Geri Dön

Fruktoz 1,6 bis fosfat aldolaz enziminin normal ve diyabetli plasentalardan saflaştırılarak enzim aktivitesi ve kinetiklerinin karşılaştırılması

Purification and comparision of kinetic properties of fructose 1,6 bisphosphate aldolase from healty and gestational diabetic human placenta

PDF İndir

  1. Tez No: 194441
  2. Yazar: NEŞE HAYAT AKSOY
  3. Danışmanlar: PROF. DR. PAKİZE DOĞAN
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyokimya, Biochemistry
  6. Anahtar Kelimeler: Aldolaz, GDM, plasenta, saflaştırma, substrat ve inhibitörkinetiği.H.Ü.B.A.B. Tez destekleme (05.T06.101.001), Aldolase, GDM, placenta, purification, substrate and inhibitor kinetics.H.U.B.A.B. PhD Thesis Grant (05.T06.101.001)
  7. Yıl: 2005
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyokimya Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 81

Özet

ÖZETAksoy N. H., Fruktoz 1,6 bis fosfat aldolaz enziminin normal ve diyabetliplasentalardan saflaştırılarak enzim aktivitesi ve kinetiklerininkarşılaştırılması. Hacettepe Üniversitesi Sağlık Bilimleri Enstitüsü BiyokimyaProgramı, Doktora Tezi, Ankara, 2005. Fruktoz 1,6-bisfosfat Aldolaz, (E.C.4.1.2.13), (FBPA), fosfoselüloz kolondan sağlıklı insan plasentasından 40.5 kez,diyabetik insan dokusundan 63 kez saflaştırıldı. Poliakrilamid jel elektroforezi(PAGE) ile saflık kontrolü yapıldı. Saflaştırılan enzimlerin optimum pH'ları 7,4 ve0optimum sıcaklık değerleri 37 C olarak saptandı. Enzimin Lineweaver-Burkgrafiklemesinde doğrunun belli bir substrat derişiminden sonra aşağıya doğrukıvrıldığı gözlendi. Bu kıvrılmanın olduğu noktadan ayrılan fazlar için iki ayrıgrafikleme daha yapıldı. Sağlıklı plasentadan saflaştırılan enzimin; Düşük substratderişiminde Km değeri 3,048±1,39 mM ve Vm ise 636,103±196,165 olarak bulundu.Yüksek derişimlerde ise Vm değeri 1885,457±292,48 ve Km değeri 23,063 ± 6,845mM olarak hesaplandı. GDM'li plasentadan saflaştırılan enzimin Vm'i939,548±60,869 ve Km'i 24,304±2,948 olarak hesaplandı. Gestasyonel diyabetikplasental aldolazın yüksek derişimlerinde Vm değeri 981,093 ± 38,483, Km değeri26,686±1,913 mM olarak; düşük derişimde ise Km 1,385±0,403 mM ve Vm ise159,422±26,180 mM olarak bulundu. Enzimatik çalışmanın ikinci aşamasında,DHAP, ATP ve Mg+2'un inhibisyon etkileri araştırıldı. Buna göre; Sağlıklı plasentalaldolaz için; DHAP'ın (Ki=1,039±0,107) non-kompetitif inhibitör, ATP'nin ?partialkompetitif? inhibitör (Ki= 0,074 ± 0,026 ve alfa katsayısı 3,287±0,434), Mg+2'un?pure-kompetitif? inhibitör (Ki=14,678±2,702) olduğu bulundu. Gestasyoneldiyabetik plasental aldolaz için; DHAP kompetitif inhibitör (Ki= 0,766 ± 0,035),ATP'nin ?partial kompetitif? inhibitör (Ki= 0,136 ± 0,049, alfa katsayısı4,089±0,539), Mg+2'un ?partial kompetitif? inhibitör (Ki=0,218±0,113 ve alfakatsayısı 1,676±0,118) olduğu saptandı.

