Bakteriyel kaynaklardan elastaz enziminin üretimi
Production of elastase enzyme by bacterial sources
- Tez No: 105674
- Danışmanlar: PROF. DR. NİLÜFER AKSÖZ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2001
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 118
Özet
IV ÖZET Bu çalışmada proteofitik bir enzim olan ve yapay tatlandırıcı aspartamın ( N- benziloksikarbonil-l-aspartil fenilalanin metilesîeri ) sentezi için kullanılabilen elastaz enziminin üretimine etkili bazı fizyolojik koşullar üzerinde çalışılmıştır. Denenen mikroorganizmalar arasında ( Pseudomonas aeruginosa suşlan, Pseudomonas sp. E01 ve Pseudomonas sp. E08 suşlan, Bacillus subtitis ( LP. Eh. 1.1 953 ), Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus subtilis 10649 MERCK ve Bacillus cereus ATCC 11778 suşlan ) yapılan çalışmalar sonucunda Pseudomonas aeruginosa No:20 susunun elastaz enzimi üretimi bakımından diğerlerine kıyasla daha potent olduğunu gösterildi. Çalışmalarımızda karbon kaynağı olarak 0.05 M glukoz ve azot kaynağı olarak 0.20 M NH4CI veya %0.5 maya Ozütû içeren, pH 7.0'a ayarlanmış 100 mi besiyerinde 30 oC'de, üç gün çalkalaması koşulda inkübasyonu yapılan kültürlerde enzim üretiminin, diğer koşullara kıyasla daha yüksek olduğu gösterilmiştir. Bu ortamda optimum kültürel koşullarla 5.1 U/ml elastaz enzimi aktivltesi saptanmıştır. Çalışmamızda enzim reaksiyon ortamında tamponun, substrat ve enzim konsantrasyonunun, inkübasyon süresinin, inkübasyon sıcaklığının ve pH'ın enzim aktivitesine etkisi de araştırılmış; en yüksek akîfvite ( 4.566 U/m! ) 10 mg substrat Elastin-Congo red ve 1 mi enzim içeren, pH'ı 7.0 olan 3 mi 10 M TrisHCl tamponunda 3 saat 37 oc'de çaikalamalı Inkübe edilen reaksiyon ortamlarında bulunmuştur. Elastaz enziminin amonyum sülfatla çöktürme ve diyalizle kısmf olarak saflaştırması yapılmış ve enzim, kültür süpernatanına göre 10.18 kat saflaştınlmıştır. Araştırmamızın diğer bir amacı immobilize edilmiş bakteri hücrelerinin elastaz enzimi aktivitesinin ve yine immobilize edilmiş enzimin aktivitesinin serbest hücre ve serbest enzim ile karşılaştırılmasıdır. Bu amaçla bakteri ve enzim sodyum aljinat ve ağara ayrı ayrı tutuklanmıştır. Serbest formdaki hücrelere kıyasla enzim aktivitesinin %4'lük sodyum aljinaîa tutuklananhücrelerde %78.40, %8'lik sodyum aljinata tutuklananlarda %51.20, %2'lik ağara tutuklanan hücrelerde ise %76.1S oranında korunduğu bulunmuştur. Tutuklama matriksl olarak %4'lük sodyum aljinata tutuklanan enzimde ise aktiviîenin azaldığı; fakat yine de %58.90 oranında korunduğu saptanmıştır. Sonuç olarak; optimum kültür koşullarının uygulanmasıyla Pseudomanas aeruginosa No:20 susunun elastaz enzimi üretimi arttın im ıştır, reaksiyon ortamında da optimal koşulların uygulanmasıyla enzim aktsvitesi maksimum bulunmuştur. Tutuklamayla enzim üretimi ve aktivitenin azalmasına karşın kullanım kolaylığı bu dezavantajı ortadan kaldırmaktadır.
