Anoxybacillus gonensis'ten ısılkararlı bir alfa-amilazın karakterizasyonu
Characterization of a thermostable alpha-amylase from Anoxybacillus gonensis
- Tez No: 139110
- Danışmanlar: DOÇ. DR. SAADETTİN GÜNER
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Kimya, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: ısılkararlı, a-amilaz, nişasta, termofil, Anoxybacillus gonensis V, thermostable, a-amylase, starch, thermophile, Anoxybacillus gonensis VI
- Yıl: 2003
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Karadeniz Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 54
Özet
ÖZET Türkiye'deki çeşitli kaplıcalardan daha önce izole edilmiş olan yedi termofilik bakterinin nişasta hidrolizleme yetenekleri kalitatif olarak tarandı ve Anoxybacillus gonenis (A4 ve A7), Saccharococcus caldoxylolyticus TK4 ve Anoxybacillus puschinoensis A8 suşlarının potansiyel a-amilaz üreticisi olduğu belirlendi. Bu termofi İlerin 50-60 °C aralığında optimum büyüme sıcaklıklarına sahip olduğu ve bu sıcaklıklarda oldukça yüksek amilaz aktivitesi gösterdiği gözlendi. Anoxybacillus gonenis A4 susundan hazırlanan ham enzim özütündeki a-amilazm optimum pH ve sıcaklık değerlerinin sırasıyla 7,5 ve 50 °C olarak bulundu. Çok geniş pH değerlerinde 24 saat saklandığında bile enzim aktivitesinin %60'ın üzerinde korunduğu gözlendi. Bu enzimin ticari olarak bulunan patates, mısır ve buğday nişastasının hidrolizinde oldukça etkili olduğu bulundu. Nişasta substratı varlığında elde edilen kinetik veriler, basit Michaelis- Menten eşitliğine oldukça uygun olup, bu susta mevcut a-amilaz için gözlenen Vm^ ve Km değerleri sırasıyla 0.42 mg mL“1 dak”1 mg"1 protein ve 1,4 mg/mL olarak belirlendi, a- Amilaz aktivitesinin çeşitli mono-, di- ve trivalent metal iyonlarına karşı davranışı farklılıklar gösterdi. Na+, Mg+2, Ni+2 ve Fe+2 a-amilaz aktivitesi için birer aktifleyici olarak rol oynamaktadır. Cu+2, Ca+2 ve Cd+2 ise oldukça güçlü inhibisyon gösterdi. Ayrıca, enzimi 10 mM üre daha etkinleştirirken EDTA aktiviteyi inhibe etti ki bu sonuç enzim için bazı metallerin varlığının gerekliliğini ortaya koymaktadır. Metabisülfitin enzim aktivitesini tamamen düşürmesi enzim aktif bölgesinde veya diğer bazı bölgelerde bulunan disülfür köprülerinin amilazın nişastanın hidrolizini katalizlemesinde oldukça kritik bir rol oynadığını göstermektedir.
Özet (Çeviri)
SUMMARY Characterization of a thermostable a-amylase from Anoxybacillus gonensis Potentials of previously isolated seven termophilic bacteria for the hydrolysis of starch were screened qualitatively on starch-agar plates and four of them, Anoxybacillus gonenis A4 and A7, Saccharococcus caldoxylolyticus TK4 and Anoxybacillus puschinoensis A8 were found to be a-amylase producers. The optimum temperatures of the thermophiles ranged from 50 to 60 °C and they have shown appreciable a-amylase activities at these temperatures. a-Amylase activities of crude extracts prepared from extracellular supernatants of Anoxybacillus gonenis A4 liquid culture media exhibited pH- and temperature-optima at 7.5 and 50 °C, respectively. The enzyme retains 60% of its original activity when kept at a wide range of pH values for 24 hours. The substrate specificity of the enzyme was very high for commercially available starches from potato, maize and wheat. The kinetic data obtained in the presence of starch were consistent with a simple Michaelis-Menten equation and the kinetic parameters, Vmaks ve Km, extracted from Lineweaver-Burk plots were 0.42 mg mL“1 min”1 mg"1 protein and 1.4 mg/mL, respectively. a-Amylase behaved very differently against various mono-, di- and trivalent metal ions. Na+, Mg+2, Ni+2 and Fe+2 are activators for the a-amylase whereas Cu+2, Ca+2 and Cd+2 were strongly inhibitory. While urea activated the enzyme EDTA inhibited the activity indicating the requirement of some metal ions for the activity. Moreover, the inhibition of amylase activities by metabisulfite may result from a critical role of some disulfide bridges either at the active site or other sites responsible for the catalysis of starch hydrolysis.
Benzer Tezler
- Yeni bir termofilik bakterinin, Anoxybacillus gonensis, polihidroksibutirat parçalama yeteneğinin incelenmesi
Investigation of polyhydroxybutyrate degradation capabilities of a novel bacterium, Anoxybacillus gonensis
DENİZ ŞİŞİK
Yüksek Lisans
Türkçe
2003
KimyaKaradeniz Teknik ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. SADETTİN GÜNER
- Anoxybacıllus gonensis 05s15'ten izole edilen yeni, küçük ve halkasal bir plazmitin (pAnox1) karakterizasyonu
Characterization of a novel small and circular plasmid (pAnox1)isolated from Anoxybacillus gonensis 05s15
GAMZE ÇUBUKCI
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
BiyolojiKaradeniz Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. HALİL İBRAHİM GÜLER
- Anoxybacillus gonensis Z4 suşundan ekstraselüler ?-amilaz enziminin saflaştırılması ve karakterizasyonu
Purification and characterization of extracellular ?-amylase from anoxybacillus gonensis Z4 strain
NİMET BALTAŞ
Doktora
Türkçe
2012
BiyokimyaKaradeniz Teknik ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SEVGİ KOLAYLI
YRD. DOÇ. DR. BARBAROS DİNÇER
- Bazı termofolik bakterilerdeki katalaz aktivitesinin incelenmesi
Investigation of catalase activities from some thermophilic bacteria
BARBAROS DİNÇER
- Anoxybacillus gonensis G2t glukoz izomerazının ısıl kararlılığının K111R-L313I-V101R-A353G/F/W VE T428E/S bölge spesifik mutasyonları ile geliştirilmesi
Improvement thermal stability of glucose isomerase from Anoxybacillus gonensis g2t by site directed mutagenesis K111R-L313I-V101R-A353G/F/W and T428E/S
SEYHAN RAKICI
Yüksek Lisans
Türkçe
2019
BiyokimyaRecep Tayyip Erdoğan ÜniversitesiSu Ürünleri Ana Bilim Dalı
DR. ÖĞR. ÜYESİ HAKAN KARAOĞLU