TİMP-2 ve GFP genlerini kodlayan plazmitin hazırlanması ve primer düz kas hücreleri hücre kültür ortamında polimerik vektörler kullanılarak transfeksiyonu
Preparation of plasmid encoding TİMP-2 and GFP and transfection of primary smooth muscle cell in cell culture using polymeric vectors
- Tez No: 216375
- Danışmanlar: PROF.DR. ERHAN BİŞKİN, PROF.DR. TÜLİN KUTSAL
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyomühendislik, Kimya Mühendisliği, Kardiyoloji, Bioengineering, Chemical Engineering, Cardiology
- Anahtar Kelimeler: Katyonik, eşboyutlu, stiren, polietilenglikol etil eter metakrilat, nanopartikül, poli(NİPA-ko-MAH), uyarı-cevap, DKH, restenoz, GFP, TİMP-2, Cationic, monosize, styrene, polyethyleneglycol ethyl ether methacrylate, nanoparticle, poly(NIPA-co-MAH), smart polymers, SMC, restenosis, GFP, TIMP- 2
- Yıl: 2007
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.
Özet
Anjiyoplasti ve stent operasyonları sonrası restenoz oluşumu her iki yöntem içinde engelleyici ana etkendir. Restenozun önlenmesi için birçok ilaç terapisi kullanılmaktadır, ancak genellikle yeterli olmamaktadır. Bu çalışmada amaç hasar gören primer düz kas hücrelerinin, TİMP-2 (21kDa protein, matriks metalloproteinaz 2 enziminin inhibitörü) kodlayan plazmitin, non-viral vektör kullanılarak transfekte edilmesi ve TİMP-2 proteinin erken ekspresyonunun sağlanmasıdır. İlk olarak, primer düz kas hücrelerinin transfeksiyonunda suda çözünen sıcaklığa duyarlı polikatyonik non-viral vektör poli(N-izopropilakrilamit-ko- 2-metakrilamidohistidin) kopolimeri (Poli(NİPA-ko-MAH)) kullanılmıştır. Tüm denemelere karşın bu polimerik taşıyıcılar ile yapılan çalışmalar çok başarılı olmayınca, araştırma grubumuzda başka bir tez kapsamında üretilen polikatyonik nanopartiküllerle çalışmaya devam edilmiştir. Polikatyonik eşit boyutlu nanopartiküler poli(stiren/poli(etilenglikol)etileter metakrilat/N-[3- (dimetilamino)propil] metakrilamid) {poli(St/PEG-EEM/DMAPM}, iki farklı boyda 78 nm ve 200 nm (kısa adları EEM 78 ve EEM 200) mikroemülsiyon polimerizasyon yöntemiyle üretilmiştir. EEM 78 ve EEM 200 nanopartiküllerin DKH'leri üzerindeki sitotoksitesi, sırasıyla % 4 ve % 15 olarak belirlenmiştir. Poli(NİPA-ko-MAH) kopolimeri için canlı hücre oranı % 90 civarında tespit edilmiştir. Daha sonra EEM 78/pEGFP-N2, EEM 200/pEGFP-N2 ve Poli(NİPA-ko-MAH)/pEGFP-N2 konjugatları hazırlanmıştır. Poli(NİPA-ko-MAH)'ın DKH içine alımı % 85 iken, Poli(NİPA-ko-MAH)/pEGFPN2' nin gen ekspresyon verimi kopolimerin düşük zeta-potansiyel yükünden dolayı azdır. EEM 78/ pEGFP-N2 ve EEM 200/pEGFP-N2 konjugatları ile yapılan transfeksiyon çalışmalarında sırasıyla % 68 ve % 64 oranında gen ekspresyonu tespit edilmiştir. Hazırlanan EEM 78/pBLAST TİMP-2 konjugatı transfeksiyon çalışmasında kullanılmıştır ve TİMP-2 protein ekspresyonu western blot yöntemi ile tespit edilmiştir. Transfekte edilen hücrelerin 64. saat lizatından elde edilen 21kDa büyüklüğündeki bant protein ekspresyonunun gerçekleştiğini göstermiştir.
