Geri Dön

TİMP-2 ve GFP genlerini kodlayan plazmitin hazırlanması ve primer düz kas hücreleri hücre kültür ortamında polimerik vektörler kullanılarak transfeksiyonu

Preparation of plasmid encoding TİMP-2 and GFP and transfection of primary smooth muscle cell in cell culture using polymeric vectors

PDF İndir

  1. Tez No: 216375
  2. Yazar: NELİSA TÜRKOĞLU
  3. Danışmanlar: PROF.DR. ERHAN BİŞKİN, PROF.DR. TÜLİN KUTSAL
  4. Tez Türü: Doktora
  5. Konular: Biyomühendislik, Kardiyoloji, Kimya Mühendisliği, Bioengineering, Cardiology, Chemical Engineering
  6. Anahtar Kelimeler: Katyonik, eşboyutlu, stiren, polietilenglikol etil eter metakrilat, nanopartikül, poli(NİPA-ko-MAH), uyarı-cevap, DKH, restenoz, GFP, TİMP-2, Cationic, monosize, styrene, polyethyleneglycol ethyl ether methacrylate, nanoparticle, poly(NIPA-co-MAH), smart polymers, SMC, restenosis, GFP, TIMP- 2
  7. Yıl: 2007
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Hacettepe Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyomühendislik Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 154

Özet

Anjiyoplasti ve stent operasyonları sonrası restenoz oluşumu her iki yöntem içinde engelleyici ana etkendir. Restenozun önlenmesi için birçok ilaç terapisi kullanılmaktadır, ancak genellikle yeterli olmamaktadır. Bu çalışmada amaç hasar gören primer düz kas hücrelerinin, TİMP-2 (21kDa protein, matriks metalloproteinaz 2 enziminin inhibitörü) kodlayan plazmitin, non-viral vektör kullanılarak transfekte edilmesi ve TİMP-2 proteinin erken ekspresyonunun sağlanmasıdır. İlk olarak, primer düz kas hücrelerinin transfeksiyonunda suda çözünen sıcaklığa duyarlı polikatyonik non-viral vektör poli(N-izopropilakrilamit-ko- 2-metakrilamidohistidin) kopolimeri (Poli(NİPA-ko-MAH)) kullanılmıştır. Tüm denemelere karşın bu polimerik taşıyıcılar ile yapılan çalışmalar çok başarılı olmayınca, araştırma grubumuzda başka bir tez kapsamında üretilen polikatyonik nanopartiküllerle çalışmaya devam edilmiştir. Polikatyonik eşit boyutlu nanopartiküler poli(stiren/poli(etilenglikol)etileter metakrilat/N-[3- (dimetilamino)propil] metakrilamid) {poli(St/PEG-EEM/DMAPM}, iki farklı boyda 78 nm ve 200 nm (kısa adları EEM 78 ve EEM 200) mikroemülsiyon polimerizasyon yöntemiyle üretilmiştir. EEM 78 ve EEM 200 nanopartiküllerin DKH'leri üzerindeki sitotoksitesi, sırasıyla % 4 ve % 15 olarak belirlenmiştir. Poli(NİPA-ko-MAH) kopolimeri için canlı hücre oranı % 90 civarında tespit edilmiştir. Daha sonra EEM 78/pEGFP-N2, EEM 200/pEGFP-N2 ve Poli(NİPA-ko-MAH)/pEGFP-N2 konjugatları hazırlanmıştır. Poli(NİPA-ko-MAH)'ın DKH içine alımı % 85 iken, Poli(NİPA-ko-MAH)/pEGFPN2' nin gen ekspresyon verimi kopolimerin düşük zeta-potansiyel yükünden dolayı azdır. EEM 78/ pEGFP-N2 ve EEM 200/pEGFP-N2 konjugatları ile yapılan transfeksiyon çalışmalarında sırasıyla % 68 ve % 64 oranında gen ekspresyonu tespit edilmiştir. Hazırlanan EEM 78/pBLAST TİMP-2 konjugatı transfeksiyon çalışmasında kullanılmıştır ve TİMP-2 protein ekspresyonu western blot yöntemi ile tespit edilmiştir. Transfekte edilen hücrelerin 64. saat lizatından elde edilen 21kDa büyüklüğündeki bant protein ekspresyonunun gerçekleştiğini göstermiştir.

