Geri Dön

Bakteriyel kaynaklardan elastaz enziminin üretimi

Production of elastase enzyme by bacterial sources

  1. Tez No: 105674
  2. Yazar: YAĞMUR YALÇINKAYA
  3. Danışmanlar: PROF. DR. NİLÜFER AKSÖZ
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyoloji, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2001
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 118

Özet

IV ÖZET Bu çalışmada proteofitik bir enzim olan ve yapay tatlandırıcı aspartamın ( N- benziloksikarbonil-l-aspartil fenilalanin metilesîeri ) sentezi için kullanılabilen elastaz enziminin üretimine etkili bazı fizyolojik koşullar üzerinde çalışılmıştır. Denenen mikroorganizmalar arasında ( Pseudomonas aeruginosa suşlan, Pseudomonas sp. E01 ve Pseudomonas sp. E08 suşlan, Bacillus subtitis ( LP. Eh. 1.1 953 ), Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus subtilis 10649 MERCK ve Bacillus cereus ATCC 11778 suşlan ) yapılan çalışmalar sonucunda Pseudomonas aeruginosa No:20 susunun elastaz enzimi üretimi bakımından diğerlerine kıyasla daha potent olduğunu gösterildi. Çalışmalarımızda karbon kaynağı olarak 0.05 M glukoz ve azot kaynağı olarak 0.20 M NH4CI veya %0.5 maya Ozütû içeren, pH 7.0'a ayarlanmış 100 mi besiyerinde 30 oC'de, üç gün çalkalaması koşulda inkübasyonu yapılan kültürlerde enzim üretiminin, diğer koşullara kıyasla daha yüksek olduğu gösterilmiştir. Bu ortamda optimum kültürel koşullarla 5.1 U/ml elastaz enzimi aktivltesi saptanmıştır. Çalışmamızda enzim reaksiyon ortamında tamponun, substrat ve enzim konsantrasyonunun, inkübasyon süresinin, inkübasyon sıcaklığının ve pH'ın enzim aktivitesine etkisi de araştırılmış; en yüksek akîfvite ( 4.566 U/m! ) 10 mg substrat Elastin-Congo red ve 1 mi enzim içeren, pH'ı 7.0 olan 3 mi 10 M TrisHCl tamponunda 3 saat 37 oc'de çaikalamalı Inkübe edilen reaksiyon ortamlarında bulunmuştur. Elastaz enziminin amonyum sülfatla çöktürme ve diyalizle kısmf olarak saflaştırması yapılmış ve enzim, kültür süpernatanına göre 10.18 kat saflaştınlmıştır. Araştırmamızın diğer bir amacı immobilize edilmiş bakteri hücrelerinin elastaz enzimi aktivitesinin ve yine immobilize edilmiş enzimin aktivitesinin serbest hücre ve serbest enzim ile karşılaştırılmasıdır. Bu amaçla bakteri ve enzim sodyum aljinat ve ağara ayrı ayrı tutuklanmıştır. Serbest formdaki hücrelere kıyasla enzim aktivitesinin %4'lük sodyum aljinaîa tutuklananhücrelerde %78.40, %8'lik sodyum aljinata tutuklananlarda %51.20, %2'lik ağara tutuklanan hücrelerde ise %76.1S oranında korunduğu bulunmuştur. Tutuklama matriksl olarak %4'lük sodyum aljinata tutuklanan enzimde ise aktiviîenin azaldığı; fakat yine de %58.90 oranında korunduğu saptanmıştır. Sonuç olarak; optimum kültür koşullarının uygulanmasıyla Pseudomanas aeruginosa No:20 susunun elastaz enzimi üretimi arttın im ıştır, reaksiyon ortamında da optimal koşulların uygulanmasıyla enzim aktsvitesi maksimum bulunmuştur. Tutuklamayla enzim üretimi ve aktivitenin azalmasına karşın kullanım kolaylığı bu dezavantajı ortadan kaldırmaktadır.

