by capillary electrophoresis for comparative yeast genotype analysis

    Kapiler elektroforezine dayalı DNA dizileme yönteminin optimizasyonu ve mayada karşılaştırmalı genotip analizi için kullanılması

    CİHAN ERDİNÇ GÜLSEV

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2014

    Biyoteknolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ZEYNEP PETEK ÇAKAR

  3. Tez No

    820974

    Bioprospection of antagonistic yeasts for biocontrolling postharvest pathogenic fungi and physicochemical characterization of a yeast exopolysaccharide

    Patojenik küflerin hasat sonrasi biyolojik kontrolünde antagonistik mayalarin biyoprospeksiyonu ve bir maya ekzopolisakkaritinin fizikokimyasal karakterizasyonu

    SEBAHAT ÖZTEKİN

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2023

    Gıda Mühendisliğiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Gıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. HATİCE FUNDA KARBANCIOĞLU GÜLER

  4. Tez No

    872905

    Kronik insomnide melatonin MTNR1A ve MTNR1B reseptör gen mutasyonlarının etkisi

    The effect of melatonin MTNR1A and MTNR1B receptor gene mutations in chronic insomnia

    BÜŞRANUR OĞUZ SELÇUK

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    NörolojiSağlık Bilimleri Üniversitesi

    Nöroloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. FÜSUN MAYDA DOMAÇ

    PROF. DR. DENİZ KIRAÇ

  5. Tez No

    377322

    Schizosaccharomyces pombe'de tiamin biyosentezinde görevli genlerin anlatımlarının araştırılması

    Investigation of genes expression involved in thiamine biosynthesis in Schizosaccharomyces pombe

    AHMET AKÇAY

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2014

    Biyolojiİstanbul Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. BEDİA G. PALABIYIK

Geri Dön