Periferik kök hücre ürünlerinin kontrollü dondurma cihazı veya sıvı azotun buhar fazında dondurulmasının hematopoietik kök hücrelerin canlılığına ve çoğalma yeteneklerine etkisinin karşılaştırılması
The Effect of vapor phase versus controlled rate freezing on cryopreservation of hematopoietie stem cells
- Tez No: 107644
- Danışmanlar: PROF.DR. HAMDİ AKAN
- Tez Türü: Tıpta Uzmanlık
- Konular: Hematoloji, Hematology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2001
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ankara Üniversitesi
- Enstitü: Tıp Fakültesi
- Ana Bilim Dalı: İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 19
Özet
oz Otolog periferik kök hücre nakli (OPKHN) desteğinde yüksek doz kemoterapi (YDK) uygulanması pek çok hematolojik malignitenin tedavisinde gün geçtikçe artan sıklıkta kullanılmaktadır. Periferik kök hücre mobilizasyonunu takiben toplanan mononükleer hücrelerin içlerindeki total şekilli hücre (TNC), total mononükleer hücre (TMNH) MNH CD34 miktarı belirlenmektedir. Sonrasında hastadan eş zamanlı toplanmış olan otolog plazma ve kriyoprotektan madde (örn. DMSO) ile karıştırılır ve kontrollü bir dondurucu ile -l°C/dk - 120°C ye dondurulmakta azotun sıvı fazında saklanmakta ve merkezimizde de aynı uygulama altı senedir süregelmektedir. Son yıllarda yapılan çalışmalarda -80°C lik soğutucularla kontrollü dondurucu kullanmaksızın, %6 pentastarch (HES) kullanılarak ve %5 DMSO kullanılarak bu işlemin yapılabileceğine dair yayınlar vardır ve hangi yöntemin güvenilir, pratik ve daha ucuz olduğunu gösteren karşılaştırmalı çalışma sayısı azdır. Dondurma ve çözme sonrasında hücrelerin hastalara geri verilmesi sırasında meydana gelen kayıpların değerlendirilmesinde en önemli takip kriteri hematopoietik dokunun semi-solid kültür ortamında, CFU-E, BFU-E, CFU-GM ve CFU-G koloni oluşturma yetisinin değerlendirilmesidir. Hücre saklama ve nakli sırasında koloni oluşturma yetisine sahip öncüllerin karşılaştırılması, dondurarak saklama (DS) işleminde meydana gelen kayıpları yansıtacaktır. Koloni oluşturma değerlendirilmesi bir hafta ile 10 gün arası bir süreç olduğundan dolayı CD34 yüzey belirleyicisinin kullanılarak hematopoietik kök hücre sayısının belirlenmesi sık kullanılan, kısa sürede sonuç alınabilen, tekrarlanabilir, pratik fakat tam anlamıyla yeterli olmayan bir değerlendirmedir. Yirmi bir adet kullanılmayacak olan periferik kök hücre ürünü iki eşit hacime ayrılmış ve içlerindeki MNH ve CD34 miktarı ve işlem öncesi ve sonrası koloni yapabilme yetenekleritayini yapılmıştır. Ürünler, üç farklı kriyoprotektan solüsyon; 1- %3 HES + %5 DMSO + otolog plazma, 2- %6HES + %5 DMSO + otolog plazma ve 3- %10 DMSO + otolog plazma, kullanılarak, PVC bazlı (20cc.lik, Cryocyte, Baxter, 4R9951) torbalarda kriyoprezerve edilmişlerdir. İki farklı dondurarak saklama yöntemi; hız kontrollü (özel bilgisayar aracılıklı) ve kontrolsüz (sıvı azotun buhar fazında) dondurulmuşlar bu şekilde her bir ürün için altı adet torba hazırlanmıştır. Sonrasında ürünler eşit zaman aralıklarında eşit koşullarda sıcak su banyosunda 37°C'de çözdürülmüş ve yine viyabilite, total nükleer hücre (TNH), mononükleer hücre (MNH), ve koloni yapabilme yetenekleri tekrarlanmışlardır. Sonuçlar hem her iki dondurma yöntemi ve hem de kendi aralarında da her 3 hazırlama tekniği için ayrı ayrı değerlendirilmiş ve grup içi ve gruplar arası istatistik değerlendirme yapılmıştır.Bu şekilde her kolda yapılmış olan çalışmalar olmakla birlikte aynı hastadan farklı 6 şekilde kriyopreservasyon yapılarak optimal dondurarak saklama yönteminin bulunulmasına çalışılmıştır. Periferik kan kök hücre (PKKH) örneklerinin ekim öncesi ortalama TNH, MNH ve CD34 değerleri sırasıyla; 2,lxl0e8, 0,6xl0e8, 0.4xl0e6 dır. DS öncesi son viyabilite değerlendirmeleri ortalama % 94 (89-99)olup ekilen 21 örnekten 20' de başarılı koloni formasyonu izlenmiş olup ortalama CFU-GM 6xl0e4/ml dir. D S sonrası iki ay içinde çözülen 10 ürün örneğine ait TNH, MNH ve viyabilite verileri sırasıyla, 2,0xl0e8, 0,57xl0e8 ve %95 (90-99)' dir. Ekilen 1 1 örnekten 11' de başarılı koloni formasyonu izlenmiş olup ortalama CFU-GM 5.8xl0e4/ml dir. Sonuçta her iki DS yöntemi ile de başarılı ve yeterli bir şekilde hücre viyabilitesinin ve hematopoietik koloni üretme yetisinin korunabileceği ve HES içeren DS solüsyonlarında ürün saflığı ve viyabilitesinin anlamlı olmasa dahi daha iyi korunduğu ama kontrollü dondurucu olmaksızın da bu işlemin yapılabileceğini çalışmamız göstermiştir.
