Geri Dön

Immune responses against the recombinant FimX and putative peptidyl-prolyl cis-trans isomerase from Bordetella pertussis

Bordetella pertussis?e ait rekombinant FimX ve varsayımsal peptidil-prolil sis-trans izomeraza karşı bağışıklık yanıtları

PDF İndir

  1. Tez No: 305055
  2. Yazar: ÇİĞDEM YILMAZ
  3. Danışmanlar: PROF. DR. GÜLAY ÖZCENGİZ
  4. Tez Türü: Yüksek Lisans
  5. Konular: Biyoloji, Biology
  6. Anahtar Kelimeler: Bordetella pertussis, Boğmaca, Bordetella pertussis, Whooping cough
  7. Yıl: 2011
  8. Dil: İngilizce
  9. Üniversite: Orta Doğu Teknik Üniversitesi
  10. Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
  11. Ana Bilim Dalı: Biyoloji Bölümü
  12. Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
  13. Sayfa Sayısı: Belirtilmemiş.

Özet

Boğmaca (pertussis), Bordetella pertussis bakterisinin neden olduğu oldukça bulaşıcı bir solunum yolu enfeksiyonudur. Hastalık, yeni doğanların yanı sıra, gençler ve erişkinler arasında da yaygınlaşmaya başlamıştır. Etkin pertussis aşılarının kullanımı hastalığın görülme sıklığını azaltmasına rağmen, B. pertussis suşlarının populasyondaki dolaşımı ortadan kaldırılamamıştır. Temel koruyucu antijenlerdeki antijenik değişimlerin ve B. pertussis suşlarının populasyondaki dolaşımının devam etmesinin şu an kullanılan aşıların zamanla etkinliklerini yitirmesiyle sonuçlanacağı düşünülmektedir. Bu nedenle, koruyuculuğa sahip korunmuş proteinler içeren daha etkin aşıların geliştirilmesi boğmaca hastalığına karşı korunmada uygun bir stratejidir.Bu çalışmada, grubumuz tarafından B. pertussis'de gerçekleştirilen immunoproteom analizinde immunojenik olduğu ilk kez gösterilen varsayımsal peptidil-prolil sis-trans izomeraza proteinine ve yerel bir suj olan Saadet suşunda fazla üretildiği yine grubumuzca tespit edilen FimX'e karşı farelerdeki bağışık yanıtlar araştırılmıştır. FimX'i ve varsayımsal peptidil-prolil sis-trans izomerazı kodlayan genler PCR ile çoğaltılmış ve pGEM®-T Easy vektörüne klonlanmıştır. Genler daha sonra pET-28a (+) vektörüne yerleştirilmiştir ve Escherichia coli BL21(DE3) hücrelerinde gen ifadeleri sağlanmıştır. Rekombinant proteinler His-tag afinite kromatografi yöntemiyle saflaştırılmıştır ve diyaliz edilmişlerdir. Western blot analizlerinden sonra, BALB/c fareleri (16-18 gr), 0 ve 21. günlerde, 20 µg ve 80 µg recombinant FimX ve 80 µg varsayımsal peptidil-prolil sis-trans izomeraz ile aşılanmıştır. Fareler burun içinden 2.5 x 109 canlı B. pertussis Saadet hücreleri ile enfekte edilmiştir. İkinci aşı uygulamasından ve enfeksiyondan önce, ELISA tekniği ile seruma özel IgG seviyesi ölçülmüştür. ELISA sonuçlarına göre, 20 µg ve 80 µg rekombinant FimX ile aşılanan farelerdeki IgG seviyesi, birinci ve ikinci aşılamalarda, kontrol gruplarındaki IgG seviyesinden önemli ölçüde yüksek bulunmuştur (p<0.01). Ancak, 80 µg rekombinant varsayımsal peptidil-prolil sis-trans izomeraz aşılaması sadece ikinci aşı uygulamasında IgG seviyesinde (p<0.05) önemli ölçüde artış sağlamıştır. 2., 5. ve 8. günlerde farelerin akciğerleri alınmıştır ve bakteri kolonizasyonu incelenmiştir. 20 µg ve 80 µg rekombinant FimX ve 160 µg rekombinant varsayımsal peptidil-prolil sis-trans izomeraz ile aşılanan hayvanların akciğerlerinde bakteri kolonizasyonunda kontrol gruplarına göre azalma görülmemiştir. Fareler enfekte edildikten ve 20 µg ve 80 µg rekombinant FimX ile ikinci kez aşılandıktan (30. gün) sonra, farelerin dalakları alınarak dalak hücre kültürü oluşturulmuştur. Hücreler rekombinant protein ile uyarıldıktan sonra supernatantlar toplanmıştır ve sitokin ELISA ile IFN-? seviyesi ölçülmüştür. Kontrol ve aşılı fareler arasında IFN-? üretimi açısından önemli ölçüde bir farklılık görülmemiştir.