Özet (Çeviri)

Restenosis after angioplasty or stenting remains the major limitation of both procedures. A vast array of drug therapies has been used to prevent restenosis, but they have proven to be predominantly unsuccessful. It was our hypothesis in this study; the plasmid encoding TIMP-2 (21 kDa protein known as metalloproteinase inhibitor 2) by using a nonviral vector (which is designed in our labouratory) transfer to SMCs immediately after injury that would result in increased levels of TIMP-2 and its earlier expression. Firstly, poly(Nisopropylacrylamide- co-2-methacrylamidohistidine) copolymer (Poly(NIPA-co- MAH)) as water-soluble thermo- sensitive polycationic non-viral vector for gene transfection of primary aortic smooth muscle cells. Then highly charged monosized poly(styrene/ poly(ethylene glycol) ethyl ether methacrylate)/ N-[3- (dimethylamino)propyl] methacrylamide/ [poly(St/PEG-EEM/DMAPM)] cationic nano- particles with different particle size and charges were synthesized by emulsifier-free emulsion polymerization. Experimental data for In-vitro cytotoxicity (primary SMCs) of nanoparticules EEM 78 and 200 showed cytotoxity around 4 % and 15 %. Cell viability for the Poly(NIPA-co-MAH) was around 90 %. Conjugates of EEM 78/ pEGFP-N2, EEM 200/pEGFP-N2 and Poly(NIPA-co-MAH)/pEGFP-N2 conjugates were prepared. Poly(NIPA-co-MAH) uptake efficiency in SMCs were around 85 %, but gene expression efficiency were low with Poly(NIPA-co-MAH)/pEGFP-N2 because of low zeta potential of copolymer. GFP expression efficiencies after SMC transfections by conjugates EEM 78/pEGFP-N2 and EEM 200/pEGFP-N2 were 68 % and 64 %, respectively. EEM 78/pBLAST TIMP-2 conjugate was prepared and used for transfection of SMCs. To investigate TIMP-2 protein expression we used western blot method. A clearly detectable 21 kDa band was noted in transfected cells collected 64 hours later.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    841941

    İyotlu kontrast madde verilen hastalarda TIMP-2 ve IGFBP--7 düzeylerinin değerlendirilmesi

    Evaluation of TIMP-2 and IGFBP-7 levels in patients given iodinated contrast material

    TAHA BURAK URVASIZOĞLU

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    NefrolojiAtatürk Üniversitesi

    İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. ERDEM ÇANKAYA

  2. Tez No

    336405

    Tip 2 diabet hastalarında dolaşımdaki matriks metalloproteinazları (MMP-2, MMP-9), doku matriks metalloproteinaz inhibitörleri(TIMP-1, TIMP-2), reaktif karbonil bileşikleri ve ileri glikasyon son ürünlerinin düzeyleri

    Circulating levels of matrix metalloproteinases (MMP-2, MMP-9), tissue inhibitors of metalloproteinases (TIMP-1, TIMP-2), reactive carbonyl compounds and advanced glycation end products in Type 2 diabetic patients

    HAYRİYE ÇİÇEKÇİ ERMAN

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2011

    Biyokimyaİstanbul Üniversitesi

    Biyokimya Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. REMİSA GELİŞGEN

  3. Tez No

    861450

    İdrar doku inhibitör metalloproteinaz-2 (TIMP -2) ve insülin benzeri büyüme faktörü bağlayıcı protein-7 (IGFBP-7) diyabetik nefropati için erken belirteç olabilir mi?

    Could urinary tissue inhibitor of metalloproteinases-2 (TIMP-2) and insulin-like growth factor binding protein-7 (IGFBP-7) be early markers for diabetic nephropathy?

    MUHAMMET FURKAN TOPALOĞLU

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    NefrolojiAtatürk Üniversitesi

    İç Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ERDEM ÇANKAYA

  4. Tez No

    335948

    Prostatik adenokarsinom olgularında MMP-1, MMP-9 ve TIMP-2 ekspresyonlarının prognostik faktörler ve sağkalım ile ilişkisi

    Relation of MMP-1, MMP-9 and TIMP-2 expressions with prognostic factors and survival in prostatic adenocarcinoma cases

    FERHAT ÖZDEN

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2012

    Patolojiİstanbul Üniversitesi

    Patoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. HİLAL AKI

  5. Tez No

    260653

    Preeklamptik ve eklamptik gebelerde matriks Metalloproteinaz?2(mmp-2), matriks Metalloproteinaz?9(mmp?9) ve doku matriks Metalloproteinaz inhibitorü?1(tımp-1), doku matriks Metalloproteinaz inhibitorü?2(tımp?2) düzeylerinin araştırılması

    To research the levels of tissue metalloproteinase inhibitor-1, tissue metalloproteinase inhibitor-2 (TIMP-1, TIMP-2) and matrix metalloproteinase-2, matrix metalloproteinase-9 (MMP-2, MMP-9) in eclamptyc and preeclamptyc pregnants.

    ERDAL ÖZMEN

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2010

    Kadın Hastalıkları ve DoğumYüzüncü Yıl Üniversitesi

    Kadın Hastalıkları ve Doğum Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. HANIM GÜLER ŞAHİN

Geri Dön