Geri Dön

Heterologous expression of two putative glutamate synthase subunits from Pyrococcus horikoshii

Pyrococcus horikoshii iki putatif glutamat sentaz küçük altünite homologlarının heterolog ekspresyonu

PDF İndir

  1. Tez No: 223154
  2. Yazar: HANDE AKÇE
  3. Danışmanlar: DOÇ.DR. BENAN DİNÇTÜRK BOTOFTE
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Glutamate Sentaz Küçük Altünitesi, Pyrococcus horikoshii, Glutamate synthase small subunit, Pyrococcus horikoshii
  7. Yıl: 2006
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: İstanbul Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: İleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 115

Özet

Glutamat sentaz (GOGAT), bakteri, alg ve bitkilerde amonyak asimilasyonun ilk basamaklarında görev alan ve glutaminin amido azotunun 2-okzoglutarata transamidasyonu sonucu iki molekül glutamat oluşumunu katalizleyen önemli bir enzimdir. Pyrococcus cinsinden olan P. horikoshii, P. furiosus ve P. abyssi genomlarında, glutamat sentazın küçük altünitesine benzerlik gösteren iki tane homolog bölge vardır. Bununla beraber P. horikoshii ve P. abyssi'nin genomlarında bu enzimin glutamat oluşumundan sorumlu olan büyük altünitesini kodlayan bir bölge bulunmamaktadır. İki tane putatif glutamat sentaz küçük altünite homoloğunun varlığı, gen duplikasyonu olasılığını düşündürmektedir. Glutamat sentazın evriminin, lateral gen transferi ve iki altünitenin yüksek yapılı canlılarda birleşmesi olaylarını kapsaması muhtemeldir. Bunlar ışığında bu homolog bölgelerin, elektron transfer protein domainlerinin arkelerde bulunan erken formları olabilecekleri ve daha sonradan evrim sürecinde elektron transfer enzimlerin yapısına katılmış olabilecekleri düşünülebilir. Bu çalışmada, bu hipotezin gerçekliğini araştırmak için, Pyrococcus horikoshii' nin iki putatif glutamat sentaz küçük altünitesi homoloğu, PH0876 ve PH1873, klonlanmış ve pET serisi ekspresyon vektörleri kullanılarak Escherichia coli de protein ekpresyonu gerçekleştirilmiltir ve elde edilen sonuç Western Blot analizi ile desteklenmiştir. Üretilen proteinler, HisTag füzyon proteini olmalarından faydalanılarak saflaştırılmıştır. Buna ek olarak, aktivite analizlerinde kontrol amaçlı kullanılacak olan Medicago sativa ya ait NADH-bağımlı glumat sentazın, küçük altünite ile benzerlik gösteren bölgesi de ekpresyon vektörüne klonlanmış ve protein ekpresyonu gerçekleştirilmiştir

Özet (Çeviri)

Glutamate synthase (often abbreviated as GOGAT) is a key enzyme in the early stages of the assimilation of ammonia in bacteria, algae and plants, catalyzing the reductive transamidation of the amido nitrogen from glutamine to 2-oxoglutarate to form two molecules of glutamate. The genomes of three Pyrococcus species, P. horikoshii, P. furiosus and P. abyssi, harbour two open reading frames which show homology with the small subunit of glutumate synthase (ß subunit of GOGAT). There are no open reading frames which may be coding for a large subunit which is responsible for the glutamate formation in the genomes of P. horikoshii and P. abyssi. The presence of two putative GOGAT small subunits raise the possibility of gene duplication. Evolution of glutamate synthase might have occured via lateral gene transfer via the combination of two subunits in the higher organisms. It seems likely that these open reading frames are the early forms of an electron transfer domain in archaea which may have later contributed to many electron transfer enzymes. To further analyze this hypothesis, two open reading frames PH0876 and PH1873, belonging to P. horikoshii, have been cloned and successfully expressed in E. coli and the presence of the proteins have been confirmed with Western Blot analysis. In addition, these two proteins have been obtained in the soluble fraction of the cell and purified with the aid of His-Tag present upstream the coding region. The ß subunit-like C terminal region of NADH-dependent glutamate synthase from Medicago sativa has also been cloned, expressed in E. coli to be used as a control in activity analysis. Activity analyses are on progress to further characterize the proteins.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    151296

    Heterologues expression of two putative glutamate synthase subunits from Methanocaldococcus jannaschii

    Methanocaldococcus jannaschii'nin putatif iki glutamat sentaz alt ünitesinin heterolog ekspresyonu

    VOLKAN DEMİR

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2004

    Biyoteknolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. BENAN DİNÇTÜRK

  2. Tez No

    315382

    Cloning of The Laccase cDNAs from Pycnoporus sanguineus MUCL 38531, Expression in Pichia pastoris and Characterization of Recombinant Laccases

    Pycnoporus sanguineus?tan Lakkaz cDNA?larının Klonlanması, Pichia pastoris?te Ekspresyonu ve Rekombinant Lakkazların Karakterizasyonu

    GÜNSELİ KURT GÜR

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2010

    Biyoteknolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    İleri Teknolojiler Ana Bilim Dalı

    DOÇ. DR. AYTEN YAZGAN KARATAŞ

  3. Tez No

    119477

    Cloning, characterization and heterologons expression of the aspartokinase and aspartate semialdehyde dehydrogenase genes from the cephamycin C producer streptomyces clavuligerus

    Sefamisin C üreticisi streptomyces davuligerus'un aspartokinaz ve aspartat semialdehid dehidrojenaz genlerinin klonlanması, karakterizasyonu ve heterolog ekspresyonu

    SEDEF TUNCA

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2002

    BiyoteknolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. GÜLAY ÖZCENGİZ

    PROF. DR. JACQUELİNE PİRET

  4. Tez No

    446611

    Substrate characterization of putative ancestral xyloglucan endotransglycosylase/hydrolases

    Atasal ksıloglukan endotransglikozilaz/hidrolazların substrat karakterizasyonu

    DİLARA TÜZÜN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2016

    Bilim ve TeknolojiYeditepe Üniversitesi

    Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    YRD. DOÇ. DR. ANDREW JOHN HARVEY

  5. Tez No

    389326

    Construction of expression vectors for the heterologous production of kpkt killer toxin in Saccharomyces cerevisiae and Pichia pastoris cells

    Kpkt katil toksininin Saccharomyces cerevisiae ve Pichia pastoris hücrelerinde heterolog üretimi için ekspresyon vektörlerinin oluşturulması

    MURAT ÜSTÜN

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2015

    Biyoteknolojiİstanbul Teknik Üniversitesi

    Moleküler Biyoloji-Genetik ve Biyoteknoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ZEYNEP PETEK ÇAKAR

Geri Dön