Geri Dön

Formalin ve ksilol yerine kullanılan solüsyonların doku takibine etkisi

The effect of the alternatıve solutıons whıch are produced to be used ın place of formalın and xylene on tıssue processıng

PDF İndir

  1. Tez No: 297490
  2. Yazar: ILGIN KARAMAN
  3. Danışmanlar: PROF. DR. KUTSAL YÖRÜKOĞLU
  4. Tez Türü: Tıpta Uzmanlık
  5. Konular: Patoloji, Pathology
  6. Anahtar Kelimeler: Doku fiksasyonu, formalin, DNA, RNA, patoloji, moleküler, Tissue fixation, formalin, DNA, RNA, pathology, molecular
  7. Yıl: 2011
  8. Dil: Türkçe
  9. Üniversite: Dokuz Eylül Üniversitesi
  10. Enstitü: Tıp Fakültesi
  11. Ana Bilim Dalı: Tıbbi Patoloji Ana Bilim Dalı
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: 100

Özet

Amaç: Formalin ve ksilolün önemli toksik, allerjen ve karsinojen etkileri vardır. Günümüzde, bu kimyasalların yerine geçebilecek daha az toksik maddeler piyasaya sürülmüştür. Bu maddelerin, histokimyasal ve immünohistokimyasal boyamalara; in situ hibridizasyon, polimeraz zincir reaksiyonu gibi incelemelere olumsuz etki etmemesi beklenir. Çalışmamızda, Türkiye'de ticari olarak satılan alternatif kimyasalların etkilerinin araştırılması amaçlanmıştır.Gereç ve Yöntem: 5 farklı fiksatif (Formalin, Glyo-Fixx ? , FineFIX ? , Cell block ? ve Greenfix ? ) ve 4 farklı şeffaflandırıcı (Ksilen, Sub-X ? , Bio Clear ? , Shandon Xylene Substitute ? ) kullanılarak 13 farklı doku takibi kurgulanıp, 13 farklı dokuya uygulandı. Hematoksilen-Eozin boyalı kesitler histomorfolojik düzeyde niteliksel olarak karşılaştırıldı. Hazırlanan doku mikrodizini kesitlerine histokimyasal ve immünohistokimyasal boyamalar uygulandı. Histokimyasal boyamalar niteliksel, immünohistokimyasal boyamalar ise bilgisayar programında (3D Histech NuclearQuant ? , MembraneQuant ? ) niceliksel olarak karşılaştırıldı. Kromojenik in situ hibridizasyon uygulandı ve sinyal kalitesi değerlendirildi. DNA ve RNA ekstraksiyonu uygulanarak ve DNA niteliği polimeraz zincir reaksiyonu ile değerlendirilerek doku takipleri moleküler düzeyde kıyaslandı.Bulgular: Tüm doku takiplerinde kesit kalitesinin iyi olduğu gözlendi. Histokimyasal boyama sonuçları, alternatif solüsyonların tümünün bu uygulamalar açısından uyumlu olduğunu gösterdi. İmmünohistokimyasal boyamalarda etken maddesi glyoxal olan fiksatiflerle olumsuz sonuçlar elde edildi. Kromojenik in situ hibridizasyon ile tüm doku örneklerinde sinyalin okunaklığı, zeminin kontrastı benzer ve iyi özellikte bulundu. Ayrıca formalin içermeyen takiplerin moleküler korunma açısından, formalin içerenlere göre üstün olduğu görüldü.Sonuç: Tüm parametreler birlikte değerlendirildiğinde, Glyo-Fixx ? , Cell block ? ve FineFIX ? kullanılan doku takiplerinin, biraz daha üstün oldukları dikkati çekmektedir. Daha az toksik, daha az irritan olmaları, iyi morfolojik sonuç vermeleri, histokimyasal boyamalar ile uyumlu olmaları ve moleküler koruma açısından formaline üstün olmaları nedeni ile alternatif fiksatifler, rutin patoloji ve araştırmalarda formalinin yerini almaya adaydır. Alternatif fiksatif arayışının geri planda bıraktığı alternatif şeffaflandırıcıların da ksilenin yerini almaya güçlü adaylar olduğu görülmüştür.

