Koyun beyni psödokolinesterazının saflaştırılması ve bazı özelliklerinin incelenmesi
Başlık çevirisi mevcut değil.
- Tez No: 11390
- Danışmanlar: PROF. DR. E. FERHAN TEZCAN
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 1990
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 93
Özet
ÖZET Çalışmada, psödokolinesteraz (açilkolin açil-hidrolaz, EC 3.1.1.8) koyun beyninden saflaştırıldı ve kinetik özellikleri araştırıldı. Koyun beyni homojenatı, 0.5 mM EDTA içeren 10 mM potasyum fosfat tamponu pH 6.9'da hazırlandı ve önce 20 000 xg'de 30 dakika, sonra 100 000 xg'de bir saat santrifüj edilerek mikrozomal fraksiyon atıldı. Supernatant: çalışmada enzim kaynağı olarak kullanıldı. Saflaştırma basamakları sırasıyla, amonyum sülfat çöktürmesi; DEAE- Trisacryl M iyon değiştirici kromatografi (ya da 55°C'da bir saat ısıtma), prokainamid-Sepharose 4B afinite kromatografi sinden oluşmaktadır. Enzim DEAE-Trisacryl M kolonundan, 10 mM potasyum fosfat tamponu pH 6.9 içinde hazırlanmış 0-0.6 M linear NaCl gradienti ile tek bir akti- vite zirvesi olarak elüe oldu. DEAE-Trisacryl M kromatografi sinden ya da 55°C'de bir saat ısıtıla rak elde edilen örnekler, saflaştırmanın son basamağında prokainamid - Sepharose 4B afinite kolonuna uygulandı. 0.5 mM EDTA içeren 20 mM potas yum fosfat tamponu pH 6.9'da hazırlanmış linear tuz gradienti ile enzim, afinite kolonundan tek bir zirve olarak elde edildi. Koyun beyni PKE'sinin molekül ağırlığı, Sephadex G-200 jel filtras- yon yöntemiyle saptandı. Standart grafikten G4 formu için molekül ağırlı ğı 290 000, G2 formu için 170 000, Gl formu için ise 90 000 olarak bulundu.78 Saflaştırılan enzim örneklerinde, substrat olarak BTK kullanılarak yapılan kinetik deneyler sonucunda, elde edilen v değerlerine karşı substrat derişimleri grafiklendiğinde, enzimin Michael i s-Menten kinetiğine uymadı ğı, takriben 2 mM BTK derişiminden sonra aktive olduğu gözlendi. Grafikten (S)0,75 / (S)o, 50 oranı 4 olarak hesaplandı. Ayrıca Hill grafiğinden nH= 1.2 olarak saptandı ve bu bulgulardan, enzimin substratına karşı hafif çe negatif kooperativite gösterdiği sonucuna varıldı. Ayrıca üç grup altında toplanabilecek inhibitor çalışmaları yapıldı ve : A) Substrat anal ogl arından süksinilkolin, benzoilkolin ve kolinin, B) Katyonlardan Al+++, Cd++, Zn++ ve Li+ 'un, C) Esteratik bölge inhibitörlerinden F -'ün inhibisyonu incelendi. Substrata yapıca yakın benzerlik gösteren süksinilkolin ve benzoil- kolinin PKE'yi kompetitif olarak inhibe ettiği saptanarak Ki. sabitleri sı rasıyla 0.49 ve 0.32 mM olarak hesaplandı. K. sabitlerinden benzoil kol inin inhibitor etkisinin daha fazla olduğu görülmektedir. Kolin inhibisyonunun ise hiperbolik karışık tipte olduğu bulunarak, a= 9.10, B= 0.72 ve Ki= 0.76 mM olarak hesaplandı. Katyonlardan Al+++ 'un enzimi lineer karışık-tipte; Cd++, Zn++ ve Li+ 'un ise hiperbolik karışık-tipte inhibe ettiği saptanarak, Al+++ için Ki= 0.06, Cd++ için Ki= 0.076, Zn++ için Ki= 0.056, Li+ için Ki= 0.496 olarak hesaplandı. înhibisyon tiplerinden enzim üzerinde katyonların bağlanabilecekle ri allosterik merkezlerin bulunması gerektiğine karar verilerek, karışık-79 tipteki inhibisyonların katyonların değerliklerine bağlı olarak lineer ya da hiperbolik olabileceği sonucuna varıldı. Değerlikleri büyüdükçe katyonla rın inhibisyon etkileri artmakta, Ca++ ve Mg++ iyonları tarafından bu etki ortadan kaldırılabilmektedir. Esteratik bölge inhibitörlerinden F- 'ün de hiperbolik karışık-tipte bir inhibisyona neden olduğu saptanarak, Ki= 0.98 mM olarak hesaplandı.
Özet (Çeviri)
Özet çevirisi mevcut değil.
Benzer Tezler
- Koyun beyni glutatyon redüktazının saflaştırılması ve bazı özelliklerinin incelenmesi
Başlık çevirisi yok
N.LEYLA AÇAN
- Kinetic and equilibrium binding analysis of sheep brain opioid receptors
Koyun beyni opat reseptörlerinin kinetik ve denge hali bağlanma analizleri
HOMA MAHBOOBİ
- Koyun beyninin 3 tesla manyetik rezonans görüntülerinin üç boyutlu rekonstrüksiyonu
Three-dimensional reconstruction from 3 tesla magnetic resonance images of sheep brain
SEDAT AYDOĞDU
Doktora
Türkçe
2021
Veteriner HekimliğiSelçuk ÜniversitesiAnatomi (Veterinerlik) Ana Bilim Dalı
PROF. DR. EMRULLAH EKEN
PROF. DR. MUSTAFA KOPLAY
- Koyun beyninden sorbitol dehidrogenaz enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı ilaçların enzim aktivitesi üzerine etkilerinin incelenmesi
Purification, characterization of sorbitol dehydrogenase from sheep brain, and investigation effects of some active substances on the enzyme activity
BEDİA ÖZALTIN
- Koyun beyninde olfaktör sistem anatomisinin beyaz cevher disseksiyonu tekniği ile gösterilmesi
White matter dissection of olfactory system in sheep
AHMET FATİH ATİK
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2012
AnatomiMarmara ÜniversitesiNöroşirürji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. AŞKIN ŞEKER