Özet (Çeviri)
Restenosis after angioplasty or stenting remains the major limitation of both procedures. A vast array of drug therapies has been used to prevent restenosis, but they have proven to be predominantly unsuccessful. It was our hypothesis in this study; the plasmid encoding TIMP-2 (21 kDa protein known as metalloproteinase inhibitor 2) by using a nonviral vector (which is designed in our labouratory) transfer to SMCs immediately after injury that would result in increased levels of TIMP-2 and its earlier expression. Firstly, poly(Nisopropylacrylamide- co-2-methacrylamidohistidine) copolymer (Poly(NIPA-co- MAH)) as water-soluble thermo- sensitive polycationic non-viral vector for gene transfection of primary aortic smooth muscle cells. Then highly charged monosized poly(styrene/ poly(ethylene glycol) ethyl ether methacrylate)/ N-[3- (dimethylamino)propyl] methacrylamide/ [poly(St/PEG-EEM/DMAPM)] cationic nano- particles with different particle size and charges were synthesized by emulsifier-free emulsion polymerization. Experimental data for In-vitro cytotoxicity (primary SMCs) of nanoparticules EEM 78 and 200 showed cytotoxity around 4 % and 15 %. Cell viability for the Poly(NIPA-co-MAH) was around 90 %. Conjugates of EEM 78/ pEGFP-N2, EEM 200/pEGFP-N2 and Poly(NIPA-co-MAH)/pEGFP-N2 conjugates were prepared. Poly(NIPA-co-MAH) uptake efficiency in SMCs were around 85 %, but gene expression efficiency were low with Poly(NIPA-co-MAH)/pEGFP-N2 because of low zeta potential of copolymer. GFP expression efficiencies after SMC transfections by conjugates EEM 78/pEGFP-N2 and EEM 200/pEGFP-N2 were 68 % and 64 %, respectively. EEM 78/pBLAST TIMP-2 conjugate was prepared and used for transfection of SMCs. To investigate TIMP-2 protein expression we used western blot method. A clearly detectable 21 kDa band was noted in transfected cells collected 64 hours later.
Benzer Tezler
- Preeklamptik gebeliklerde plasenta ve kandan elde edilen mezenkimal kök hücrelerde transkriptom analizi
Transcriptome analysis on mesenchymal stem cells derived from placenta and blood in preeclamptic pregnancies
ZEYNEP KUMRAL
Yüksek Lisans
Türkçe
2021
Genetikİstanbul ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. TUBA GÜNEL
- Targeting circulating breast cancer stem cells via mTOR and WNT inhibitors after bone metastasis
Sirküle meme kanseri kök hücrelerinin kemik metastazı sonrası mTOR ve WNT inhibitörleri ile hedeflenmesi̇
ÖZLEM ALTUNDAĞ ERDOĞAN
Doktora
İngilizce
2025
BiyokimyaHacettepe ÜniversitesiKök Hücre Ana Bilim Dalı
PROF. DR. BETÜL ÇELEBİ SALTIK
- Türkiye trafik düzeninde kazaların azaltılması açısından yeni trafik kanunu uygulaması ile ilgili sorunlar ve çözüm yolları
Başlık çevirisi yok
ERDAL UÇAR
Yüksek Lisans
Türkçe
1986
UlaşımGazi ÜniversitesiKazaların Çevresel ve Teknik Araştırması Ana Bilim Dalı (disiplinlerarası)
PROF. DR. RIDVAN EGE
- Tekstil işletmelerinin çevre kirlenmelerine etkileri
Başlık çevirisi yok
REMZİ GEMCİ
Yüksek Lisans
Türkçe
1987
Tekstil ve Tekstil MühendisliğiUludağ ÜniversitesiTekstil Mühendisliği Ana Bilim Dalı
YRD. DOÇ. DR. MEHMET TASMACI
- Spor salonlarında tesis büyüklüğüne bağlı olarak program ilkelerinin araştırılması
Formulation of the programme of requiriments related to the capacity of space in sports centers
MERAL ERDOĞAN