Enzim bağlı monodispers partiküllerin sentezi, karakterizasyonu ve yüksek performanslı sıvı kromatografisinde kolon materyali olarak kullanımı
Synthesis, characterization and enzyme-carrying monodisperse particles and their use in high performance liquid chromatography as column-packing material
- Tez No: 123324
- Danışmanlar: PROF. DR. ALİ TUNCEL
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Kimya Mühendisliği, Chemical Engineering
- Anahtar Kelimeler: immobilize enzim reaktörleri, a-kemotripsin, HPLC, Immobilized enzyme reactors, u-chymotrypsin and HPLC
- Yıl: 2002
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 69
Özet
/ Enzim Bağlı Monodispers Partiküllerin Sentezi, Karakterizasyonu ve Yüksek Performanslı Sıvı Kromatografisinde Kolon Materyali Olarak Kullanımı Zinnet Bilici Hacettepe Üniversitesi. Kimya Mühendisliği Bölümü ÖZ Tez kapsamında immobilize enzimi kovalent bağlı formda içeren bir yüksek performanslı sıvı kromatografisi (High Performance Liquid Chromatography, HPLC) kolon dolgu materyali geliştirilmiştir. Hazırlanan kolon izokratik koşullarda çalıştırılarak immobilize enzim kinetiği izlenmiştir. Kolon dolgu materyali olarak monodirpers formda hazırlanan poli-glisidil metakrilat- stıren-divinilbenzen poli(GMA-DVB) ve poli-stiren-glisidil metakrilat-divinil benzen, poli(S-GMA- DVB) partiküller kullanmıştır. Bu partiküller çok basamaklı mikrosüspansiyon polimerizasyonu yöntemiyle yaklaşık 12 pim boyutuna sahip olacak şekilde makrogözenekli formda sentezlenmiştir. Polimerizasyon sonrasında, partikül üzerinde bulanan epoksipropil grupları, enzim immobilizasyonu ıcin kullanılmak üzere primer amin formuna dönüştürülmüştür. u-kemotripsin çalışmada kromatografik destek materyaline immobilize edilecek enzim olarak seçilmiştir. Enzim, tampon ortamında glutaraldehit aktivasyonu yöntemiyle kovalent olarak monodispers-makrogözenekli formdaki partiküller üzerine bağlanmıştır, immobilize enzim bağlı partiküller 50 atm basınç altında. 4.6x50 mm boyutlarına sahip standart HPLC kolonlarına doldurulmuştur. HPLC cihazında, izokratik koşullarda substrat olarak kullanılan Benzoil-L-tirosin etil ester (BTEE) kolona beslenerek, oluşan nıd'olız reaksiyonunun kinetiği değişkin ve yatışkın durum koşullarında. UV-Vis dedektör yardımıyla izlenmıştır Çalışma farklı enzim yüklemeleri ile hazırlanan kolonlarda, mobil faz akış hızı, substrat besleme derişimi, sıcaklık ve pH değiştirilerek, değişkin ve yatışkın durum koşullarında, substrat dönüşümü tayın edilmiştir. Elde edilen kinetik veriler, Michealis-Menten modeli ile immobilize enzim kinetik parametrelerinin belirlenmesi amacıyla kullanılmıştır. Ayrıca kolonların tekrarlı kullanılabilirlik davranışı incelenmiştir Sonuçlar immobilize enzim içeren HPLC reaktörlerinin, enzim-susbstrat reaksiyon kinetiğinin izlenmesinde başarıyla kullanılabilecek yeni bir reaktör türü olduğunu ortaya koymuştur.
Özet (Çeviri)
Synthesis, Characterization of Enzyme-Carrying Monodispers Particles and Their Use in High Performance Liquid Chromatography as Colomn-Packing Material. Zinnet Bilici Hacettepe Üniversy, Chemical Engineering Department ABSTRACT In this thesis, a chromatographic packing material suitable for High Performance Liquid Chromatography, carrying a covalently bound enzyme was developed. The prepared HPLC columns are used under isocratic conditions and the kinetics of immobilized enzyme was monitored. Monodisperse and macroporous poly(styrene-glycidyl methacrylate-divinylbenzene) and poly(glycidyl methacrylate-divinylbenzene) particles were evaluated as the column-filling material. These particles with a diameter of approximately 12 urn were synthesized by a multistage mıcrosuspensıon polymerization. Following polymerization, the epoxypropyl groups present on the particles were converted into the primary amine form as a suitable functionality for enzyme immobilization, u-chymotrypsin was selected as the model enzyme that immobilized onto the chromatographic support material. The selected enzyme was covalently immobilized onto the monodiperse-macroporous particles via glutaraldehyde activation conducted in a buffer medium. The particles carrying immobilized enzyme was charged into the standard HPLC columns having the dimensions of 4.6x50 mm under a pressure of 50 atm The mobile phase including benzoyl-L- lyrosine ethyl ester as a substrate was fed into the column under isocratic conditions and the Kinetics of the enzyme-substrate reaction was continuously monitored both in unsteady and steady state. The substrate conversion was determined both in unsteady and steady state by changing the flow rate of mobile phase, substrate feed concentration, pH and temperature. The kinetic data was evaluate for the determination of model parameters based on Michealis-Menten model. Additionaly, the stability behaviour of the immobilized enzyme was tested by succesive-use experiments. The results indicated that immobilized-enzyme-HPLC reactors could be succesfully used for the on-line monitoring of enzyme-substrate reactions
Benzer Tezler
- p-klorometilstiren bazlı polimerik partiküllerin sentezi ve glikoprotein izolasyonu ve immobilizasyonunda kullanılması
Synthesis of polymeric beads based on p-chloromethylstyrene and the use of them for separation and isolation of glycoprotein
TAHSİN BAHAR
Doktora
Türkçe
2001
Kimya MühendisliğiHacettepe ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SÜLEYMAN ALİ TUNCEL
- Sıcaklığa duyarlı hidrojel matrislere a-kemotripsin immobilizasyonu ve reaktör koşullarının immobilize sistem performansına etkisi
Immobilization of a-chymotrypsin within thermoresponsive hydrogel matrices and the effect of reactor conditions on the performance of immobilized enzyme
METE BAYHAN
Yüksek Lisans
Türkçe
1997
Kimya MühendisliğiHacettepe ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. S. ALİ TUNCEL
- Yüksek performanslı sıvı kromatografisi için immobilize enzim reaktörlerinin geliştirilmesi ve kinetik karakterizasyonu
Development and kinetic characterization of immobilized enzyme reactors for high performance liquid chromatography
BEKİR ÇELEBİ
Doktora
Türkçe
2010
BiyokimyaHacettepe ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SÜLEYMAN ALİ TUNCEL
- Peroksidaz aktivitesine sahip nanopartikül/mikroküre kompozitlerinin sentezi ve glutatyon tayininde kullanılması
Synthesis of nanoparticle/ microsphere composites with peroxidase activity and their use in the determination of glutathione
SELEN YAĞMUR GÜNGÖR
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
Kimya MühendisliğiHacettepe ÜniversitesiKimya Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SÜLEYMAN ALİ TUNCEL
DR. FATOŞ ÇİĞDEM KİP
- Visible light-induced atom transfer radical polymerization
Görünür bölge atom transfer radikal polimerizasyonu
MUSTAFA ÇİFTÇİ
Yüksek Lisans
İngilizce
2012
Kimyaİstanbul Teknik ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. YUSUF YAĞCI