Van Gölü balığının (Chalcalburnus tarichi P. 1811) karaciğerinden ve eritrositlerinden glukoz-6-fosfat dehidrogenaz enziminin (E.C. 1.1.1.49) afinite kromatografisi ile saflaştırılması ve karakterizasyonu
The purification and characterization of glucose-6-phosphate dehidrogenase (E.C. 1.1.1.49) enzyme with affinity chromatography from Van Lake fish (Chalcalburnus tarichi P. 1811)
- Tez No: 168587
- Danışmanlar: Y.DOÇ.DR. VEDAT TÜRKOĞLU
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Kimya, Chemistry
- Anahtar Kelimeler: İnci kefeli (Chalcalburnus tarichi P.1811), Saflaştırma, Glukoz-6-Fosfat Dehidrogenaz, Afînite kromatografisi, Grey Mullet {Chalcalburnus tarichi P.1811), Purification, Glucose-6- phosphate Dehydrogenase, Affinity Chromatography
- Yıl: 2005
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Yüzüncü Yıl Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 58
Özet
ÖZET VAN GÖLÜ BALIĞI'NIN (Chalcalbumus tarichi P.1811) KARACİĞERİNDEN VE ERİTROSİTLERİNDEN GLUKOZ-6-FOSFAT DEHİDROGENAZ ENZİMİNİN (E.C. 1.1.1.49) AFİNİTE KROMATOGRAFİSİ İLE SAFLAŞTIRILMASI VE KARAKTERİZASYONU ALTON, Muhammed Yüksek Lisans Tezi, Kimya Anabilim Dalı Tez Danışmanı: Yrd. Doç. Dr. Vedat TÜRKOĞLU Ocak 2005, 59 sayfa Bu çalışmada, İnci Kefeli karaciğer ve eritrositlerinden Glukoz-6-fosfat Dehidrogenaz enzimi afînite kromatografîsi ile saflaştırılmış ve karakterizasyonu yapılmıştır. Bu yüzden önce deney için alınan balık kanı, antikoagulantlı tüplere konuldu. Saflaştırma için kullanılacak karaciğer ve kan numuneleri, gerekli işlemler yapılarak kolona uygulanacak homojenat ve hemolizat haline getirildi. Kolona uygulanacak homojenatm ve hemolizatın pH'sı dengeleme tamponunun pH'sı olan pH=6'ya NaH2P04 (Sodyum Fosfet) ile ayarlandı. Homojenat ve hemolizat 2',5'-ADP Sepharose 4B afînite kolonuna uygulandı. Aktivite gösteren fraksiyonların kantitatif protein tayinleri 595 nm'de tayin edildi. Aynı zamanda enzimin optimum sıcaklık, optimum pH ve iyonik şiddet etkisi araştırıldı. En son olarak SDS-PAGE elektroforezi ile enzim saflığı kontrol edildi. Yapılan çalışma sonucunda enzimin saflaştırma oram ve molekül ağırlığı sırasıyla karaciğerde 26.156 kat, 131.900 da ve eritrositte 2543 kat ve 131.650 da olarak bulundu. Erızimin optimum pH'sı karaciğer G6PD için 8, eritrosit G6PD için 8,5, optimum sıcaklığı hem karaciğer G6PD için hem de eritrosit G6PD için 40 °C olarak bulundu. İyonik şiddet etkisinin araştırıldığı bir başka çalışmada ise en yüksek aktivite karaciğer G6PD için 0.10 M, eritrosit G6PD için ise 0,05 M (NH4)2S04 konsantrasyonunda görülmüştür. Optimum pH ve sıcaklık değeri bir çok çalışma ile paralellik göstermektedir. Enzimin saflık derecesi SDS-PAGE elektroforezi ile kontrol edilmiş ve tek bant görülerek saflığı ispatlanmıştır.
