Böceklere dayanıklı transgenik korunga (Onobrychis sativa Lam.) bitkilerinin elde edilmesi
Production of insect-resistant transgenic sainfoin (Onobrychis sativa Lam.) plants
- Tez No: 179688
- Danışmanlar: PROF. CENGİZ SANCAK
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyoteknoloji, Ziraat, Biotechnology, Agriculture
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2008
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Ankara Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Tarla Bitkileri Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 97
Özet
Bu araştırmada, çok yıllık önemli bir yem bitkisi olan korungada (Onobrychis sativa Lam.) adventif sürgün rejenerasyonu, Agrobacterium tumefaciens ile gen aktarımı ve böceklere dayanıklı transgenik bitkilerin elde edilmesine yönelik çalışmalar yürütülmüştür.Adventif sürgün rejenerasyonun optimizasyonu ile ilgili çalışmalarda eksplant olarak yaprakçık, yaprak sapı, hipokotil ve kotiledon kullanılmıştır. En yüksek sürgün rejenerasyonu, 4 mg/l 6-benzilaminopurin (BAP) ve 0.5 mg/l ??naftalenasetik asit (NAA) içeren MS (Murashige and Skoog,1962) besin ortamında yaprakçık eksplantından elde edilmiştir.Korungaya gen aktarımını optimize etmek için hipokotil, kotiledon, yaprakçık ve yaprak sapı eksplantları, in vitro'da gelişen bitkiciklerden izole edilerek, neomisin fosfotransferaz (NPT-II) ve ß-glukuronidaz (GUS) genlerini taşıyan GV2260 p35S GUS-INT Agrobacterium tumefaciens hattı ile inoküle edilmiştir. 1:50 oranında seyreltilmiş A. tumefaciens hattı ile yarım saat inoküle edilen yaprak eksplantlarından, 48 saatlik ko-kültüvasyon süresinde transgenik adayı GUS pozitif bitkicikler elde edilmiştir. Hem inokülasyon hem ko-kültüvasyon ortamına 100 ?M asetosringon eklenmiştir. GUS pozitif bitkiler dış koşullara alıştırılmış ve bu bitkilerde NPT-II ve GUS genlerinin varlığı Polimeraz Zincir Reaksiyonu (PCR) ile doğrulanmıştır. Transgenik bitkilerden elde edilen tohumlar çimlendirilerek transgenik T1 bitkilerinin seleksiyonu yapılmıştır.Bitkilerde böceklere dayanıklılığı kodlayan cry genleri (cry1Ac, cry1Ab, cry2A, cry1C ve cry1Ba/cry1Ia hibrit geni SN19) taşıyan A. tumefaciens hatları ile yapılan gen aktarım çalışmaları sonucunda ise kanamisin antibiyotiğine dayanıklı sürgünler elde edilmiştir. Bu sürgünler MS besin ortamında köklendirilerek iklim dolabına alınmıştır. İki ay sonra, farklı cry genlerini taşıyan toplam 37 adet böceklere dayanıklı olduğu beklenen transgenik korunga bitkisi NPT-II genine yönelik PCR çalışması ile belirlenmiştir.
Özet (Çeviri)
In this thesis, the studies related to adventitious shoot regeneration, gene transformation via Agrobacterium tumefaciens and obtaining insect resistant transgenic plants in sainfoin, which is an important perennial forage legumes, have been carried out.In adventitious shoot regeneration studies leaflets, petioles, hypocotyls and cotyledons were used as explants. The highest adventitious shoot regeneration was obtained from leaflet explants on MS medium containing 4 mg/l 6-benzylaminopurine (BAP) and 0.5 mg/l ??naphthaleneacetic acid (NAA).For optimization of methods, in vitro grown hypocotyl, cotyledon, leaflet and petiole explants were inoculated with Agrobacterium tumefaciens strain GV2260 (p35SGUS-INT) harbouring neomycin phosphotransferase (NPT-II) and ß-glucuronidase (GUS) gene. GUS positive plantlets were obtained from the leaf explants which were inoculated with 1:50 dilution of A. tumefaciens for 30 min and 48 h co-cultivation period. 100 ?M acetosyringone was added both inoculation and co-cultivation medium. The GUS positive plantlets were successfully acclimatized and existence of NPT-II and GUS genes for these plants were confirmed by Polymerase Chain Reaction (PCR). Transgenic T1 plants were selected by germinating the seeds.Furthermore, kanamycin resistant shoots were obtained as the result of the transformation studies via A. tumefaciens strains harbouring cry (cry1Ac, cry1Ab, cry2A, cry1C and cry1Ba/cry1Ia hybrid SN19) genes which encode insect resistance. These shoots were rooted and transferred to growth cabinet. After 2 months, total 37 transgenic sainfoin plants which are expected to be resistant against insects were confirmed using NPT-II primers by PCR analysis.
Benzer Tezler
- Tohum böceklerine (Bruchidae:Coleoptera) dayanıklı transgenik fasulye (Phaseolus vulgaris L.) bitkilerinin elde edilmesine yönelik araştırmalar
Researches on development of transgenic common beans (Phaseolus vulgaris L.) resistant to seed insects (Bruchidae:Coleoptera)
SEVİL SAĞLAM
Doktora
Türkçe
2009
BiyoteknolojiAnkara ÜniversitesiTarla Bitkileri Ana Bilim Dalı
PROF. DR. CEMALETTİN Y. ÇİFTÇİ
- Yaralanmayla aktif olan AoPR1 promotörünün kontrolü altındaki CRY genlerinin protein üretimlerinin patateste sınırlandırılması
Restriction of CRY gene protein production under the control of wound-induced AoPR1 promoter in potato
HÜSEYİN ABDULLAH AHMED AHMED
Doktora
Türkçe
2014
BiyoteknolojiAnkara ÜniversitesiTarla Bitkileri Ana Bilim Dalı
PROF. DR. SEBAHATTİN ÖZCAN
- Farklı pamuk çeşitlerinde ın vıtro sürgün rejenerasyonu ve Agrobacterium tumefaciens aracılığıyla gen aktarımı
In vitro shoot regeneration and Agrobacterium tumefaciens-mediated gen transfer in different cotton cultivars
EMİNE ANAYOL
- cry1Ac ve cry2A genlerine sahip böceğe dayanıklı tütün hatlarının geliştirilmesi
Development of insect resistant tobacco lines expressing cry1Ac and cry2A genes
TOLGA DİNÇ
Yüksek Lisans
Türkçe
2016
BiyolojiNiğde Ömer Halisdemir ÜniversitesiTarımsal Genetik Mühendisliği Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. ALLAH BAKHSH
- Development of potato lines resistant to colorado potato beetle ( CPB ) using RNAi-based transformation approach
RNAi yaklaşimi kullanilarak patates böceğine ( CPB ) dayanikli patates hatlarinin geliştirilmesi
TAHIRA HUSSAIN
Doktora
İngilizce
2018
BiyoteknolojiNiğde Ömer Halisdemir ÜniversitesiTarımsal Genetik Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MEHMET EMİN ÇALIŞKAN