Özet (Çeviri)

Aim: Formaldehyde and xylene are main solutions of tissue processing. But these chemical substances have important toxic, allergen and carcinogenic effects on human body. Nowadays, nontoxic or lesser toxic new commercial solutions have been produced to be used in place of formaldehyde and xylene. It is expected to be compatible with histochemical and immunohistochemical stainings, also with in situ hibridisation and polymerase chain reaction from these new alternative solutions. In this study, we aimed to assess the impact of new alternative solutions on methods mentioned above.Methods: Thirteen different tissue processings were designed and performed on 13 different tissues by using five different fixatives (Formaldehyde, Glyo-Fixx ? , FineFIX ? , Cell block ? ve Greenfix ? ) and four different clearing agents (Xylene, Sub-X ? , Bio Clear ? , Shandon Xylene Substitute ? ). Haematoxylin&Eosine stained sections were compaired by using qualitative histomorfological criterions. Histochemical and immunohistochemical stains were performed by using tissue microarrays. Histochemical staining results were compaired by using qualitative criterions while immunohistochemical staining results were compaired with quantitative datas which were had by using a computer programme (3D Histech NuclearQuant ? , MembraneQuant ? ). Tissue sections were tested for the availability of chromogenic in situ hibridisation, by using a Her-2/neu protocol. Also different tissue processings were compaired at molecular level by performing DNA and RNA extraction, and DNA quality by polymerase chain reaction.Results: The quality of sections was well for all tissue processings. Histochemical staining results showed that all alternative solutions which were used are suitable for this application. Immunohistochemical staining results showed that alternative solutions which contain glyoxal as active agent need optimization fort his application. The clearance of signals with chromogenic in situ hibridisation were nearly same and well for all tissue samples. Furthermore, tissue processes which do not contain formaldehyde were found to be superior compaired with ones which contain formalin as fixative solution on molecular preservation.Conclusion: We have demonstrated that formaldehyde-free fixatives have potential in routine pathology and research to replace formaldehyde in histomorphology and protein preservation. When all parameters were evaluated together it was found that the tissue processes which contain Glyo-Fixx ? , Cell block ? and FineFIX ? as fixative solution were superior compared the others. We have also demonstrated that alternative clearing agents which stayed behind the scenes because of the search of ideal fixative have the potantial in routine pathology to replace xylene.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    118262

    Mikrodalga ısınımının karaciğer ve böbrek dokularının preparasyonunda kullanımı

    Use of microwave irradiation for tissue preparation of rat liver and kidney

    ŞEHİME G. TEMEL

    Doktora

    Türkçe

    Türkçe

    2002

    MorfolojiUludağ Üniversitesi

    Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı

    DOÇ.DR. SEMİHA NOYAN

  2. Tez No

    193662

    Ratlarda Ksilol ve Formalin inhalasyonunun testis dokusu üzerine etkisi

    The effect of Xylol and Formaline inhalation to testicular tissue in rats

    ÖZAY GÜLEŞ

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2007

    Veteriner HekimliğiAdnan Menderes Üniversitesi

    Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF.DR. ÜLKER EREN

  3. Tez No

    71432

    Malaryalı gebelerde plasenta ince yapısı

    Başlık çevirisi yok

    SAİT POLAT

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    1986

    Kadın Hastalıkları ve DoğumÇukurova Üniversitesi

    Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı

  4. Tez No

    905942

    Dapagliflozin ve trimetazidin'in tip 1 diyabetli sıçanlarda doksorubusine bağlı kardiyak disfonksyon üzerine endoplazmik retikulum stresi yoluyla kardiyoprotektif etkileri

    Cardioprotective effects of dapagliflozin and trimetazidine on doxorubusin-induced cardiac dysfunction in rats with type 1 diabetes through endoplasmic reticulum stress

    MUHAMMED MÜRSEL ÖĞÜTVEREN

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2024

    KardiyolojiSağlık Bakanlığı

    Kardiyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. ÖMER ŞATIROĞLU

  5. Tez No

    71119

    Eter anestezisi uygulanan Rat'larda fiksatif, cinsiyet ve beyin yarım küresinin, beyin dokularındaki mast hücre dağılımına etkileri

    Effect of the fixative, sex, and brain hemisphere on the brain mast cell numbers of the rats given ether anaesthesia

    HALİT DEMİRALAY

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    1994

    MorfolojiSelçuk Üniversitesi

    Histoloji ve Embriyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. HASAN CÜCE

Geri Dön