Increase of asparaginase in vivo half life by encapsulation and surface modification
Asparajinaz'ın in vivo yarı ömrünün enkapsülasyon ve yüzey modifikasyonu ile artırılması
- Tez No: 116527
- Danışmanlar: PROF.DR. NAZMİ ÖZER, PROF.DR. VASIF HASIRCI
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: L-asparjinaz, PHBV, nanokapsül, katı-faz enzim modifikasyonu. VI, L-asparginase, PHBV, nanocapsules, solid-phase enzyme modification IV
- Yıl: 2001
- Dil: İngilizce
- Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 125
Özet
öz ASPARAJİNAZIN IN VIVO YARI ÖMRÜNÜN ENKAPSÜLASYON VE YÜZEY MODİFİKASYONU İLE ARTIRILMASI Baran, Erkan Türker Ph.D., Department of Biotechnology Tez yöneticisi: Prof. Dr. Vasıf Hasırcı Ortak tez yöneticisi: Prof. Dr. Nazmi Özer Temmuz 2001, 125 sayfa Bu çalışmada antilökemik enzim olan L-asparjinaz immünolojik, toksik özelliklerinin yok edilmesi ve faredeki in vivo yan ömrünün artırılması için poli(3- hidroksibutirat-ko-3-hidroksivalerat) nanokapsülleri içerisine enkapsüle edildi ve katı-faz üzerinde polietilen glikol ile modifiye edildi. Nanokapsüller ikili emülsiyon yöntemiyle hazırlanarak her bir fazı enkapsülasyon için model enzimler ve proteinler kullanılarak sistematik olarak değiştirildi. Optimum sonuç veren değişikliklerin birleştirilmesiyle enkapsüle olan katalazın aktivitesi altı kat artırılabildi. W2 fazının pH'sı L-asparajinazın izoelektrik noktasında tutularak, enkapsülasyon verimi % 23.7 den % 27.9 ye kadar artırıldı. Ayrıca asparajinazın PEG2 modifikasyonu ile enkapsülasyon verimi % 23.7 den % 28.0'e çıkarıldı. Optimum şartların birleştirilmesi ile baza oranla spesifik aktivitede 0.074'den 0.429 U/(mg nanokapsül) değerine (altı kat) artış sağlandı.Katalaz model enzim olarak kullanılarak katı-faz yönlendirmeli PEG ile modifikasyonu Procion red-Sepharose affinite ortamı üzerinde yapıldı. Modifikasyon zamanına karşı elde edilen spesifik aktivite değerleri değişik hazırlamalarda çok az değişiklik gösterdi. Katı-faz üzerinde PEG ile modifıye edilmiş asparjinazın fare kan dolaşımında kalma süresi uzadı. İki gün sonra bile aktivitenin % 50 kadarı gözlenebildi. Buna karşılık modifıye olmamış asparjinaz keskin bir azalma göstererek 10 saat sonra aktivitesinin % 50 kadarını gösterebilmiştir. Affinite ortamı üzerinde ASNaz'a PEG2 ve heparin bağlanması başarıyla sağlandı. Farelere enjekte edildikten 6.5 saat sonra serumdaki kalan enzim aktivitesi % 70 civarında bulundu. Modifiye olmamış nanokapsül aktivitesi 4 saatte % 38 'e düştü. Radyoaktivite ile işaretlenmiş aynı örneğin radyoaktivitesinin ölçümü sonucunda daha kısa zamanda (3 saat) kanda daha az enzim (başlangıç miktarının % 30'u) saptandı. Heparin bağlanmış PHBV nanokapsülleri modifiye olmamış PHBV nanokapsüllerine göre dolaşımda daha uzun kalma süresi gösterdiler. 6 saat sonra enzim aktivitesinin % 50 kadarı kanda saptanabildi. Aynı örneğin kandaki radyoaktivite ölçümleri ilk aşamalarda hızlı düşüş gösterdi. Sekiz saat sonra radyoaktivite hala gözlenebiliyordu. Katı-fazda PEG ile modifiye olmuş veya PHBV içine enkapsüle edilmiş asparaginaz enjeksiyonları herhangi bir istenmeyen etki ve anafilaksi belirtisi göstermedi.
