Heterologous expression of an isoenzyme of Pycnoporus sanguineus laccase in yeast Saccharomyces cerevisiae
Pycnoporus sanguineus lakkaz izoenziminin Saccharomyces cerevisiae mayasında heterolog ekspresyonu
- Tez No: 291886
- Danışmanlar: PROF. DR. CANDAN TAMERLER
- Tez Türü: Yüksek Lisans
- Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
- Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
- Yıl: 2010
- Dil: İngilizce
- Üniversite: İstanbul Teknik Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: İleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 83
Özet
Beyaz küf mantarları lignini degrade edebilme özellikleri sayesinde global karbondöngüsünde önemli rol oynayan ökaryotik organizmalardır. Ligninolitik extraselülerenzimler olan lakkazlar (EC 1.10.3.2, p-difenol: dioksijen oksidoredüktazlar)moleküler oksijeni akseptör olarak kullanarak farklı aromatik bileşikleri oksideedebilirler.Lakkazların kağıt ve tekstil endüstrilerinden gelen atık suların detoksifikasyonu,biyoremediasyon, tekstil boyalarının ekspresyonu gibi farklı biyoteknolojikproseslerde birçok uygulaması bulunmaktadır. Günümüzde bu uygulamalardarekombinant teknoloji ile organizmalardan yüksek verimde lakkaz üretimi amacıylamayalar kullanılmaktadır. Ancak rekombinant yöntemlerle yüksek verimde enzimeldesi için yüksek maliyet, tüketici kabulu ve toksikoloji testleri gibi aşılmasıgereken bazı önemli engeller bulunmaktadır. Böylece, yönlendirilmiş evrimleüretilen enzimler endüstriyel uygulamalarda daha geniş olarak kullanılabilecektir.Yapılan çalışmada Pycnoporus sanguineus lakkaz-2 cDNA 'sının Saccharomycescerevisiae mayasında heterolog ekspresyonu gerçekleştirilmiştir. Bu amaçla, ~1600amino asitlik ve ~60 kDa moleküler ağırlığında olan matür bir lakkaz izoenziminikodlayan, tam boyda bir Lcc2 cDNA 'sı, bakırla indüklenebilen CUP1 promotörütaşıyan pSAL4 ekspresyon vektörüne klonlanmıştır. Rekombinant plazmid, lityumasetat protokolü kullanılarak S. cerevisiae W303-1A suşuna aktarılmış vetransformant koloniler 0.2 mM ABTS ve 0.6 mM CuSO4 içeren seçici besiyerindesubstratı okside edebilme özelliklerine göre seçilmiştir. Pozitif transformant kolonilerarasında yapılan tarama deneyleri ile en yüksek aktivite gösteren koloni seçilmiş vesonrasında optimum ekspresyon koşullarının eldesi için karbon kaynağına ve bakırkonsantrasyonlarına göre farklı besiyerilerinin etkileri tespit edilmiştir.
Özet (Çeviri)
White-rot fungi (WRF) are eukaryotic organisms which have an important role inglobal carbon cycle with the ability of lignin degradation. Laccases (EC 1.10.3.2, pdiphenol:dioxygen oxidoreductases) are ligninoliytic extracellular enzymes that mayoxidise different aromatic compounds using molecular oxygen as acceptor.Laccases have many applications in different biotechnological processes such asdetoxification of waste-waters of paper and textile industries, bioremediation, andexpression of textile dyes. Currently yeasts are useful in these applications for thepurpose of producing high-yielded laccases from the organisms with recombinantmethodology. But there are some important obstacles to obtain high-yielded enzymewith recombinant processes such as high cost, consumer acceptance and toxicologytests that should be overcome. Thus, enzymes which are produced with directedevolution will be used more extensively in industrial applications.In this study, heterologous expression of Pycnoporus sanguineus laccase-2 cDNA inyeast Saccharomyces cerevisiae was performed. For this aim, a full length laccase-2(Lcc2) cDNA, encodes for a mature laccase isoenzyme of ~1600 amino acid residueswith a predicted molecular weight of ~60 kDa, was cloned into the pSAL4expression vector which bear copper-inducible CUP1 promoter. Recombinantplasmid was transferred into the S. cerevisiae W303-1A strain via using lithiumacetate protocol and transformed colonies were selected in terms of the properties ofoxidizing the substrate in selective medium supplemented with 0.2 mM ABTS and0.6 mM CuSO4. The colony which shows the highest activity was selected withscreening assays between the positive transformant colonies, and then the effects ofdifferent media in terms of the carbon source and copper concentrations weredetermined for obtaining the optimum expression conditions.
Benzer Tezler
- Heterologous expression of two putative glutamate synthase subunits from Pyrococcus horikoshii
Pyrococcus horikoshii iki putatif glutamat sentaz küçük altünite homologlarının heterolog ekspresyonu
HANDE AKÇE
Yüksek Lisans
İngilizce
2006
Biyolojiİstanbul Teknik Üniversitesiİleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı
DOÇ.DR. BENAN DİNÇTÜRK BOTOFTE
- Expression of membrane-acting immunotoxins based on the bacillus thuringiensis Cyt2Aa1 toxin in Pichia pastoris
Başlık çevirisi yok
CEMAL GÜRKAN
- Characterization of an operon involved in mycobacterial cholesterol metabolism
Başlık çevirisi yok
NATHAN LACK
Doktora
İngilizce
2009
Eczacılık ve FarmakolojiUniversity of OxfordEczacılık Ana Bilim Dalı
PROF. EDITH SIM
- Komagataella phaffii'de ısı ile indüklenebilir bir heterolog protein ekspresyon sisteminin geliştirilmesi ve azurin proteininin üretimi
Improvement of a heat-inducible heterologous protein expression system and production of azurin protein in Komagataella phaffii
İBRAHİM DAĞCI
Yüksek Lisans
Türkçe
2024
BiyoteknolojiAtatürk ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. YAĞMUR ÜNVER
PROF. DR. AHMET MAVİ
- The regulation of the CXXC5 gene expression
CXXC5 gen ekspresyonunun düzenlenmesi
PELİN YAŞAR
Doktora
İngilizce
2021
BiyolojiOrta Doğu Teknik ÜniversitesiMoleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MESUT MUYAN