Özet (Çeviri)
the PBSC were divided in two equal parts and aliquots for semi solid assays and CFU quantification were drawn from the collection bag. Afterwards the harvest material was cryopreserved using three different cryoprotectant solutions; 1-3% HES + 5% DMSO + autologous plasma (1 : 1), 2- 6% HES + 5% DMSO + autologous plasma (1:1) and 3% HES+ 10%DMSO+ autologous plasma (1:1). Before cryopreservation the ideal cell concentration was held at 2-4xlOE7 cells/ml. Prepared PBSC was transferred into 3 different PVC based 20ml storage bags (Cryocyte, Baxter, 4R9951) in laminar flow hood following aseptic conditions. These bags (in each 3) will be cryopreserved in two different ways; rate controlled freezing (in a programmed freezer) and in vapor phase of nitrogen, respectively. After öne month each cryopreserved product will be thawed in water bath in similar conditions and with the same protocol. Viability, MNC, CD34 and colony forming assays were performed for each of the six thawed PBSC. In conclusion both methods, controlled rate vs vapor phase, seemed reliable methods for hematopoietic progenitor cell cryopreservation. PBSCs cryopreserved in HES containing solutions proved to have remarkable effect on viability and progenitor cell recovery. The role of HES containing cryoprotectant solutions and vapor phase cryopreservation are encouraging and further clinical studies regarding engraftment kinetics are necessary for firm conclusions. *t' ithe PBSC were divided in two equal parts and aliquots for semi solid assays and CFU quantification were drawn from the collection bag. Afterwards the harvest material was cryopreserved using three different cryoprotectant solutions; 1-3% HES + 5% DMSO + autologous plasma (1 : 1), 2- 6% HES + 5% DMSO + autologous plasma (1:1) and 3% HES+ 10%DMSO+ autologous plasma (1:1). Before cryopreservation the ideal cell concentration was held at 2-4xlOE7 cells/ml. Prepared PBSC was transferred into 3 different PVC based 20ml storage bags (Cryocyte, Baxter, 4R9951) in laminar flow hood following aseptic conditions. These bags (in each 3) will be cryopreserved in two different ways; rate controlled freezing (in a programmed freezer) and in vapor phase of nitrogen, respectively. After öne month each cryopreserved product will be thawed in water bath in similar conditions and with the same protocol. Viability, MNC, CD34 and colony forming assays were performed for each of the six thawed PBSC. In conclusion both methods, controlled rate vs vapor phase, seemed reliable methods for hematopoietic progenitor cell cryopreservation. PBSCs cryopreserved in HES containing solutions proved to have remarkable effect on viability and progenitor cell recovery. The role of HES containing cryoprotectant solutions and vapor phase cryopreservation are encouraging and further clinical studies regarding engraftment kinetics are necessary for firm conclusions. *t' i
Benzer Tezler
- Otolog periferik kök hücre toplanmasında bakteri kontaminasyon riski ve aşamasının saptanması
Bacterial contamination risk in autologous stem cell collection and to determine of this phase
AHMET YILMAZ
Yüksek Lisans
Türkçe
2009
HematolojiAnkara Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MUTLU ARAT
- Otolog periferik kök hücre transplantında nakil günü çalışılan ürün kan kültürlerinin retrospektif değerlendirilmesi
Retrospective evaluation of product blood cultures that tested on transplantation day in autologous peripheral stem cell transplantation
BEYZA ATAY
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2019
HematolojiBursa Uludağ Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. FAHİR ÖZKALEMKAŞ
- Exploration for possible use of GM-CSF receptor numbers on myeloid cell population as a predictive value for stem cell transplantations
Kök hücre transplantasyonlarında myeloid hücreler üzerinde bulunan GM-CSF reseptör sayılarının prediktif değerinin araştırılması
AYŞE YİĞİT
Yüksek Lisans
İngilizce
2022
BiyoteknolojiYeditepe ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. GÜLDEREN DEMİREL
- İç kulak tüylü hücrelerinin rejenerasyonunda atoh 1 ve lgr 5 gen ürünlerinin rolü
The role of atoh 1 and lgr 5 gene products in the regeneration of inner ear hair cells
HAVVA NUR TOP
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
GenetikDokuz Eylül ÜniversitesiTıbbi Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HAKKI OGÜN SERCAN