Geri Dön

Sitokrom P4501A ve glutatyon S-transferaz'ların mavri kefal balığından(Liza saliens) karakterizasyonu ve değişik dokularda immünolojik tanımlanması

Characterization of cytochrome P4501A and glutathione S-transferases from feral leaping mullet (Liza saliens) and immunological definition in defferent tissues

  1. Tez No: 154543
  2. Yazar: ASLI KIRIKBAKAN
  3. Danışmanlar: DOÇ.DR. ALAATTİN ŞEN
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Sitokrom P4501A1, glutatyon S-transferaz'lar, Liza saliens, CDNB, etoksirezorufin, karakterizasyon, Cytochrome P4501A1, glutathione S-transferases, Liza saliens, CDNB, ethoxyresorufin, characterization
  7. Yıl: 2004
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Pamukkale Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 161

Özet

ÖZET Faz I enzimlerinden sitokrom P4501A1 ve Faz II enzimlerinden glutatyon S- transferaz'lar (GST'ler) ilaçlar ve diğer vücuda alınan ekzojen ksenobiyotiklerin detoksifikasyonunda ve dışarı atılmalarında önemli rol oynamaktadırlar. Bu çalışmada, İzmir Körfezi ve çevresinden toplanan doğal kefal balığı {Liza saliens) dokularından mikrozomal ve sitozolik fraksiyonlar elde edildi. Liza saliens karaciğer dokusunda CYP1A1 ve GST'lerin karakterizasyonları, 7-etoksirezorufin ve l-kloro-2,4- dinitrobenzen (CDNB) ve etakrinik asit (EA) substratlan kullanılarak gerçekleştirildi. Liza saliens karaciğer mikrozomlarında EROD için ortalama aktivite 1 139,424 ± 174,75 pmol Rez./dak/mg protein (n=27) olarak bulunmuştur. EROD aktivitesi 100 jıg protein miktarına ve 120 saniye reaksiyon zamanına kadar lineerlik göstermiştir. Optimum pH ve sıcaklık sırasıyla 7,80 ve 35 °C olarak bulunmuştur. Enzim aktivitesinin 1,5 uM 7- ER konsantrasyonu üzerinde satüre olduğu gözlenmiştir. Lineweaver-Burk grafiği kullanılarak yapılan saptamalarda Vmax ve Km değerleri sırasıyla 1250 pmol/dak/mg protein ve 30,25 \ıM olarak hesaplanmıştır. EROD aktivitesi üzerine metallerin ve deterjanların etkisi incelenmiş ve ağır metaller ile deterjanların enzim aktivitesini önemli derecede inhibe ettiği bulunmuştur. Bunlar arasında Hg, Ni, Cd, Cu, Zn ve Sb gibi metaller ve sodyum dodesil sülfat, kolik asit ve deoksikolik asit gibi deterjanlar daha fazla inhibisyona neden olmuştur. Liza saliens sitozollerinde sırasıyla CDNB ve E A için ortalama aktivite 1163,27 ± 265,56 nmol/dak/mg protein (n=27) ve 158,16 + 13,17 nmol/dak/mg protein (n=27) olarak bulunmuştur. GST-CDNB ve GST-EA aktiviteleri 50 jıg protein miktarına kadar lineerlik göstermiştir. GST-CDNB aktivitesi ilk 5 dakika lineerite gösterirken, GST-EA aktivitesi ilk 3 dakika boyunca doğrusallık gösterdi. GST-CDNB aktivitesi için pH 7,50 ve pH 1 1,00 olarak iki farklı optimum pH gözlenirken, GST-EA aktivitesi için pH 7,80 ile 9,00 arasında düzlemsel bir optimum aralık bulundu. Optimum sıcaklık GST-CDNB aktivitesi için 37 °C olarak tayin edilirken, GST-EA aktivitesi için 42 °C olarakVI bulunmuştur. Enzim aktivitelerinin 2 mM CDNB ve 0,1 mM EA konsantrasyonları üzerinde satüre olduğu gözlenmiştir. Lineweaver-Burk grafiği kullanılarak yapılan saptamalarda Vmax ve Km değerleri sırasıyla CDNB ve EA için 1661 nmol/dak/mg protein ve 0,24 mM ve 156 nmol/dak/mg protein ve 0,056 mM olarak hesaplanmıştır. GST-CDNB ve GST-EA aktiviteleri üzerine metallerin ve deterjanların etkisi incelenmiş ve divalent ağır metaller ile deterjanların enzim aktivitesini önemli derecede inhibe ettiği bulunmuştur. Bunlar arasında en fazla inhibisyona Hg, Cd, Sb, Cu ve Zn gibi metaller neden olmuştur. GST-CDNB aktivitesinde en fazla inhibisyona kolik asit, sodyum dodesil sülfat, triton X-100 ve deoksikolik asit gibi deterjanlar neden olurken, GST-EA aktivitesinde en fazla inhibisyona deoksikolik asit, sodyum dodesil sülfat, kolik asit, triton X-100 gibi deterjanlar neden olmuştur. Ayrıca, Liza saliens CYP1A1 ve GST enzimlerinin çevre kirliliği için biyomarkör olarak önemi araştırılmıştır.

