Geri Dön

Gen tedavisi amacıyla DNA yüklü katı lipid nanopartikül formülasyonlarının hazırlanması

Preparation of DNA loaded solid lipid nanoparticle formulations for gene therapy

PDF İndir

  1. Tez No: 289196
  2. Yazar: HASAN AKBABA
  3. Danışmanlar: DOÇ. DR. GÜLTEN KANTARCI, YRD. DOÇ. DR. DEVRİM DEMİR DORA
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Eczacılık ve Farmakoloji, Genetik, Pharmacy and Pharmacology, Genetics
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2010
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Ege Üniversitesi
  10. Enstitü: Sağlık Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Farmasötik Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 166

Özet

Çıplak DNA, nükleazlar tarafından sindirilme ve hepatik alım klirensi nedeniyle intravenöz uygulamadan sonra sirkülasyondan hızla elimine olur. Bundan dolayı, optimize DNA taşıyıcı sistemlerin geliştirilmesi, başarılı ve konvansiyonel klinik kullanım için önemlidir. Gen taşıma sistemleri viral ve viral olmayan vektörleri içermektedir. Viral vektörler, en etkin olanlardır ancak immünojenite ve onkojenite nedeniyle uygulamaları kısıtlıdır. Viral olmayan vektörler, bununla birlikte, daha güvenli, maliyetleri düşük ve daha tekrarlanabilirdir. Viral olmayan sistemlerin esas kısıtlayıcı faktörü düşük transfeksiyon etkinliğidir. Viral olmayan transfeksiyon sistemleri genelde katyonik peptidler, katyonik polimerler, katyonik lipidler veya bunların kombinasyonundan oluşur.Katyonik lipidler, pozitif yüklü lipidlerin fizyolojik pH'da negatif yüklü DNA ile doğrudan karıştırılmasıyla DNA-lipid komplekslerin oluşturulması için kullanılabilirler. Ancak bunların in vivo kullanımı toksisiteleri nedeniyle kısıtlıdır. Bununla birlikte, gen terapisi amacıyla ilaç geliştirmek için, in vivo transfeksiyonda kullanışlı, daha etkilili ve güvenli sistemlerin geliştirilmesi gerekmektedir. KLN'ler genelde fizyolojik olarak iyi tolere edilebilen bileşenlerden oluşur, büyük ölçekte kolayca üretilebilirler, dondurarak-kurutma gibi iyi saklama kapasiteleri vardır, sterilize edilebilirler ve intravenöz olarak enjekte edildiklerinde düşük sitotoksisite gösterirler. Bunlara ek olarak, KLN'lerin avantajı partikül yükünün, içeriği ile modüle edilebilmesi ve bunun zıt yüklü moleküllerin elektrostatik etkileşimlerle bağlanmasına imkan vermesidir. KLNler, partiküllerin mikrovasküler sisteme geçebilecek ve makrofaj alımını engelleyecek kadar küçük olduğu, bu nedenle sistemik taşıma için uygun olarak, nano-ölçekte (10-300 nm) üretilebilirler.Bu avantajlarına rağmen henüz KLN'ler gen terapisinde lipozomlar kadar yaygın olarak çalışılmamıştır. Bu nedenle, bu tezde, gen terapisi için yeni bir KLN formülasyon geliştirerek, DNA ile kompleks oluşturulmuş ve KLN-DNA komplekslerinin bileşiminin transfeksiyon kapasitesine etkisini değerlendirilmiştir. KLN'ler literatürde bulunan mikroemülsiyon dilüsyon yöntemi metodu modifiye edilerek hazırlanmıştır. Ayrıca, yük taşıyıcı olarak katyonik lipidlerde formülasyona ilave edilmiştir. Hazırlanan KLN sistemlere yeşil floresans protein ekspresyon plazmiti yüklenmiş ve daha sonra, KLN ve KLN-DNA komplekslerinin karakterizasyonu yapılmıştır. Uygun partikül büyüklüğü ve zeta potansiyel değerine sahip kompleksler ile hücre kültürlerinde transfeksiyon yeteneginin saptanması için çalışmalar yapılmıştır.