Özet (Çeviri)

¥1 ABSTRACT In this study, effects of some physiological conditions on the production of elastase enzyme which is a proteoiitic enzyme that can be used for the synthesis of the artificial sweetener aspartame ( N-benziioxicarbonyl-L- aspartil phenylalanine methyl ester ) were examined. For this purpose, Pseudomonas aeruginosa strains, Pseudomonas sp. E01 and Pseudomoms sp. E08 strains, Bacillus subtiiis ( LP. Eh. 1.1 953 ), Bacillus amyloliquefaciens, Bacillus subtiiis 10649 MERCK and Bacillus cereus ATCC 1 1 778 strains were tested. Our results show that Pseudomonas aeruginosa No:20 strain was found the most potent strain for elastase activity among the tested organisms. It was detected that, the optimum enzyme production was determined in a 100 ml medium containing 0.05 M glucose as carbon source, 0.20 M NH4CS or 0.5% yeast extract as nitrogen sources, with a pH level 7.0 which was incubated at 30 oc for 3 days in a shaking incubator. In such media, when the optimal cultural conditions were applied, the enzyme activity was found as 5.1 U/ml. in the study, the effects of the buffer, substrate and enzyme consantrations, incubation period, temperature and pH value on the enzyme activity in the reaction mixture were also established. It was shown that highest activity was determined in a mixture containing Tris HCL buffer 10 M, at pH 7.0 that was incubated at 37 oc for 3 hours with aeration that contained 10 mg Elastin Congo Red as substrate and 1 ml enzyme^ ml. Elastase enzyme was partially purified by ammonium sulphate precipitation and dialysis. The crude enzyme was purified 10.18 fold by this process. Another aim of the research was to investigate elastase activities by immobilized bacterial cells and the enzyme entrapped by Na-alginate and agar comparatively. When compared to free cells, enzyme activity was retained 78.40%, 51.20%, 76.13% after immobilized with 4% Na-alginate, 8% Na-alginate and 2% agar, respectively.VI! With entrapment enzyme to Na-alginate, enzyme activity decreased but the 58.90% of its activity was still remaining. As a consequence, when the optimum culture conditions were applied the production of elastase enzyme by Pseudomonas aeruginosa No:20 strain increased. Also, the activity of the enzyme was maximal by the aplication of optima! conditions detected for reaction mixture. Although the production and activity of the enzyme decreased by immobilization, the useability offsets this disadvantage.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    871478

    Doğal nanoselüloz içeren leke giderici ve ultra nemlendirici kompozit yüz maskesi eldesi

    Obtaining anti-blemish and ultra moisturizing composite face mask containing natural nanocellulose

    SİBEL DİKMEN KÜÇÜK

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    DermatolojiDüzce Üniversitesi

    Kompozit Malzeme Teknolojileri Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. UFUK KOCA ÇALIŞKAN

  2. Tez No

    247308

    Değişik kaynaklardan izole edilen pseudomonas aeruginosa suşlarının virulans faktörleri, biyofilm formasyonu ve quorum sensing yönünden değerlendirilmesi

    Analysis of pseudomonas aeruginosa strains from different sources for virulance factors, biofilm formation and quorum sensing

    DENİZ DÜZGÜN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2009

    MikrobiyolojiUludağ Üniversitesi

    Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. SUNA GEDİKOĞLU

  3. Tez No

    283945

    Protez enzimin bakteriyel kaynaklardan saflaştırılması ve bazı kinetik özelliklerinin incelenmesi

    Başlık çevirisi yok

    NİLÜFER CİHANGİR

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    1987

    MikrobiyolojiHacettepe Üniversitesi

    Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. BURHANEDDİN SELLİOĞLU

  4. Tez No

    66063

    Bitki büyüme regülatörü gibberelik asidin (GA3) Pseudomonas sp.'den üretimi için uygun ortamsal koşulların saptanması

    Optimal cultural parameters for the plant growth regulator gibberelic acid (GA3) biosynthesis by pseudomonas sp.

    ŞAFAK BAŞIAÇIK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    1997

    BiyolojiHacettepe Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. NİLÜFER AKSÖZ

  5. Tez No

    332999

    Development of novel biocatalysts for industrial applications

    Endüstriyel uygulamalar için yeni biyokatalizörlerin geliştirilmesi

    BARIŞ BİNAY

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2012

    Biyomühendislikİstanbul Teknik Üniversitesi

    İleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. NEVİN GÜL KARAGÜLER

    PROF. NICHOLAS JAMES TURNER

Geri Dön