Özet (Çeviri)
ABSTRACT THE PURIFICATION AM) CHARACTERIZATION OF GLUC0SE-6-PH0SPHATE DEHIDROGENASE (E.C. 1.1.1.49) ENZYME WITH AFFINITY CHROMATOGRAPHY FROM VAN LAKE FISH (Chalcalburnus tarichi P.1811) ALTUN, Muhammed Msc Thesis, Chemistry Department Supervisor: Asst. Prof. Dr. Vedat TÜRKO?LU January 2005, 59 pages In this study, the purification and characterization of glucose-6-phosphate dehidrogenase enzyme with affinity chromatography from Grey Mullet {Chalcalburnus tarichi P.1811) liver and erythrocyte have been examined. In addition, the analyse of some properties of this enzyme which is extremely important for metabolism is existing. So, the fish-blood sample taken for the experiment was put into the anticoagulant tubes. After made necessary prosses, the fish liver and erythrocyte which are going to be used for purification was turned into homogenate and hemolyzat that will be applied to the column. The pH of homogenate and hemolyzat which is going to be the pH=6 which is the pH of balancing buffer, by NaH2P04 (Sodium phosphate). The homogenate and the hemolyzat were applied to 2',5'-ADP Sepharose 4B affinity column. The rations of quallative protein of fractions which showed activity were examined in 595 nm. In the same time, the optimum tempature, optimum pH and ionic strenght reaction of the enzyme were searched. At last, pure enzyme was checked by SDS-PAGE electrophoresis. In the result of the study proportion of enzyme purification and molecul weight has found in liver 26.156 fold, 131.900 da and in erythrocyte 2543 fold, 131.650 da respectively. The optimum pH of the enzyme in liver is 8 and in erythrocyte is 8,5, optimum temparature is 40 °C The highest activity was seen in concentration of 0.10 M (NH^O^ for liver G6PD and 0,05 M for erythrocyte G6PD in another study in which the ionic strenght was searched. The value of the optimum pH and optimum temparature were accurate in many studies. The enzyme purification degree checked by SDS-PAGE electrophoresis study and it was seen a single band on jel that demonstrated the pure enzyme.
Benzer Tezler
- Van gölü balığından (Chalcalburnus tarichi, p-1811) glutatyon redüktaz enziminin saflaştırılması, karakterizasyonu ve bazı ilaç ve kimyasal maddelerin etkilerinin araştırılması
Purification and characterization of glutathione reductase from Van Lake fish (Chalcalburnus tarichi, p-1811) and investigation of effects of some drugs and chemicals on this enzyme
MUHAMMED ALTUN
- Van gölü balığının (Chalcalburnus tarichii P.1811) beyin ve karaciğerinden asetilkolinesteraz (E.C.3.1.1.7) enziminin afinite kromatografisi yöntemi ile saflaştırılması ve karakterizasyonu
The characterization of purification of acethylcholinesterase (E.C.3.1.1.7) enzyme from the brain and liver of lake Van fish
ESRİN AKMAN
- Değişik yöntemlerle Van Gölü inci kefali balığının kurutulması üzerine bir araştırma
Başlık çevirisi yok
OSMAN KILINÇÇEKER
Yüksek Lisans
Türkçe
1999
Gıda MühendisliğiYüzüncü Yıl ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ERSURAL SUNER
- Van Gölü'nde yaşayan İnci kefali (Chalcalburnus tarichi, pallas, 1811) balığı'ndaki vitamin E miktarlarının yüksek performanslı sıvı kromataografisi (HPLC) ile tayini
Determination of vitamin E in the Van Lake fish, İnci kefali (Chalcalburnus tarichi, pallas, 1811) by high performance liquid chromatography
ARZU AKYÜZ
- Van Gölü'nde yaşayan inci kefali (Chalcalburnus tarichi pallas 1811,) balığı'nın çeşitli dokularının kimyasal bileşimi
Başlık çevirisi yok
FEHMİ ODABAŞOĞLU
Yüksek Lisans
Türkçe
1993
BiyolojiYüzüncü Yıl ÜniversitesiBiyoloji Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. EŞREF YEĞİN