Döllenmiş zebra balığı (Danio rerio Hamilton-Buchanan, 1822) yumurtalarına gen (GFP) transferi üzerinde bir araştırma
A study on the gene (GFP) transfer in fertilized zebrafish (Danio rerio Hamilton-Buchanan, 1822) eggs
- Tez No: 178182
- Danışmanlar: PROF. DR. METİN TİMUR, DOÇ. DR. HAYDAR BAĞIŞ
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Genetik, Su Ürünleri, Genetics, Aquatic Products
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2007
- Dil: Türkçe
- Üniversite: İstanbul Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Su Ürünleri Yetiştiriciliği Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Yetiştiricilik Bilim Dalı
- Sayfa Sayısı: 147
Özet
Bu çalısma TÜBTAK MAM-Gen Mühendisligi ve Biyoteknoloji Enstitüsü (GMBE), Transgen ve Deney Hayvanları Laboratuvarında gerçeklestirilmistir. Sunulan çalısmada transgenik balık eldesi teknolojisinin ülkemizde yerlestirilmesi amaçlanmıs ve gen transferi çalısmamızda güçlendirilmis yesil floresan protein (EGFP) geni markır (isaretleyici) gen olarak kullanılmıstır. Transgenik balık eldesi için, cyto megalo virus (CMV) promotörlü EGFP gen konstraktının halkasal plazmit (pEGFP-N1) ve lineer formları (CMV-EGFP) (transgen konstraktı), döllenmis zebra balıgı yumurtalarına mikroenjeksiyon teknigi ile aktarılmıstır. Mikroenjeksiyonda EGFP gen konstraktı bir hücre safhasındaki zebra balıgı embriyolarının sitoplazmaları içine 2,5?4,5?35-40-65 ng /?l konsantrasyonlarında lineer formu ve 65 ve 100 ng/?l konsantrasyonunda ise halkasal formu aktarılmıstır. Gen aktarımı yapılmıs larvaların 3'üncü gününde gen ekspresyonu floresans mikroskopta gözlemlenmis ve larvalar yesil olarak tespit edilmistir. Ayrıca moleküler yöntemler ile floresans olan ve olmayan transgenik adayı balıklar gen entegrasyonu ve ekpresyonu bakımından incelenmistir. Lineer EGFP geninin mikroenjeksiyonu sonucunda 54 adet ve halkasal formunun mikroenjeksiyonundan 25 adet F0 balık elde edilmistir. Halkasal formunun 65 ng/?l konsantrasyonundaki aktarımından elde edilen F0 transgenik zebra larvalarındaki gen ekspresyonu seviyesinin aynı konsantrasyonda verilen lineerize formdan elde edilen transgenik larvalara göre gen ekspresyonun daha fazla oldugu gözlemlenmistir. Halkasal EGFP geninin ekspresyonunun larvaların vücudunun çesitli kısımlarında (yumurta kesesi, bas, sırt bölgesi ve gözlerde) yaygın bir dagılım gösterdigi gözlemlenmistir. Lineer EGFP geninin ekspresyonu da larvaların sırt bölgesinde, yumurta sarısında ve gözlerde oldugu gözlemlenmistir. Lineer formun mikroenjeksiyonundan sonra elde edilen 6 adet F0 transgenik balıgın normal balık ile çiftlestirilmesinden toplam 520 adet F1 larva elde edilmistir. Bu F1 larvaların 102 tanesinde floresan ısıma görülmüstür (%20). 19 numaralı F0 disi balıktan elde edilen erkek ve disi transgenik bireyler kendi aralarında çiftlestirilmis ve F2 larvaların %20'sinde floresan ısıma gözlemlenmistir. Çalısmamızda stabil transgenik balık hatlarının elde edilmesinde, lineer gen konstraktının gen ekspresyonu üzerinde etkili oldugu; ancak, sadece F0 transgenik balık eldesinde ise halkasal gen konstraktı formunun kullanılmasının etkili oldugu ortaya konmustur. Bu tez sonucunda ülkemizde ilk defa transgenik balık eldesi teknolojisi kurulmus ve kurulan bu teknoloji kullanılarak transgenik zebra balıgı elde edilmistir. Çalısmadan elde edilen sonuçlar gelecekte yapılacak transgenik zebra balıgı ve/veya diger balık türlerinin eldesi çalısmalarına olanak saglayacak, ayrıca arastırılması istenen genlerin fonksiyonları bu sistemlerde in vivo olarak arastırılabilecektir.
