Memeli hücre kültüründe ATP uygulaması ile oluşan kuantal kalsiyum salınımında SERCA'nın rolü
The investigation of the role of SERCA in ATP-induced Quantal calcium release in mammalian culture cells
- Tez No: 156681
- Danışmanlar: DOÇ. DR. MEHMET UĞUR
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyofizik, Biophysics
- Anahtar Kelimeler: Kuantal kalsiyum salınımı. İP, SERCA. PMCA, Quantal calcium release, SERCA, PMCA
- Yıl: 2004
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ankara Üniversitesi
- Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyofizik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Memeli Hücre Kültüründe ATP Uygulaması ile Oluşan Kuantal Kalsiyum Salınımında SERCA'nın Rolünün Araştırılması Dinlenim durumunda sitoplazmadaki Ca2' konsantrasyonunu (|Ca“'],). hücre membranımda ve endoplasmik retikulumda (ER) bulunan Ca2+ pompaları düşük seviyelerde tutar. Ancak, agonist uyarımı ile açılan inositol 1,4,5-trilbsfat (IPî) kapılı Ca2”kanallarından sitoplazmaya salınan Ca“”kendi salınımını indükler (Calcium-induced calcium release) ve sitoplazmadaki [Ca2t]'nun birkaç misli artmasına neden olur. Bu artış, agonist uyarımı devam ederken dahi bir müddet sonra durur ve sitoplazmadaki Ca' konsantrasyonu dinlenim durumuna yakın bir değere döner.“Kuantal”ya da '“kademeli”kalsiyum salınımı olarak adlandırılan bu olguyu açıklamak için çeşitli hipotezler öne sürülmüştür. Bu çalışmamızın amacı agonist uyarımı sonucunda oluşan“kuantal”ya da“kademeli”kalsiyum salınımının oluşmasında ve Ca2*'un sitoplazmadan uzaklaştırılmasında Ca ATPazların rolünü incelemektir. LTK-8 ve RAT 1 kültür hücreleri, Fura-2 asetoksimetil ester (fura-2 AM) ile yüklenip [Ca2*]ı,'nu bir mikrospektroflorimetre ve bir CCD1 kamera ile ölçüldü. Deneyler sırasında agonist (ATP ve Fenilefrin) uyarıları ile oluşan Ca“”yanıtları F340/38O sinyal oranı olarak bilgisayara aktarıldı. LTK-8 hücrelerinde. ATP uyarısı ile kuantal kalsiyum salınımı gerçekleştirdiğini gördük Bu hücrelerde, submaksimal doz agonist yanıtının ardından verilen SERCA blokörü CPA, ani ve geçici bir Ca“ yanıtı oluşturdu. CPA ve La'* kullanılarak SERCA ve PMCA ayrı ayrı bloke edildiği zaman hem RAT-1 hem de LTK-8 hücrelerinde Ca ~ yanıtlarındaki azalmanın hızına belirgin bir etki gözlemedik. Ancak iki blokörün birlikte verilmesi belirgin bir etki yaratabildi. Yaptığımız gözlemler hem SERCA'nın hem de PMCA'nın Ca+ salınınım dereceli özellik göstermesinde rolleri olduğunu ve dereceli şahmında Ca çıkışının azalmasında daha çok bunun rolü olduğunu ve bu iki Ca~+ pompasının ortaklaşa bir ilişki içinde çalıştıklarını düşündürmektedir. Elde ettiğimiz bir önemli bulgu da La un IP3 kenetli Ca4”yanıtlarını bloke etmesidir. Bu beklenmedik etkinin nedenlerinin araştırılması için daha kapsamlı çalışmalara ihtiyaç vardır.
Özet (Çeviri)
The Investigation of the Role of SERCA in ATP-Induced Quantal Calcium Release In Mammalian Culture Cells In the steady state conditions, leakage and plasma membrane and endoplasmic reticulum Ca ' pumps hold cytoplasmic Ca~' concentration at low levels. However, after the agonist stimulation, released Ca2+ via IPrgated Ca24 release channels induce its own release which causes a few fold increase in the cytoplasmic [Ca *]. Despite the continuation of agonist stimulation, this increase stops after a while and cytoplasmic calcium concentration returns to its basal levels. To explain this phenomenon, which is called as“Quantal”or“Graded Calcium Release”, some hypothesis have been proposed. The purpose of this study is to investigate the role of of Ca“+ ATPases in the quantal calcium release seen after agonist stimulation and also in the Ca2 ' removal from the cytoplasm. LTK-8 and RATI culture cells were loaded with Fura-2 acetoxymethyl ester (fura-2 AM) and Ca2+ responses to the agonist stimulation (ATP and phenylephrine) were measured by a microfluorimetric system and a CCDI camera and transferred to the computer programme as F340/380 signal ratio. LTK-8 cells, showed quantal calcium release. We have observed a sudden but transient release due to SERCA blockage by CPA when applied after the submaximal dose ATP (10~6 M) response. Blokage of PMCA by La or SERCA by CPA itself did not effect the decrease rate of cytoplasmic [Ca2+]. Only simultaneous application of both blockers had an effect on this decrase rate. Our results indicate that SERCA and PMCA may have a prominent role in quantal calcium release and that these two Ca”+ pumps may be functioning in close cooperation with each other. Another interesting finding in this study is the unexpected inhibitory effect of La3+ on agonist induced Ca" responses. Further experiments are needed to clarify the mechanism of this effect.
Benzer Tezler
- Targeting circulating breast cancer stem cells via mTOR and WNT inhibitors after bone metastasis
Sirküle meme kanseri kök hücrelerinin kemik metastazı sonrası mTOR ve WNT inhibitörleri ile hedeflenmesi̇
ÖZLEM ALTUNDAĞ ERDOĞAN
Doktora
İngilizce
2025
BiyokimyaHacettepe ÜniversitesiKök Hücre Ana Bilim Dalı
PROF. DR. BETÜL ÇELEBİ SALTIK
- Rapamisin uygulamasının fare spermatogenik hücrelere etkisi
The effect of rapamycin administration on mouse spermatogenic cells
PINAR ŞAHİN
Yüksek Lisans
Türkçe
2012
Histoloji ve EmbriyolojiAkdeniz ÜniversitesiHistoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ÇİLER ÇELİK ÖZENCİ
- Fibroblast büyüme faktörü 3 (FGF3) geninde tanımlanan L6P ve S156P mutasyonlarının etkilerinin ın vıtro analizi
In vitro analysis of the effects of L6P and S156P mutations in the fibroblast growth factor 3 (FGF3) gene
MURAT BAŞARAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2010
BiyoteknolojiAnkara ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. ARZU ATALAY
- Farmasötik kullanım amaçlı memeli hücre proseslerinde doğal ürün kullanım potansiyelinin araştırılması
Investigation of potential natural products use in mammalian cell processes for pharmaceutical application
ELİFSU POLATLI
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
BiyomühendislikEge ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AYŞE NALBANTSOY
- Metforminin nöronal hücre kültüründe proliferasyon ve apoptosis üzerine etkisi
Proliferative and apoptotic effect of metformin on neuronal culture
ALİ UCBEK
Yüksek Lisans
Türkçe
2012
BiyoteknolojiAbant İzzet Baysal ÜniversitesiFarmakoloji Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. ÖZGE UZUN