Geri Dön

Kan hücrelerinin izolasyonu ve transfeksiyonu

Isolation of blood cells and transfection

  1. Tez No: 137965
  2. Yazar: TÜLAY YANIK
  3. Danışmanlar: PROF.DR. FİKRİYE URAS, Y.DOÇ.DR. LALE BİLDİRİCİ
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2003
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Marmara Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 72

Özet

1. ÖZET İmmunoporasyon, farklı tip hücrelerin immünolojik özelliklerinden yararlanılarak yapılan yeni bir transfeksiyon metodudur. Antikor kaplı manyetik boncuklarla farklı tip hücrelerin, uygun transfeksiyon ortamında karışması sonucu, minimum hücre ölümü ve yüksek transfeksiyon etkinliği gözlenmiştir, İmmunoporasyonla şimdiye kadar sadece doku kültürü hücreleri transfekte edilmiştir. Bu çalışmanın amacı, İmmunoporasyon metoduyla kandaki mononükleer hücrelere DNA transferini sağlamaktır. Mononükleer hücreler, seyreltilmiş periferik kandan Nycoprep (1.077 g/ml) kullanılarak izole edildi ve fitohemagîutinin ile 24 saat aktive edildi. Aktive edilmiş mononükleer hücreler,“Anti-Class I”kaplı manyetik boncuklar ve plazmid DNA (pEGFP-Nl) ile oda sıcaklığında bir gece karıştırıldı. Sonra boncuğa bağlı olmayan hücreler bir manyetik separatörle ayrılarak %10 fetal sığır serumu içeren RPMI-1640 besi ortamı içinde 37 °C'de 48 saat inkübe edildi. Daha sonra hücreler PBS'le (fosfatla tamponlanmış şalin) yıkanarak poli-L-lizin kaplı kuyucuklu lamlara transfer edildi. Fluoresan mikroskop altında incelenen örneklerde yeşil fluoresansın varlığı gözlendi. Görülen fluoresans, DNA'nın mononükleer hücrelere girip ekspresyon yaptığının kanıtıdır. Sonuç olarak, bu çalışma İmmunoporasyon tekniğinin mononükleer hücrelere DNA transferi için kullanılabileceğini göstermektedir.

Özet (Çeviri)

2. SUMMARY ISOLATION OF BLOOD CELLS AND TRANSFECTION Immunoporation is a novel transfection method based on their immunological identity of different types of cells. Mixing different types of cells with antibody coated magnetic beads results high level of transfection with minimal cell death in the presence of a desired transfection agent. So far only tissue culture cells have been transfected by immunoporation. The purpose of this study is to transfect mononuclear cells (MNC) with DNA. MNCs were isolated from diluted human peripheral blood using Nycoprep (1.077 g/ml) density gradient media and then they were activated by phytohemagglutinin for 24 hrs. At room temperature the activated MNCs were mixed overnight with Anti-Class I coated magnetic beads in the presence of plasmid DNA (pEGFP-Nl). After the separation of bead-free cells from others by a magnetic separator, the bead-free cells were incubated in culture medium (RPMI-1640 containing 10% foetal bovine serum) for 48 hrs at 37 °C. The MNCs were washed with phosphate buffered saline (PBS), transferred to poly-L-lysine coated slides. Gene expression was detected using fluorescent microscopy. Observed fluorescence is an evidence of entrance of DNA into the cells. In conclusion in this study the detection of the gene expression suggests that immunoporation technique may be used for transfection of peripheral blood cells.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    101418

    Tatlı patatesten asit fosfataz enziminin kısmi saflaştırması ve kinetik özelliklerinin incelenmesi

    The Purification and the study of the kinetic properties of acid phosphatase enzyme obtained from sweet potatoes

    ENGİN AYKANAT

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2001

    Kimya Mühendisliğiİstanbul Teknik Üniversitesi

    DOÇ.DR. YÜKSEL AVCIBAŞI GÜVENİLİR

  2. Tez No

    499185

    In vitro correction of hbb v6g mutation in lymphocyte cells of patients with sickle cell anemia using genome-editing crispr / cas9 technique

    Orak hücre anemisi hastalarının lenfosit hücrelerinde HBB V6G mutasyonunun in vitro olarak genom düzenleme crıspr / cas9 tekniği kullanılarak düzeltilmesi

    HASANAIN AKRAM ZAINALBDEN ZAINALBDEN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2018

    GenetikSelçuk Üniversitesi

    Tıbbi Genetik Ana Bilim Dalı

    DR. ÖĞR. ÜYESİ NADİR KOÇAK

  3. Tez No

    806655

    Isolation and characterization of primary human brain mural cells

    Primer insan beyni mural hücrelerinin izolasyonu ve karakterizasyonu

    GÖKÇE GÖKMENOĞLU

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2022

    Moleküler TıpKoç Üniversitesi

    Sağlık Bilimleri Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ATAY VURAL

  4. Tez No

    790832

    Mikrofluidik sistemlerde hematopoetik kök hücre izolasyonu ve karakterizasyonu

    Separation and characterization of hematopoietic stem cells by microfluidic systems

    NİLGÜN OKŞAK

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    Fizyolojiİstanbul Üniversitesi

    Fizyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. DÜRDANE SERAP KURUCA

  5. Tez No

    393033

    Investigation of molecular pathways and biomarkers in Multiple sclerosis clinical subtypes

    Multipl skleroz klinik alt tiplerinde moleküler yolakların ve biyobelirteçlerin araştırılması

    TİMUÇİN AVŞAR

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2015

    Biyolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. EDA TAHİR TURANLI

Geri Dön