Cryopreservation of starfish oocytes and cloning of starfish gai subunit
Denizyıldızı oositlerinin dondurularak saklanması ve denizyıldızı gai proteininin klonlanması
- Tez No: 112075
- Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. KİRSTEN C. EDEPLİ
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2001
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Boğaziçi Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 78
Özet
VI ÖZET DENİZYILDIZI OOSİTLERİNİN DONDURULARAK SAKLANMASI VE DENİZYILDIZI G ai PROTEİNİNİN KLONMASI Denizyıldızı oosit, yumurta ve embiryolan, yüzyılı aşkın bir suredir mayotik olgunlaşma, döllenme ve gelişim biyolojisi çalışmalarında model sistem olarak kullanılmaktadır. Bir saklama metodu bulunmadığından, deniz canlılarının asitleriyle çalışmanın en büyük zorluğu, senenin belli aylarında bulunmalarıdır. Bu tez çalışması iki bölümden oluşmaktadır. Amaçlardan biri, uzun vadede deniz yıldızı o asitlerinin dondurularak saklanması için uygun protokolün geliştirilmesi için, hücrelerin farklı ortamlarda hızlı (-20°C/minute) ve yavaş (-0,5, -l,0°C/minute) olarak dondurulmaya verdiği tepkinin araştırılmasıdır. Deniz yıldızı oositlerinde hücre içi buz oluşumu şaşırtıcı düzeyde yüksek sıcaklıklarda (sıfırın altında) görülmektedir öyle ki ortalama hücre içi buz oluşumu derecesi, -4,2 ile -6,1°C arasında gözlenmiştir. Bunun dışında ilginç bir şekilde, bazı koşullardaki deneylerde buz oluşumu sitoplazmada birden fazla noktadan başlamaktadır. Hücre içi buz oluşumu, yavaş dondurma ve dondurulma öncesi dehidrasyon uygulamalıyla engellenememiştir. Bunlara ek olarak hücrelere başarıyla nüfuz edebildiği halde 1,5 M DMSO'in (dimetil sülfoksit) eklenmesi de hücre içi buz oluşum derecesine kaydadeğer bir etki yapmamıştır. Bütün bu krayomikroskobik analizler sonucunda vitrifıkasyon deniz yıldızı oositleri dondurulmasında uygun yöntem olarak belirmiştir. Çalışmanın diğer amacı ise denizyıldızı (Asterias rubens) Gcij proteininin DNA dizisinin klonlanmasıdır. Denizyıldızı oosit olgunlaşmasını uyaran hormonun (1-metiladenin; 1- MA) reseptörünün, G ai içeren heterotrimerik G-protein ile birlikte çalişmasi, Gai'nin bu iletide muhtemel bir rolü olduğunu önermektedir. Elde ettiğimiz klonun dizi analizleri, denizyıldızı oositlerinin olgunlaşmasını sağlayan 1-MA'nin uyardığı iletide Gai'nin rolünün ve reseptörünün belirlenmesine yönelik çalışmalarda kullanılabilinecek, Got, DNA dizisinin başarıyla klonlandığını göstermektedir.
Özet (Çeviri)
ABSTRACT CRYOPRESERVATION OF STARFISH OOCYTES AND CLONING OF STARFISH Gcij SUBUNIT Starfish oocytes, eggs and embryos have been used for over a century as an important model system for studying meiotic maturation, fertilization and development. The most formidable obstacle to working with marine oocytes is their seasonal availability, yet a successful means of preserving these cells has not been reported. This thesis has two aims. The first is to investigate the response of starfish oocytes to rapid (-20°C/minute) and slow (-0.5, -1.0°C/minute) freezing with a variety of conditions in order to develop a cryopreservation protocol. Starfish oocytes formed intracellular ice at very high temperatures such that the average temperature of intracellular ice formation (IIF) was between -4.2 to -6.1°C. Interestingly, under some conditions, the ice nucleation was detected at multiple sites within the cytoplasm of starfish oocytes. The temperature of IIF (Tuf) in starfish oocytes was not significantly depressed by slow cooling or dehydration of the cells with hypertonic media. Furthermore, the addition of 1.5 M DMSO (dimethyl sulphoxide) did not significantly affect the Thf, even though it successfully permeated the oocytes. All these cryomicroscopic analysis suggests vitrification as a suitable cryopreservation protocol for starfish oocytes. The second aim of this work is to isolate and clone the coding sequence of starfish {Asterias rubens) Gctj protein from starfish oocytes. The fact that starfish oocyte maturation-inducing hormone (1-methyladenine; 1- MA) receptor is functionally linked to Ga\ containing heterotrimeric G-protein, strongly suggests a role for Get; subunit in starfish oocyte maturation. The sequence of Gotj was amplified using RT-PCR with cDNA derived from total RNA of A. rubens oocytes at different stages of oogenesis. The sequence analysis revealed out that we have successfully cloned A. rubens Ga\ that can be used in further studies to elucidate the possible roles of G
Benzer Tezler
- Aseel ırkı horozlarda spermanın farklı oranlarda gliserol ve iodiksanol ile dondurulması
Cryopreservation of aseel cock sperm using different ratios of glycerol and iodixanol
EBUDERDA GÜNAY
Doktora
Türkçe
2024
Veteriner Hekimliğiİstanbul Üniversitesi-CerrahpaşaDölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı
PROF. DR. KEMAL AK
- Tek aşamalı dondurma teknikleri kullanılarak Mentha piperita L. bitkisinin kriyoprezervasyonu ve kriyoprezervasyon sonrası genetik kararlılığının ISSR markör sistemleri ile doğrulanması
Cryopreservation of Mentha piperita L. via single step freezing techniques and confirmation of genetic stability after cryopreservation using ISSR marker systems
MUAMMER CEYLAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2018
Bilim ve TeknolojiMuğla Sıtkı Koçman ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ERGUN KAYA
- Primer tavşan böbrek hücre kültürünün krioprezervasyonu
Cryopreservation of primary rabbit kidney cell culture
NİZAMİ DURAN
Yüksek Lisans
Türkçe
1997
MikrobiyolojiÇukurova ÜniversitesiMikrobiyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. EROL AKAN
- Köpek oositlerinin vitrifikasyon yöntemiyle dondurulması ve partenogenez aktivasyonu
Cryopreservation of canine oocytes by vitrification method and parthenogenetic activity
RABİA GÖZDE ÖZALP
Doktora
Türkçe
2020
Veteriner HekimliğiBursa Uludağ ÜniversitesiDölerme ve Suni Tohumlama Ana Bilim Dalı
PROF. DR. HAKAN SAĞIRKAYA
- İmmatür sığır oositlerinin vitrifikasyon tekniği ile etilen glikol ve DMSO kullanarak payetlerde dondurulması
Cryopreservation of immature bovine oocytes by vitrification with ethylene glycol and DMSO in straws
YUNUS ÇETİN
Doktora
Türkçe
2004
Veteriner HekimliğiAnkara ÜniversitesiDoğum ve Jinekoloji (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
PROF.DR. AYHAN BAŞTAN