zwf mutant Escherichia coli DF214 suşunun Synechococcus sp. PCC 7942 zwf fragmentleriyle genetik komplementasyonu üzerine araştırmalar
Investigations on the genetic complementation of the zwf mutant Escherichia coli DF214 with zwf fragments of Synechococcus sp. PCC 7942
- Tez No: 127233
- Danışmanlar: YRD. DOÇ. DR. HAYDAR KARAKAYA
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Synechococcus, zwf glukoz-6-fosfat dehidrojenaz, genetik komplementasyon, Glükozfosfat dehidrogenaz, Synechococcus, zwf glucose-6-phosphate dehydrogenase, genetic complementation, Glucosephosphate dehydrogenases
- Yıl: 2002
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ondokuz Mayıs Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
rv ÖZET zwfMUTANT ESCHERICHIA C0Z7DF214 SUSUNUN SYNECHOCOCCUS SP. PCC 7942 zwfFRAGMENTLERiYLE GENETİK KOMPLEMENTAS YONU ÜZERİNE ARAŞTIRMALAR Bu araştırmada Synechococcus sp. PCC 7942 zwf fragmentleri kullanılarak zwf mutant E. coli DF214 suşunun komplementasyonunun gerçekleştirilmesi hedeflenmiştir. Araştırmanın gerekçesi Synechococcus sp. PCC 7942 zwf geninin mutasyonal analizleri için etkili bir konak sistemi oluşturmaktır. 2.9 kb Synechococcus sp. PCC 7942 zwf fragmenti taşıyan pNUT1 rekombinant vektörü ile zwf mutant E. coli DF214 ve yabani tip E. coli JM109 hücreleri transforme edildi. Plazmitin kodladığı ampisilin direncinin takibi ve restriksiyon fragment analizleriyle transformasyonun doğru bir şekilde gerçekleştiği belirlendi. Transformant DF214 (SZD29) hücrelerinde yapılan analizlerde glukoz-6-fosfat dehidrojenaz (G6PDH) aktivitesine rastlanmadı. Yine transformant JM109 (SZJ29) hücrelerinde yapılan aktivete analizlerinde de yabani tip aktivitenin üzerinde ilave bir G6PDH aktivitesine rastlanmadı. Sonuçta Synechococcus sp. PCC7942 zwf geninin E. coli içinde ekspresyonunun gerçekleşemediğine karar verildi. Çalışmalar Synechococcus sp. PCC7942 zwf fragmentinin füzyon proteini şeklinde lac operonunun bir parçası olarak ekspresyonuna yöneltildi. Bunu gerçekleştirmek için zwf geninin başlangıç ve bitiş bölgeleriyle homolog olan ve geni lacZ' geninin okuma satırında tutacak bir fragment oluşturacak iki PCR primeri tasarlandı. Bu primerler kullanılarak 1.6 kilobazlık bir fragment şeklinde tam bir Synechococcus sp. PCC 7942 zwf geni PCR amplifikasyonu ile üretildi. Bu araştırmamn devamı olarak 1.6 kb zwf fragmentinin doğru pozisyonda pUC18 lacZ' içinde füzyon proteini olarak ekspresyonu gerçekleştirilebilir. Ayrıca fragment güçlü bir ekspreyon vektörü içinde büyük ölçekte üretilerek komplementasyon sağlanabilir.
Özet (Çeviri)
ABSTRACT INVESTGATIONS ON THE GENETIC COMPLEMETATION OF THE zwf MUTANT ESCHERICHIA COU STRAIN DF214 WITH THE zwf FRAGMENTS OF SYNECHOCOCCUS SP. PCC 7942 In this study, it was aimed to achieve the complementation of the zwf mutant E. coli strain DF214 using the zw/fragments of Synechococcus sp. PCC 7942. The objective of the study was to produce a versatile host system for mutation analyses of the Synechococcus sp. PCC7942 zwf gens. zwf mutant E. coli strain DF214 and wildtype strain JM109 cells were transformed with a recombinant vector pNUTl carrying 2.9 kb Synechococcus sp. PCC 7942 zw/fragment. Occurance of correct transformation was decided by ampicillin resistance conferred by the pNUTl, and by means of restriction fragment analysis. Glucose-6-phosphate dehydrogenase (G6PDH) assays of the transformant DF214 (SZD29) cells showed that no enzyme activity was gained. Also assays conducted on the transformant JM109 (SZJ29) cells indicated no additional G6PDH activity over the wildtype activity. Eventually, it was concluded that the expression of the Synechococcus sp. PCC 7942 zwf gene was not occurred in E. coli cells. Studies were oriented to the expression of the Synechococcus sp. PCC 7942 zwf gene as fussion protein integrating an entire zwf gene into a structural gene of the E. coli lac operon. To do this, specific PCR primers which are homologous to the start and the end of the zwf gene were designed, keeping the gene in correct reading frame of lacZ' gene of pUC18. An entire Synechococcus sp. PCC7942 zwf gene as a 1.6 kb fragment was produced by means of PCR amplification. For further work, the 1.6 kb zwf fragment can be expressed ligating into the correct position of the lacZ' gene of pUC18. Additionally, the fragment can be ligated into a powerful expression vector, producing large scale Zwf polipeptide resulting the complementation to be achieved.
Benzer Tezler
- Fotoğrametrik ve fotoğrametrik olmayan ölçmelerin birarada dengelenmesi ile en uygun durumun araştırılması
Başlık çevirisi yok
ÜLKÜ ASLI TÜRKOĞLU
- Atom numarası 25<Z<101 olan elementler için L ve M tabakalarına ait ortalama floresans verimlerin hesaplanması
Başlık çevirisi yok
ELİF ÖZ
Yüksek Lisans
Türkçe
1996
Fizik ve Fizik MühendisliğiDumlupınar ÜniversitesiFizik Ana Bilim Dalı
PROF.DR. HASAN ERDOĞAN
- H&-robust optimal kontrol tekniğinin kullanılması ile T 700 turbo motorunun güç türbini hızının kontrolü
Power turbine speed control of the GE-T700 turbo engine using the H -robust optimal control technique
CÜNEYT YILMAZ
- Painleve analysis and lie symetries of some nonlinear partial differential equations
Başlık çevirisi yok
ABULGASİM ALİ MOHAMMAD
- Dalgacıklar ve elektrik mühendisliğindeki uygulamaları
Wavelets and application to electrical engineering
EMİNE AYAZ
Yüksek Lisans
Türkçe
1997
Elektrik ve Elektronik Mühendisliğiİstanbul Teknik ÜniversitesiElektrik Tesisleri Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ÖZER ÇİFTÇİOĞLU
