Alfa-fetoprotein'e karşı monoklonal antikor üretimi ve tanı kitinin geliştirilmesi
Producing monoclonal antibody against alpha-fetoprotein and developing of the test kit
- Tez No: 171033
- Danışmanlar: DOÇ.DR. AYNUR BAŞALP, PROF.DR. YAVUZ SEZEN
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoloji, Biology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2005
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Gebze Yüksek Teknoloji Enstitüsü
- Enstitü: Mühendislik ve Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyoloji Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 126
Özet
ÖZET Onkofetal bir antijen olan alfa-fetoprotein hepatoselüler karsinomanın (karaciğer kanseri) teşhisi için kullanılmaktadır. Serum AFP seviyesinin yükselmesi, hepatoselüler karsinomanın yanısıra bazı pankreatik ve gastrointestinal kanserler, tyrosinoma gibi çeşitli üreme hücresi tümörleri, akut ve kronik hepatit ve siroz ile ilgili olabilmektedir. Bu yüzden, AFP'nin klinik açıdan hastalığın teşhisi, seyri ve tedaviye verilen yanıtın izlenmesinde faydalı bir markır olduğunu göstermektedir. Günümüzde hastalarda AFP seviyesinin belirlenmesi için birçok farklı yöntem kullanılmaktadır. Bunlardan birisi immünolojik yollarla ELISA yöntemi kullanılarak AFP miktarının belirlenmesidir. Bu çalışmada AFP 'ye karşı bir monoklonal antikor üretimi gerçekleştirilmiştir. Bunun için BALB/c fareler AFP antijeni ile immunize edilmiştir. Belirli zaman aralıklarında serumdaki antikor seviyeleri tespit edilerek en yüksek aktiviteyi veren fare füzyona alınmıştır. Füzyon sonrası spesifik antikor üreten hibrit hücreler ELISA ile tespit edildikten sonra pozitif reaksiyon veren klonlara alt klonlama işlemi uygulanmıştır. Elde edilen monoklonal antikorun monospesifik olup olmadığını belirlemek için yedi farklı protein kullanılarak çapraz aktivite testleri yapılmıştır. Böylece yüksek özgünlükte AFP'ye karşı monoklonal antikor üreten hibrit hücreler (5F5, 7E1 1, 1 1E7, 1 1F7) elde edilmiştir. Bu hücrelerin alt tipleri belirlendikten sonra AFP test kiti oluşturmak için in vitro kültür ortamında geniş ölçekte üretimleri yapılmıştır. 11E7 monoklonal antikoru protein G afınite kromotografisi ile saflaştırılarak peroksidaz enzimi ile konjugasyonu gerçekleştirilmiştir. 7E11 monoklonal antikoru ise diyaliz yöntemi ile saflaştırıldıktan sonra tutuklayıcı antikor olarak kullanılmıştır. Gerekli olan optimizasyon işlemleri gerçekleştirilerek elde edilen test kiti ile düşük ve yüksek seviyede AFP içeren çeşitli serum örnekleri taranmıştır.
Özet (Çeviri)
SUMMARY Alpha-fetoprotein (AFP), an oncofetal antigen, has been used for diagnosis of hepatocellular carcinoma (HCC). An elevated level of AFP in plasma strongly suggests the presence of either primary liver cancer, several germ cell cancer (tyrosinoma etc.), some pancreatic and gastrointestinal tract carcinoma or nonmalignant conditions such as cirrhosis and hepatitis. Therefore, AFP is a very useful marker clinically for disease diagnosis, screening the disease development, and the response for the treatment. Today, many different procedures have been used to determine AFP levels in patients. One of these is the determination of AFP levels by using ELISA in immunological methods. In this study, production of monoclonal antibody against AFP was achived. For this purpose, BALB/c mice were immunized with AFP antigen. At intervals, the antibody activity of the mice sera was detected and the mouse giving the best results was used for the fusion. Following the fusion, hybrid cells producing spesific antibodies were determined by ELISA. Then, subcloning steps were applied to clones giving positive reaction by limiting dilution. The cross-reaction assays were performed by using seven different proteins to detect whether the monoclonal antibody was spesific or not. Thus, hybrid cells (5F5, 7E1I, 11E7, 11F7) producing monoclonal antibodies against AFP were obtained in high spesificity. After the determination of subtypes of these monoclonal antibodies, they were produced in vitro in large quantities for preparing AFP test kits. After 11E7 monoclonal antibody was purified by protein G affinity chromatography, it was conjugated with horseradish peroxidase enzyme. 7E11, which was purified by means of the dialysis method, was used as capture antibody. The test kit obtained as a result of the optimising process was used to screen sera for both low and high AFP levels.
Benzer Tezler
- Rh uyuşmazlığı olan yenidoğan kordon kanında alfa-fetoprotein değerleri ile hemolitik komponent arasındaki ilişki
Başlık çevirisi yok
OYA ÇETİNKAYA
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
1989
Çocuk Sağlığı ve Hastalıklarıİstanbul ÜniversitesiÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
- Hepatosellüler karsinoma teşhisinde des-gamma carboxyprothrombin'in rolü
The Role of des gamma carboxyprothrombin in the diagnosis of hepatocellular carcinoma
YAŞAR NAZLIGÜL
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2004
GastroenterolojiAnkara Üniversitesiİç Hastalıkları Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ALİ ÖZDEN
- Ataksi-telenjiektazi tanılı hastaların klinik, laboratuvar ve prognoz özelliklerinin incelenmesi
Examination of clinical, laboratory and prognosis features of patients diagnosed with ataxia-telangiectasia
CEREN GÜLERYÜZ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2022
Allerji ve İmmünolojiSağlık BakanlığıÇocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. CANER AYTEKİN
- Development of biosensor surfaces for liver cancer detection
Karaciğer kanseri tespitine yönelik biyosensör yüzeylerinin geliştirilmesi
MUHAMMET GYLYJOV
Yüksek Lisans
İngilizce
2024
BiyomühendislikYıldız Teknik ÜniversitesiBiyomühendislik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. CEM BÜLENT ÜSTÜNDAĞ
DR. ÖZGÜR YILMAZ
- Testlerin sigma düzeylerinin hesaplanması ve iç kalite kontrol sıklıklarının buna göre düzenlenmesi
Calculation of sigma levels of tests and regulation of internal quality control frequencies accordingly
BURAK GÜRBÜZ
Tıpta Uzmanlık
Türkçe
2024
BiyokimyaKırıkkale ÜniversitesiTıbbi Biyokimya Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MURAT KAÇMAZ