Özet (Çeviri)
¥1 ABSTRACT In this study, effects of some physiological conditions on the production of elastase enzyme which is a proteoiitic enzyme that can be used for the synthesis of the artificial sweetener aspartame ( N-benziioxicarbonyl-L- aspartil phenylalanine methyl ester ) were examined. For this purpose, Pseudomonas aeruginosa strains, Pseudomonas sp. E01 and Pseudomoms sp. E08 strains, Bacillus subtiiis ( LP. Eh. 1.1 953 ), Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus subtiiis 10649 MERCK and Bacillus cereus ATCC 1 1 778 strains were tested. Our results show that Pseudomonas aeruginosa No:20 strain was found the most potent strain for elastase activity among the tested organisms. It was detected that, the optimum enzyme production was determined in a 100 ml medium containing 0.05 M glucose as carbon source, 0.20 M NH4CS or 0.5% yeast extract as nitrogen sources, with a pH level 7.0 which was incubated at 30 oc for 3 days in a shaking incubator. In such media, when the optimal cultural conditions were applied, the enzyme activity was found as 5.1 U/ml. in the study, the effects of the buffer, substrate and enzyme consantrations, incubation period, temperature and pH value on the enzyme activity in the reaction mixture were also established. It was shown that highest activity was determined in a mixture containing Tris HCL buffer 10 M, at pH 7.0 that was incubated at 37 oc for 3 hours with aeration that contained 10 mg Elastin Congo Red as substrate and 1 ml enzyme^ ml. Elastase enzyme was partially purified by ammonium sulphate precipitation and dialysis. The crude enzyme was purified 10.18 fold by this process. Another aim of the research was to investigate elastase activities by immobilized bacterial cells and the enzyme entrapped by Na-alginate and agar comparatively. When compared to free cells, enzyme activity was retained 78.40%, 51.20%, 76.13% after immobilized with 4% Na-alginate, 8% Na-alginate and 2% agar, respectively.VI! With entrapment enzyme to Na-alginate, enzyme activity decreased but the 58.90% of its activity was still remaining. As a consequence, when the optimum culture conditions were applied the production of elastase enzyme by Pseudomonas aeruginosa No:20 strain increased. Also, the activity of the enzyme was maximal by the aplication of optima! conditions detected for reaction mixture. Although the production and activity of the enzyme decreased by immobilization, the useability offsets this disadvantage.
Benzer Tezler
- Doğal nanoselüloz içeren leke giderici ve ultra nemlendirici kompozit yüz maskesi eldesi
Obtaining anti-blemish and ultra moisturizing composite face mask containing natural nanocellulose
SİBEL DİKMEN KÜÇÜK
Doktora
Türkçe
2024
DermatolojiDüzce ÜniversitesiKompozit Malzeme Teknolojileri Ana Bilim Dalı
PROF. DR. UFUK KOCA ÇALIŞKAN
- Değişik kaynaklardan izole edilen pseudomonas aeruginosa suşlarının virulans faktörleri, biyofilm formasyonu ve quorum sensing yönünden değerlendirilmesi
Analysis of pseudomonas aeruginosa strains from different sources for virulance factors, biofilm formation and quorum sensing
DENİZ DÜZGÜN
Doktora
Türkçe
2009
MikrobiyolojiUludağ ÜniversitesiMikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SUNA GEDİKOĞLU
- Protez enzimin bakteriyel kaynaklardan saflaştırılması ve bazı kinetik özelliklerinin incelenmesi
Başlık çevirisi yok
NİLÜFER CİHANGİR
Yüksek Lisans
Türkçe
1987
MikrobiyolojiHacettepe ÜniversitesiMikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. BURHANEDDİN SELLİOĞLU
- Bitki büyüme regülatörü gibberelik asidin (GA3) Pseudomonas sp.'den üretimi için uygun ortamsal koşulların saptanması
Optimal cultural parameters for the plant growth regulator gibberelic acid (GA3) biosynthesis by pseudomonas sp.
ŞAFAK BAŞIAÇIK
- Development of novel biocatalysts for industrial applications
Endüstriyel uygulamalar için yeni biyokatalizörlerin geliştirilmesi
BARIŞ BİNAY
Doktora
İngilizce
2012
Biyomühendislikİstanbul Teknik Üniversitesiİleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. NEVİN GÜL KARAGÜLER
PROF. NICHOLAS JAMES TURNER