Kimyasal çağraz bağlama yöntemi kullanılarak peroksidaz-protein konjugatlarının hazırlanması
Preparation of peroxidase-protein conjugates by chemical crosslinking
- Tez No: 107747
- Danışmanlar: PROF.DR. İNCİ ÖZER
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Enzim-protein konjugatı, konjugasyon metodu, bifonksiyonel çapraz bağlayıcı reaktifler, Enzyme-protein conjugate, conjugation method, bifunctional cross-linking reagents
- Yıl: 2001
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 71
Özet
ÖZET Tacal, Ö., Kimyasal çapraz bağlama yöntemi kullanılarak peroksidaz-protein konjugatlarının hazırlanması, Hacettepe Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü Biyokimya Programı Doktora Tezi, Ankara, 2001. Enzim immunoassay sistemlerinde kullanılan enzim-protein konjugat hazırlama yöntemlerini karşılaştırmak amacıyla; sığır serum albumini (BSA), insan serum albumini (HSA) ve insan otı-proteinaz inhibitörü (otı-PI),“horseradish”peroksidazı (HRP) ile, 1-etil- 3~(3-dimetilaminopropil)-karbodiimid (EDC), periodat oksidasyonu ve N- süksinimidil 4-(N-maleimidometil) siklohekzan-1-karboksilat (SMCC) kullanılarak konjuge edildi. Ayrıca SMCC ile konjugasyondan önce albumin ve aı-PI'de serbest -SH grubu meydana getirmek üzere 2-iminotiyolan (2-İT) veya redükte glutatyondan (GSH) yararlanıldı. Oluşan ürünlerdeki molekül ağırlığı dağılımı ve ürün bileşimi SDS-PAGE ve Sephadex G200 kromatografısi ile saptanarak, konjugasyon yöntemleri birbirleri ile karşılaştırıldı. BSA'nın EDC, periodat oksidasyonu yöntemi ve SMCC aracılığı ile HRP'ye konjugasyonunda total konjugasyon verimi sırasıyla % 16, 46 ve 28 bulundu. EDC ile kayda değer bir heterolog konjugasyon gözlenmedi. Periodat oksidasyonu yöntemi diğer yöntemlerle karşılaştırıldığında; total konjugasyon veriminin daha yüksek olduğu (% 46), ancak yüksek molekül ağırlıklı polimerik konjugatlar da içeren heterojen konjugat karışımı meydana getirdiği görüldü. aı-PI'nin SMCC aracılığıyla HRP'ye konjugasyonunda total konjugasyon verimi % 16 olup, tek konjugat verdiği bulundu. Ayrıca SMCC ile hazırlanan otı-PI-HRP konjugatının Ouchterlony immunodiffüzyon yöntemi ile antijenik özelliğini koruduğu gözlendi. Sonuç olarak; BSA-HRP ve aı-PI-HRP konjugatını meydana getirmek üzere SMCC ile konjugasyonun, diğer yöntemlere göre çok daha seçici ve etkili olduğu bulundu.
Özet (Çeviri)
VI ABSTRACT Tacal, Ö., Preparation of peroxidase-protein conjugates by chemical cross- linking, Hacettepe University Health Sciences Institute PhD Thesis in Biochemistry, Ankara, 2001. To compare different methods used in the preparation of enzyme-protein conjugates for use in enzyme immunoassay systems, l-ethyl-3-(3- dimethylaminopropyl) carbodiimide (EDC), periodate oxidation, N-succinimidyl 4- (N-maleimidomethyl) cyclohexane-1-carboxylate (SMCC) were used to conjugate bovine serum albumin (BSA), human serum albumin (HSA) and cti-proteinase inhibitor (oti-PI) with“horseradish”peroxidase. Also before conjugation with SMCC, 2-iminothiolane (2-IT) and reduced glutathione (GSH) were used to obtain free -SH groups on albumin and cti-PI. The molecular weight distribution and composition of the resultant products were analyzed by SDS-PAGE and Sephadex G200 chromatography and the conjugation methods were compared with each other. Total yields in the conjugation of BSA to HRP via the EDC, periodate oxidation and SMCC methods were found to be 16, 46 and 28 %, respectively. Significant heterologous conjugation with EDC could not be achieved. Compared with other methods, the total conjugation efficiency of the periodate oxidation method was higher (46 %), but a heterogeneous mixture with high-molecular-weight polymeric conjugates was formed by this method. During conjugation of oti-PI with HRP via SMCC, the total conjugation efficiency was 16 % and yielded a single conjugate. Also it was found that the oti-PI-HRP conjugate prepared with SMCC preserved its antigenic property as determined by the Ouchterlony immunodiffusion method. In conclusion, conjugation with SMCC in order to obtain BSA-HRP and cti-PI-HRP conjugates was much more selective and effective than the other methods.
Benzer Tezler
- Evsel atıklardan nanopartikül eldesi ve glukoz biyosensörü tasarımında kullanımı
Obtaining nanoparticles from domestic wastes and their use in glucose bi̇osensor design
SEVDA ÜÇDEMİR PEKTAŞ
- High internal phase emulsion template method for fast and selective mercury adsorption
Hızlı ve seçici civa adsorpsiyonu için yüksek iç faz emülsiyon şablon yöntemi
MELİS ŞEVAL YILDIRIM
Yüksek Lisans
İngilizce
2022
Polimer Bilim ve Teknolojisiİstanbul Teknik ÜniversitesiPolimer Bilim ve Teknolojisi Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ERDEM YAVUZ
- Encapsulation of food flavors via coacervation method
Gıda aromalarının koaservasyon yöntemi ile enkapsüle edilmesi
PERİHAN MERVE BULDUR
Yüksek Lisans
İngilizce
2012
Biyoteknolojiİstanbul Teknik Üniversitesiİleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. FATMA NEŞE KÖK
- Novel methods to prepare cross-linked enzyme aggregates (CLEA). challenging immobilization models - urease and pepsin
Çapraz bağlı enzim agregatlar (CLEA) hazırlamak için yeni metotlar. zorlu immobilizasyon modelleri – üreaz ve pepsin
TUĞÇE AKKAŞ
Doktora
İngilizce
2016
BiyolojiSabancı ÜniversitesiMalzeme Bilimi ve Mühendisliği Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. ALPAY TARALP
- Isolation and immobilization of NADH-cytochrome b5 reductase from rabbit liver
Tavşan karaciğerlerinden NADH-sitokrom b5 redüktaz enziminin izolasyonu ve immobilizasyonu
ÖZLEM ESEN YILDIRIM