Özet (Çeviri)

VII ABSTRACT Cytochrome P450 and glutathione S-transferases (GSTs) are phase I and II enzymes respectively and play important role in detoxication and excretion of drugs and other exogenous compounds. In this study, microsomal and cytosolic fractions were obtained from the tissues of feral fish leaping mullet (Liza saliens) collected in Izmir Bay. Liza saliens liver CYP1A1 and GSTs were characterized using 7-ethoxyresorufin and 1- chloro-2,4-dinitrobenzene and ethacrynic acid as substrates. Average EROD activity of liver toward 7-ER was found 1 139,424 ± 174,75 pmol Res./min/mg protein (n=27). Liza saliens liver EROD activity was found to be linear up to 100 \ig protein amount and 2 minutes reaction time. In addition, optimum pH and temperature were determined as 7,80 and 35 °C, respectively. Enzyme activity was found to be saturated above 1,5 uM 7-ER concentration. Apparent V,^ and Km values for EROD using Lineweaver-Burk graph were calculated and found to be 1250 pmol Res./min/mg protein ve 30,25 uM. The effects of metals and detergents on Liza saliens liver EROD activity were studied and found that heavy metals and ionic detergents inhibited the enzyme activities significantly. Among them such as Hg, Ni, Cd, Cu, Zn and Sb and detergents such as sodium dodecyl sulfate, cholic acid and deoxycholic acid caused higher degree of inhibition. Average liver GST activities of Liza saliens toward CDNB and EA were found 1163,27 ± 265,56 nmol/min/mg protein (n=27) and 158,16 ± 13,17 nmol/min/mg protein (n=27). Liza saliens liver GST-CDNB and GST-EA activities were found to be linear up to 100 \ig protein amount. While GST-CDNB activity was displayed linearity at first 5 minutes, GST-EA activity was displayed linearity at first 3 minutes. While two pH optima (pH 7,50 and 11,00) were observed for GST-CDNB activity, GST activity towards EA showed a plateau between pH 7,80-9,00. GST-CDNB showed optimum temperature at 37 °C. On the other hand, GST activity with EA showed a wider temperature activity curve with optimum temperature at 42 °C. Enzyme activities wereVIII found to be saturated above 2 mM CDNB and 0,1 mM EA concentrations. Apparent Vmax and Km values for CDNB and EA using Lineweaver-Burk graph were calculated and found to be 1661 nmol/min/mg protein and 0,24 mM and 156 nmol/min/mg protein and 0,056 mM, respectively. The effects of metals and detergents on Liza saliens liver GST-CDNB and GST-EA activities were studied and found that heavy metals and ionic detergents inhibited the enzyme activities significantly. Among them the highest degrees of inhibitions were detected with metals such as Hg, Cd, Sb, Cu and Zn and with detergents such as cholic acid, sodium dodecyl sulfate, triton X-100 and deoxycholic acid. Furthermore, the importance of CYP1A1 and GST enzymes of Liza saliens as biomarkers of environmental pollution was investigated.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    269532

    Mechanism of inhibition of cytochrome P4501A1 associated 7-ethoxyresorufin O-deethylase (EROD) activity and glutathione S-transferase (GST) activities in fish liver by phenolic compounds/flavonoids

    Fenolik bileşiklerin/flavonoidlerin balık karaciğerindeki sitokrom P4501A1?e bağlı 7-etoksiresorufin O-deetilaz (EROD) ve glutatyon S-transferaz (GST) aktiviteleri üzerindeki inhibisyon mekanizması

    DUYGU YILMAZ

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2010

    BiyokimyaOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. EMEL ARINÇ

    PROF. DR. MERAL YÜCEL

  2. Tez No

    425908

    Effect of antioxidant morin on xenobiotic metabolizing enzymes in the liver of 7,12-dimethylbenz[a]anthracene and endosulfan treated healthy and streptozotocin-induced diabetic rats

    Antioksidan morinin 7,12-dimetilbenz[a]antrasen ve endosülfana maruz bırakılmış sağlıklı ve streptozotosin indüklenmiş diyabetik sıçanların karaciğerinde ksenobiyotik metabolize eden enzimler üzerine etkileri

    CANAN SAPMAZ

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2015

    BiyokimyaAbant İzzet Baysal Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. AZRA BOZCAARMUTLU

  3. Tez No

    153666

    Biochemical monitoring of toxic and carcinogenic organic pollutants the İzmir Bay after the great canal project and possible health effects

    Toksik ve karsinojenik organik kirliliğin büyük kanal projesi'nden sonra İzmir Körfezi boyunca biyokimyasal olarak izlenmesi ve sağlığa olabilecek etkileri

    TUĞBA BOYUNEĞMEZ

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2004

    BiyokimyaOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. EMEL ARINÇ

  4. Tez No

    68363

    Purification and characterization of cytochrome P4501A1 and cytochrome P450 reductase from feral leaping mullet (Liza salines) liver microsoms

    Sitokrom P4501A1 ve P450 redüktazın doğal kefal balığı karaciğerinden saflaştırılması ve karakterizasyonu

    ALAATTİN ŞEN

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    1997

    BiyokimyaOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. EMEL ARINÇ

  5. Tez No

    75835

    Field evaluation of cytochome P450 1A1 MRNA levels as a monitor for chemical

    Sitokrom P450 1A1 MRNA seviyesinin kimyasal kirliliğin monitoründe joker olarak kullanılması

    ERKAN SU

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    1998

    BiyokimyaOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. EMEL ARINÇ

Geri Dön