Geri Dön

Heterologous expression of an isoenzyme of Pycnoporus sanguineus laccase in yeast Saccharomyces cerevisiae

Pycnoporus sanguineus lakkaz izoenziminin Saccharomyces cerevisiae mayasında heterolog ekspresyonu

  1. Tez No: 291886
  2. Yazar: ESRA VARIŞLI
  3. Danışmanlar: PROF. DR. CANDAN TAMERLER
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoteknoloji, Biotechnology
  6. Anahtar Kelimeler: Belirtilmemiş.
  7. Yıl: 2010
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: İstanbul Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: İleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 83

Özet

Beyaz küf mantarları lignini degrade edebilme özellikleri sayesinde global karbondöngüsünde önemli rol oynayan ökaryotik organizmalardır. Ligninolitik extraselülerenzimler olan lakkazlar (EC 1.10.3.2, p-difenol: dioksijen oksidoredüktazlar)moleküler oksijeni akseptör olarak kullanarak farklı aromatik bileşikleri oksideedebilirler.Lakkazların kağıt ve tekstil endüstrilerinden gelen atık suların detoksifikasyonu,biyoremediasyon, tekstil boyalarının ekspresyonu gibi farklı biyoteknolojikproseslerde birçok uygulaması bulunmaktadır. Günümüzde bu uygulamalardarekombinant teknoloji ile organizmalardan yüksek verimde lakkaz üretimi amacıylamayalar kullanılmaktadır. Ancak rekombinant yöntemlerle yüksek verimde enzimeldesi için yüksek maliyet, tüketici kabulu ve toksikoloji testleri gibi aşılmasıgereken bazı önemli engeller bulunmaktadır. Böylece, yönlendirilmiş evrimleüretilen enzimler endüstriyel uygulamalarda daha geniş olarak kullanılabilecektir.Yapılan çalışmada Pycnoporus sanguineus lakkaz-2 cDNA 'sının Saccharomycescerevisiae mayasında heterolog ekspresyonu gerçekleştirilmiştir. Bu amaçla, ~1600amino asitlik ve ~60 kDa moleküler ağırlığında olan matür bir lakkaz izoenziminikodlayan, tam boyda bir Lcc2 cDNA 'sı, bakırla indüklenebilen CUP1 promotörütaşıyan pSAL4 ekspresyon vektörüne klonlanmıştır. Rekombinant plazmid, lityumasetat protokolü kullanılarak S. cerevisiae W303-1A suşuna aktarılmış vetransformant koloniler 0.2 mM ABTS ve 0.6 mM CuSO4 içeren seçici besiyerindesubstratı okside edebilme özelliklerine göre seçilmiştir. Pozitif transformant kolonilerarasında yapılan tarama deneyleri ile en yüksek aktivite gösteren koloni seçilmiş vesonrasında optimum ekspresyon koşullarının eldesi için karbon kaynağına ve bakırkonsantrasyonlarına göre farklı besiyerilerinin etkileri tespit edilmiştir.

Özet (Çeviri)

White-rot fungi (WRF) are eukaryotic organisms which have an important role inglobal carbon cycle with the ability of lignin degradation. Laccases (EC 1.10.3.2, pdiphenol:dioxygen oxidoreductases) are ligninoliytic extracellular enzymes that mayoxidise different aromatic compounds using molecular oxygen as acceptor.Laccases have many applications in different biotechnological processes such asdetoxification of waste-waters of paper and textile industries, bioremediation, andexpression of textile dyes. Currently yeasts are useful in these applications for thepurpose of producing high-yielded laccases from the organisms with recombinantmethodology. But there are some important obstacles to obtain high-yielded enzymewith recombinant processes such as high cost, consumer acceptance and toxicologytests that should be overcome. Thus, enzymes which are produced with directedevolution will be used more extensively in industrial applications.In this study, heterologous expression of Pycnoporus sanguineus laccase-2 cDNA inyeast Saccharomyces cerevisiae was performed. For this aim, a full length laccase-2(Lcc2) cDNA, encodes for a mature laccase isoenzyme of ~1600 amino acid residueswith a predicted molecular weight of ~60 kDa, was cloned into the pSAL4expression vector which bear copper-inducible CUP1 promoter. Recombinantplasmid was transferred into the S. cerevisiae W303-1A strain via using lithiumacetate protocol and transformed colonies were selected in terms of the properties ofoxidizing the substrate in selective medium supplemented with 0.2 mM ABTS and0.6 mM CuSO4. The colony which shows the highest activity was selected withscreening assays between the positive transformant colonies, and then the effects ofdifferent media in terms of the carbon source and copper concentrations weredetermined for obtaining the optimum expression conditions.

Benzer Tezler

  1. Heterologous expression of two putative glutamate synthase subunits from Pyrococcus horikoshii

    Pyrococcus horikoshii iki putatif glutamat sentaz küçük altünite homologlarının heterolog ekspresyonu

    HANDE AKÇE

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2006

    Biyolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    İleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı

    DOÇ.DR. BENAN DİNÇTÜRK BOTOFTE

  2. Characterization of an operon involved in mycobacterial cholesterol metabolism

    Başlık çevirisi yok

    NATHAN LACK

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2009

    Eczacılık ve FarmakolojiUniversity of Oxford

    Eczacılık Ana Bilim Dalı

    PROF. EDITH SIM

  3. Komagataella phaffii'de ısı ile indüklenebilir bir heterolog protein ekspresyon sisteminin geliştirilmesi ve azurin proteininin üretimi

    Improvement of a heat-inducible heterologous protein expression system and production of azurin protein in Komagataella phaffii

    İBRAHİM DAĞCI

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    BiyoteknolojiAtatürk Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. YAĞMUR ÜNVER

    PROF. DR. AHMET MAVİ

  4. The regulation of the CXXC5 gene expression

    CXXC5 gen ekspresyonunun düzenlenmesi

    PELİN YAŞAR

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2021

    BiyolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji ve Genetik Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. MESUT MUYAN