Özet (Çeviri)

Whooping cough (pertussis) is a highly contagious respiratory infection caused by Bordetella pertussis. It becomes widespread among adolescent and adults as well as infants. Although availability of effective pertussis vaccines seems to decrease the incidence of the disease, B. pertussis circulation in population has not been eliminated. It is thought that the antigenic drifts in major protective antigens and continued circulation of B. pertussis strains will result in gradual loss of the efficacy of the current pertussis vaccines. Therefore, development of more effective acellular pertussis vaccines with conserved protective proteins is a convenient strategy to provide a better protection against whooping cough.In this study, immune responses against putative peptidyl-prolyl cis-trans isomerase (PPIase) which was shown to be immunogenic in B. pertussis for the first time by our immunoproteome group and FimX whose expression was found higher in our local Saadet strain were determined in mice. The genes encoding FimX and putative PPIase were amplified by PCR, cloned into pGEM®-T Easy vector and sequenced. The genes were then introduced into pET-28a (+) vector and they were expressed in Escherichia coli BL21(DE3) cells. The recombinant proteins were purified by His-tag affinity chromatography and dialyzed. After Western blot analyses, 20 µg and 80 µg recombinant FimX and 80 µg recombinant putative PPIase were used to immunize BALB/c mice (16-18 g) at day 0 and 21. The mice were challenged intranasally with 2.5 x 109 live B. pertussis Saadet cells. Before second immunization and challenge, the sera were collected to carry out ELISA for measurement of serum-specific IgG levels. According to ELISA results, IgG levels in the mice immunized with 20 µg and 80 µg recombinant FimX were found significantly higher than in control groups at both first and second vaccinations (p<0.01). On the other hand, immunization with 160 µg recombinant putative PPIase provided a significant increase in IgG level (p<0.05) only at second vaccination. The lungs of the mice were removed at day 2, 5, 8 after challenge and bacterial colonization was determined. No significant decrease in bacterial colonization was observed in the lungs of the mice immunized with 20 µg and 80 µg recombinant FimX and 80 µg recombinant putative PPIase with respect to control groups. After respiratory challenge and second immunization (at day 30) with 20 µg and 80 µg recombinant FimX, the spleens of the mice were removed and a spleen cell culture was obtained. Supernatants were collected after induction of the cells with the recombinant protein and cytokine ELISA was carried out to measure IFN-? level. No significant difference was observed between control and vaccinated mice in terms of IFN-? production.

Benzer Tezler

  1. Tez No

    304961

    Assessment of immune protective capacity of the recombinant iron superoxide dismutase (FeSOD) from bordetella pertussis

    Bordetella pertussis?e ait rekombinant demir süperoksit dismutaz (FeSOD) proteininin immün koruyucu kapasitesinin değerlendirilmesi

    AYCAN APAK

    Yüksek Lisans

    İngilizce

    İngilizce

    2011

    BiyolojiOrta Doğu Teknik Üniversitesi

    Biyoloji Bölümü

    PROF. DR. GÜLAY ÖZCENGİZ

  2. Tez No

    831145

    Primer immün yetersizliklerde COVİD-19 hastalığı ya da COViD-19 aşılarının ortaya çıkardığı immün yanıtların araştırılması

    Investigation of the immune responses caused by COVİD-19 disease or COVİD-19 vaccines in primary immune deficiencies

    ALPER BULUTOĞLU

    Yüksek Lisans

    Türkçe

    Türkçe

    2023

    Allerji ve İmmünolojiMarmara Üniversitesi

    Çocuk Sağlığı ve Hastalıkları Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. AHMET OĞUZHAN ÖZEN

  3. Tez No

    248016

    Hepatit C Virusu'na ait rekombinant NS3 proteininin saflaştırılarak oluşturduğu IFN-?, IL-10 ve IL-4 yanıtlarının araştırılması

    A study on the IFN-?, IL-10 and IL-4 responses obtained by purifying the recombinant NS3 protein of Hepatitis C Virus

    M.HAKAN TAŞKIN

    Tıpta Uzmanlık

    Türkçe

    Türkçe

    2010

    MikrobiyolojiDokuz Eylül Üniversitesi

    Mikrobiyoloji ve Klinik Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. Y. HAKAN ABACIOĞLU

    DOÇ. DR. M. ALİ ÖKTEM

  4. Tez No

    835549

    Development and efficacy assessment of two recombinant adenovirus-based vaccine candidates against crimean-congo hemorrhagic fever

    Kırım-kongo kanamalı ateşine karşı iki rekombinant adenovirüs tabanlı aşı adayının geliştirilmesi ve etkinliklerinin değerlendirilmesi

    SHAIKH TERKIS ISLAM PAVEL

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2023

    MikrobiyolojiErciyes Üniversitesi

    Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. AYKUT ÖZDARENDELİ

  5. Tez No

    897321

    Development of experimental vaccine by producing rotavirus VP6 protein in prokaryotic system

    Rotavirus VP6 proteininin prokaryotik sistemde üretilerek deneysel aşı geliştirilmesi

    BÜŞRA KAPLAN

    Doktora

    İngilizce

    İngilizce

    2024

    MikrobiyolojiErciyes Üniversitesi

    Tıbbi Mikrobiyoloji Ana Bilim Dalı

    PROF. DR. AYKUT ÖZDARENDELİ

Geri Dön