Özet (Çeviri)
ABSTRACT INCREASE OF ASPARAGINASE IN VIVO HALF LIFE BY ENCAPSULATION AND SURFACE MODIFICATION Baran, Erkan Türker Ph.D., Department of Biotechnology Supervisor: Prof. Dr. Vasıf Hasırcı Co-Supervisor: Prof. Dr. Nazmi Özer July 2001, 125 pages In the present study, antileukemic enzyme L-asparaginase was encapsulated into poly(3-hydroxybutyrate-co-3-hydroxyvalerate) (PHBV) nanocapsules or modified with polyethylene glycol in order to diminish the immunogenicity and toxicity of the enzyme and to increase its in vivo half life in mice. Nanocapsules were prepared by water-in-oil-in-water approach and each phase was changed systematically while using model enzymes and proteins for encapsulation. By combining the optimum conditions for each parameter changed, an increase of up to six folds was obtained in the entrapped catalase activity. By changing the pH of the W2 phase to the isoelectric point of L- asparaginase, the encapsulation was increased from 23.7 % to 28.0 %. Also, PEG2 modification of L-asparaginase (ASNase) increased the encapsulation efficiency from 23.7 % to 27.9 %. Combination of optimum conditions enabled a further mincrease in specific activity from 0.074 to 0.429 U/(mg nanocapsule) compared to the base (about 6 folds). Solid-phase oriented enzyme modification was performed by using a model enzyme, catalase, on affinity medium Procion red-Sepharose. Specific activity versus modification time showed small differences in batches. Solid-phase PEG modified ASNase showed prolonged presence in the blood circulation of mice. Even after 2 days, more than 50 % of the activity was still observed in the circulation. Unmodified ASNase had a rapid clearance from blood. Less than 50 % of the activity remained after 10 hours of circulation. ASNase conjugated successively with PEG2 and heparin on affinity medium. L- Asparaginase had about 70 % of the input enzymatic activity after 6.5 h. The enzyme activity of unmodified PHBV nanocapsules in the blood dropped to 38 % of its initial value 4 hours after injection. When the same sample was tested by using the radioactivity of the radio-labelled enzyme as the detection method a much lower enzyme (30 % of initial) was measured in a shorter time (3 h). PHBV nanocapsules conjugated with heparin on the surface showed a longer presence in the circulation compared to unmodified PHBV nanocapsules. After 6 h, around 50 % of the enzyme was still present in the blood. Radioactivity measurements using the same sample showed a sharp decrease in enzyme amount in the circulation in the early stages. However, radioactivity was still detectable at the 8th hour. No adverse effects and symptoms of anaphylaxis were observed upon injection of ASNase modified with PEG or encapsulated in PHBV nanocapsules to mice I.V. through the tail vein.
Benzer Tezler
- Lösemilerde tedavi öncesi ve relaps dönemlerin kemoterapik duyarlılığı MDR-1 (P-glikoprotein) ve MRP-1 (multidrug resistance associated protein) düzeyleri
The Chemotherapautic sensitivity, levels of MDR-1 (p-glycoprotein) and MRP-1 (multidrug resistance associated protein) in leukemias before treatment and at relaps terms
ESRA TANYEL
Yüksek Lisans
Türkçe
2002
OnkolojiAkdeniz Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
DOÇ.DR. BURHAN SAVAŞ
PROF.DR. M. AKİF YEŞİLİPEK
- Endoplazmik retikulum stres modeli oluşturulan fare ovaryumlarında katlanmamış protein yanıtının araştırılması
Investigation of unfolded protein response in mouse ovaries created with an endoplasmic reticulum stress model
GİZEM ÖZTAŞ
Yüksek Lisans
Türkçe
2022
Histoloji ve EmbriyolojiEge ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. AYŞEGÜL UYSAL
- Monitoring the quality of potato crisps and occuring processing contaminants
Patates cipslerinin kalitesinin izlenmesi ve oluşan proses kontaminantları
İSEL ÇİPRUT
Yüksek Lisans
İngilizce
2016
Gıda Mühendisliğiİstanbul Teknik ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. BERAAT ÖZÇELİK
- Çoçukluk çağı akut lenfoblastik lösemisinde indüksiyon tedavisinin koagülasyon ve fibrinolitik sistem üzerine etkileri
The effects of induction treatment on the coagulation and fibrinolytic system in children with acute lymphoblastic leukemia
MERYEM ALBAYRAK
Tıpta Yan Dal Uzmanlık
Türkçe
2010
Çocuk Sağlığı ve HastalıklarıGazi ÜniversitesiÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. TÜRKİZ GÜRSEL
- Kemoterapötik Bir Ajan Olan L-asparaginazın Farklı Polimerik Yapılara İmmobilizasyonu ve Karakterizasyonu
Kemoterapötik Bir Ajan Olan L-asparaginazın Farklı Polimerik Yapılara İmmobilizasyonu ve Karakterizasyonu
AHMET ULU