Özet (Çeviri)
This study was carried out at the TUBITAK-MAM Gene Engineering and Biotechnology Institute, Transgene and Experimental Animals Laboratory. The aim of this study is to set up transgenic fish produce technology in Turkey. In this study enhancer green flourescent protein (EGFP) gene used as a marker gene. To produce transgenic fish circular plasmid (pEGFP-N1) and linear forms of EGFP gene construct, which was containing cyto megalo virus (CMV) promoter has been transferred in to fertilized eggs of zebrafish by microinjection technique. In microinjection, the EGFP gene constructs, 2,5-4,5-35-40-65 ng/?l consantration of linear form and 65-100 ng/?l consantration of circular form, were transferred into cytoplasm of zebrafish embryos at single-cell stage. At the third days of gene transferred larvae, gene expression was observed at the flourescent microscope and green larvae were detected. Also, flourescence and non-flourescence transgenic candidate larvae were investigated according to gene integration and expression with the same molecular methods. We obtained 54 F0 zebrafish after linear EGFP gene microinjection and 25 F0 zebrafish after circular form microinjection. We observed that the gene expression efficiency of circular form in 65 ng/?l consantration was higher than at the same consantration of the linearized form in F0 zebrafish larvae. The expression of the circular EGFP gene construct was observed ubiquites distributed at different parts of body (yolk sack, head, dorsal muscle of the belly and eyes) in transgenic zebrafish larvae. The expression of the linearized EGFP gene was observed at the dorsal area, yolk sack and eyes. After the microinjection of linear form we obtained 6 F0 transgenic fish, after the mating of F0 transgenic fish with wild-type fish. We obtained 520 F1 larvae. It is shown flourescent light at 102 larvae (20%). The mating of 19 number F0 female fish with wild-type fish, male and female F1 transgenic fish obtained. These F1 transgenic fish was mating each other to produce F2 transgenic fish which flourescent light observed at 20%. In our study, to produce stable transgenic fish lines, using linear gene constructs were effective on gene expression. However, it is brought up to produce only F0 transgenic fish used circular gene construct was effective. In the conclusion, to produce transgenic fish technology was established at the first time in Turkey and transgenic zebrafish was obtained by using this technology. The result of the study will give an opportunity to produce transgenic zebrafish or other fish. However, investigation of gene functions will be study in vivo in transgenic fish systems.
Benzer Tezler
- Effects of using emulsifier as feed additive on growth and reproductive performance of zebrafish (Danio rerio Hamilton, 1822)
Yem katkı maddesi olarak emülgatör kullanımının zebra balığı'nın (Danio rerio Hamilton, 1822) büyüme ve üreme performansı üzerine etkisi
MOHMMED ABDALFTAH HASSAN AHMED
Doktora
İngilizce
2022
Su Ürünleriİstanbul ÜniversitesiSu Ürünleri Yetiştiriciliği ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. AYGÜL EKİCİ
- Kontrollü laboratuvar koşullarında zebra balığı (Danio rerio, HAMİLTON 1822) yapay üretimi ve cinsiyet oranı
Artificial zebrafish (Danio rerio, HAMİLTON 1822) breeding and sex ratio under controlled laboratory condition
KEMAL DEDE
Yüksek Lisans
Türkçe
2020
Su Ürünleriİskenderun Teknik ÜniversitesiSu Ürünleri Ana Bilim Dalı
PROF. DR. ŞEHRİBAN ÇEK YALNIZ
- Propil paraben'in zebra balığı (Danio rerio)'nın dopaminerjik nöronları üzerine etkileri
The effects of propylparaben on the dopaminergic neurons of zebrafish (Danio rerio)
KAZI TANZINA RAHMAN
Yüksek Lisans
Türkçe
2021
Endokrinoloji ve Metabolizma HastalıklarıEge ÜniversitesiBiyoteknoloji Ana Bilim Dalı
PROF. DR. NALAN KABAY
PROF. DR. MİTSUYO KISHIDA
- Analysis of movement disorder-related genes following the knockdowns of ANO10, WDR81, and VLDLR in zebrafish( danio rerio )
Zebrabalığında hareket bozukluguyla ilişkilendirilen ANO10, WDR81 ve VLDLR genlerinin susturulduğu modelde incelenmesi
GÖKSEMİN FATMA ŞENGÜL
Yüksek Lisans
İngilizce
2018
Biyolojiİhsan Doğramacı Bilkent ÜniversitesiSinir Bilimi Ana Bilim Dalı
PROF. MICHELLE MARIE ADAMS
- 4-T-bütilbenzoik asidin zebra balığı sinir sistemi gelişimi üzerine etkisinin incelenmesi
Investigation of the effect of 4-T-butyl benzoic acid on zebrafish nervous system development
TARIK DİNÇ