Özet (Çeviri)

Naked DNA is rapidly eliminated from the circulation after intravenous administration, due to the digestion by nucleases and to the hepatic uptake clearance. Therefore, the development of optimized DNA delivery systems is necessary for its successful and conventional clinical use. Gene delivery systems include viral and non-viral vectors. Viral vectors are the most effective, but their application is limited by their immunogenicity and oncogenicity. Non-viral vectors, however, are safer, of low cost and more reproducible. The main limitation factor of non-viral systems is their low transfection ef ? ciency. Non-viral transfection systems are usually composed of cationic peptides, cationic polymers or cationic lipids, although the combination of some of them is also possible.Cationic lipids can be used to form DNA?lipid complexes by direct mixing the positively charged lipids at the physiological pH with the negatively charged DNA. However, their use in vivo is limited by the toxicity. Therefore, the development of more effective and safer systems useful for in vivo transfection is needed in order to develop medicines for gene therapy. SLN usually consists of physiologically well-tolerated ingredients already approved for pharmaceutical application in humans, can readily be produced in large scale, have good storage capabilities including freeze-drying, can be sterilised and show low cytotoxicity, when injected intravenously. In addition, the advantage of SLN is that the charge of the particles can be modulated via the composition, thus allowing binding of oppositely charged molecules via electrostatic interactions. SLN can be produced in nano-scale size (10?300 nm), wherefore the particles are suf ? ciently small to traverse the microvascular system and prevent macrophage uptake and are therefore particularly suitable for systemic delivery.SLN have not been studied as extensively as liposomes for gene therapy yet. Because of this reason, in this thesis we developed a novel SLN system, to complex it with DNA and evaluated the in ? uence of the formulation factors and the composition of DNA-SLN on transfection capacity for gene therapy. SLNs were prepared with modified microemulsion dilution method available in literature. In addition, cationic lipids were added to the formulation as charge carrier. Green Fluorescent protein expression plasmid was complexed with the prepared SLN systems. Then, SLN and DNA-SLN complexes were caracterized. Transfection study was carried out with complexes which have appropriate particle size and zeta potential value for determining transfection ability.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    216768

    Manyetik yüklü polimerik nanopartikül esaslı plazmid dna saflaştırma kitlerinin geliştirilmesi

    Development of plasmid dna purification kits based on magnetically loaded polymeric nanoparticles

    EMEL SEMİZ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2008

    BiyomühendislikHacettepe Üniversitesi

    Kimya Mühendisliği Bölümü

    PROF. DR. ERHAN BİŞKİN

  2. Tez No

    521383

    Design of chitosan-based carriers for biomedical engineering applications

    Biyomedikal mühendisliği uygulamaları için kitosan bazlı taşıyıcıların tasarımı

    UĞUR BOZÜYÜK

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2018

    BiyolojiKoç Üniversitesi

    Kimya ve Biyoloji Mühendisliği Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. SEDA KIZILEL

  3. Tez No

    473026

    Design of biodegradable hydrogels for the development of in vitro models for glioblastoma multiforme

    Biyobozunur hidrojellerin glioblastoma multiform için in vitro modellerin geliştirilmesi için tasarlanması

    PELİN ERKOÇ

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2017

    BiyomühendislikKoç Üniversitesi

    Biyomedikal Bilimler ve Mühendislik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. SEDA KIZILEL

    YRD. DOÇ. TUĞBA BAĞCI ÖNDER

  4. Tez No

    323748

    Evaluation of cationic polymer vectors for non-viral gene delivery

    Katyonik polimerlerin gen taşıyıcı sistemler olarak değerlendirilmesi

    HATİCE İMRAN GÜNGÖRDÜ

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2012

    Biyoteknolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Kimya Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GÜLAÇTI TOPÇU

  5. Tez No

    158215

    Plazmit DNA içeren oral partiküler gen terapötik sistem hazırlanması üzerinde çalışmalar

    Studies on preparation of microparticles containing plasmid DNA as oral gene therapeutic system

    ÜLKER GULİYEVA

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2004

    Eczacılık ve FarmakolojiHacettepe Üniversitesi

    Farmasötik Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. FİLİZ ÖNER

Geri Dön