Özet (Çeviri)

ABSTRACTAksoy N. H., Purification and Comparision of Kinetic Properties of Fructose 1,6bisphosphate aldolase from Healty and Gestational Diabetic Human Placenta.Hacettepe University Institute of Health Sciences Ph.D. Thesis in Biochemistry,Ankara, 2005. Fructose 1,6 bisphosphate aldolase (E.C. 4.1.2.13, FBPA), waspurified 40,5 fold from healty human placenta and 63 fold from gestational diabeticplacenta, by phosphocelluse chromatography. Purity was controlled bypolyacrilamide gel electrophoresis (PAGE). Optimum pH value was determined as7,4 and optimum temperature was determined as 37 0C for both of purified enzymes.It was observed that, Lineweaver-Burk diagram line was appeared to be down. Anew diagram was performed for the phases that separate this point. At lowconcentrations of subtrate, value of Km of healty placental aldolase was determinedas 3,048±1,39 mM and value of Vm was determined as 636,103 ± 196,165. At highconcentrations of subtrate, Vm 1885,457 ± 292,48 and Km 23,063 ± 6,845 mM. Vmvalue of enzyme that purified from diabetic placenta was estimated as939,548±60,869 mM and Km value was determined as 24,304±2,948. At lowconcentrations, Km value of diabetic placental aldolase was determined as26,686±1,913 mM and value of Vm was determined as 981,093 ± 38,483. At highconcentrations of substrate, Vm was 159,422±26, and Km was 1,385±0,403. DHAP,ATP and Mg+2 were used as inhibitors of the enzyme at the second part of this study.As for this; for healty placental aldolase, DHAP was found (Ki=1,039±0,107) as anon-competitive inhibitor, ATP was found as a partial-competitive inhibitor (Ki=0,074±0,026 and alpha coefficient 3,287±0,434), Mg+2 was a pure-competitiveinhibitor (Ki=14,678±2,702). For diabetic placental aldolase, DHAP was found to bea competitive inhibitor, (Ki= 0,766±0,035), ATP was a partial-competitive inhibitor(Ki= 0,136±0,049, alpha coefficient 4,089±0,539), Mg+2 was a partial-competitiveinhibitor (Ki=0,218±0,113 and alpha coefficient 1,676±0,118).

Benzer Tezler

  1. Tez No

    146092

    Termofilik Anoxybacillus genensis G2 suşunun fruktoz-1,6-bisfosfat aldolaz geninin klonlanması, ekspresyonu ve karakterizasyonu

    Cloning, expression and characterization of the fructose-1,6-bisphosphate aldolase gene from thermophilic Anoxybacillus genensis G2 strain

    NAGİHAN SAĞLAM ERTUNGA

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2006

    KimyaKaradeniz Teknik Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ.DR. AHMET ÇOLAK

  2. Tez No

    432818

    Zeytin aldolaz ve ökaryotik translasyon başlatma faktörü 4e geninin moleküler karakterizasyonu

    Molecular characterization of olive aldolase and eukaryotic translation initiation factor 4e gene

    SÜMEYYE ALTUNOK

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2016

    BiyolojiBalıkesir Üniversitesi

    Biyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. EKREM DÜNDAR

  3. Tez No

    397801

    Q102R and Q203L double mutant effects on substrate specificty and activator requirement in bsLDH enzyme

    bsLDH enziminde Q102R ve Q203L çift mutantının substrat özgüllüğü ve aktivatör gereksinimine etkileri

    CEREN SAĞDIÇ

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2015

    Biyoteknolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. NEVİN GÜL-KARAGÜLER

  4. Tez No

    818876

    Role of 6-phosphofructo-2-kinase (pfkfb3) in the regulation of cellular proliferation

    6-fosfofrukto-2-kinaz/fruktoz-2,6-bisfosfataz (pfkfb3)'ın hücre proliferasyonundaki rolü

    ABDULLAH YALÇIN

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2008

    BiyokimyaUniversity of Louisville

    Biyokimya ve Moleküler Biyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. JASON CHESNEY

  5. Tez No

    535749

    Pankreas epitel hücrelerinin onkojenik transformasyonunda PFKFB2'nin rolü

    Role of PFKFB2 in the oncogenic transformation of pancreatic epithelial cells

    SELAHATTİN CAN ÖZCAN

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2018

    BiyokimyaBursa Uludağ Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ABDULLAH YALÇIN

Geri Dön