Cryopreservation of starfish oocytes and cloning of starfish gai subunit
Denizyıldızı oositlerinin dondurularak saklanması ve denizyıldızı gai proteininin klonlanması
- Tez No: 112075
- Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. KİRSTEN C. EDEPLİ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Denizyıldızı, Dondurarak saklama, Genetik, Oositler, Proteinler, Starfish, Cryopreservation, Genetics, Oocytes, Proteins
- Yıl: 2001
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Boğaziçi Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
VI ÖZET DENİZYILDIZI OOSİTLERİNİN DONDURULARAK SAKLANMASI VE DENİZYILDIZI G ai PROTEİNİNİN KLONMASI Denizyıldızı oosit, yumurta ve embiryolan, yüzyılı aşkın bir suredir mayotik olgunlaşma, döllenme ve gelişim biyolojisi çalışmalarında model sistem olarak kullanılmaktadır. Bir saklama metodu bulunmadığından, deniz canlılarının asitleriyle çalışmanın en büyük zorluğu, senenin belli aylarında bulunmalarıdır. Bu tez çalışması iki bölümden oluşmaktadır. Amaçlardan biri, uzun vadede deniz yıldızı o asitlerinin dondurularak saklanması için uygun protokolün geliştirilmesi için, hücrelerin farklı ortamlarda hızlı (-20°C/minute) ve yavaş (-0,5, -l,0°C/minute) olarak dondurulmaya verdiği tepkinin araştırılmasıdır. Deniz yıldızı oositlerinde hücre içi buz oluşumu şaşırtıcı düzeyde yüksek sıcaklıklarda (sıfırın altında) görülmektedir öyle ki ortalama hücre içi buz oluşumu derecesi, -4,2 ile -6,1°C arasında gözlenmiştir. Bunun dışında ilginç bir şekilde, bazı koşullardaki deneylerde buz oluşumu sitoplazmada birden fazla noktadan başlamaktadır. Hücre içi buz oluşumu, yavaş dondurma ve dondurulma öncesi dehidrasyon uygulamalıyla engellenememiştir. Bunlara ek olarak hücrelere başarıyla nüfuz edebildiği halde 1,5 M DMSO'in (dimetil sülfoksit) eklenmesi de hücre içi buz oluşum derecesine kaydadeğer bir etki yapmamıştır. Bütün bu krayomikroskobik analizler sonucunda vitrifıkasyon deniz yıldızı oositleri dondurulmasında uygun yöntem olarak belirmiştir. Çalışmanın diğer amacı ise denizyıldızı (Asterias rubens) Gcij proteininin DNA dizisinin klonlanmasıdır. Denizyıldızı oosit olgunlaşmasını uyaran hormonun (1-metiladenin; 1- MA) reseptörünün, G ai içeren heterotrimerik G-protein ile birlikte çalişmasi, Gai'nin bu iletide muhtemel bir rolü olduğunu önermektedir. Elde ettiğimiz klonun dizi analizleri, denizyıldızı oositlerinin olgunlaşmasını sağlayan 1-MA'nin uyardığı iletide Gai'nin rolünün ve reseptörünün belirlenmesine yönelik çalışmalarda kullanılabilinecek, Got, DNA dizisinin başarıyla klonlandığını göstermektedir.
Özet (Çeviri)
ABSTRACT CRYOPRESERVATION OF STARFISH OOCYTES AND CLONING OF STARFISH Gcij SUBUNIT Starfish oocytes, eggs and embryos have been used for over a century as an important model system for studying meiotic maturation, fertilization and development. The most formidable obstacle to working with marine oocytes is their seasonal availability, yet a successful means of preserving these cells has not been reported. This thesis has two aims. The first is to investigate the response of starfish oocytes to rapid (-20°C/minute) and slow (-0.5, -1.0°C/minute) freezing with a variety of conditions in order to develop a cryopreservation protocol. Starfish oocytes formed intracellular ice at very high temperatures such that the average temperature of intracellular ice formation (IIF) was between -4.2 to -6.1°C. Interestingly, under some conditions, the ice nucleation was detected at multiple sites within the cytoplasm of starfish oocytes. The temperature of IIF (Tuf) in starfish oocytes was not significantly depressed by slow cooling or dehydration of the cells with hypertonic media. Furthermore, the addition of 1.5 M DMSO (dimethyl sulphoxide) did not significantly affect the Thf, even though it successfully permeated the oocytes. All these cryomicroscopic analysis suggests vitrification as a suitable cryopreservation protocol for starfish oocytes. The second aim of this work is to isolate and clone the coding sequence of starfish {Asterias rubens) Gctj protein from starfish oocytes. The fact that starfish oocyte maturation-inducing hormone (1-methyladenine; 1- MA) receptor is functionally linked to Ga\ containing heterotrimeric G-protein, strongly suggests a role for Get; subunit in starfish oocyte maturation. The sequence of Gotj was amplified using RT-PCR with cDNA derived from total RNA of A. rubens oocytes at different stages of oogenesis. The sequence analysis revealed out that we have successfully cloned A. rubens Ga\ that can be used in further studies to elucidate the possible roles of G<Xj in 1-MA induced cellular responses or to characterize candidate 1-MA receptor that would interact with Get, subunit.
Benzer Tezler
- Effects of fructans on cryopreservatıon of Cassava
Kasavanın kriyokorumasında fruktanların etkileri
ELİF PİRANLIOĞLU
Yüksek Lisans
İngilizce
2021
BiyomühendislikMarmara ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. EBRU TOKSOY ÖNER
- Development of a levan-based formulation for efficient sperm cryopreservation
Etkili sperm kriyoprezervasyonu için levan bazlı bir formülasyonun geliştirilmesi
MUBARAK SADAUKI
Yüksek Lisans
İngilizce
2024
BiyomühendislikMarmara ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. EBRU TOKSOY ÖNER
DR. ÖĞR. ÜYESİ NECATİ FINDIKLI
- IMU-ASYA culture collection: Molecular barcoding and cryopreservation of microalgae ısolated during IVth National Antarctic Science Expedition
IMU-ASYA kültür koleksiyonu: IV. Ulusal Antarktika Bilim Seferi sırasında izole edilen mikroalglerin moleküler barkodlanması ve kriyoprezervasyonu
ASİYE SİNACİ
Yüksek Lisans
İngilizce
2022
Biyolojiİstanbul Medeniyet ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. TURGAY ÇAKMAK
- Dietary lipid effects on the endocrine status of ewes and the development, metabolism and cryopreservation qualities of their in vitro and in vivo produced embryos
Koyunların endokrin durumu ve in vitro ve in vivo üretilmiş embriyolarının gelişimi, metabolizması ve kriyoprezervasyon kaliteleri üzerine diyet lipid etkileri
ALİ GALİP ÖNAL
- Primer tavşan böbrek hücre kültürünün krioprezervasyonu
Cryopreservation of primary rabbit kidney cell culture
NİZAMİ DURAN
Yüksek Lisans
Türkçe
1997
MikrobiyolojiÇukurova ÜniversitesiMikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. EROL AKAN