Bazı fenolik doğal bileşiklerin antioksidan kapasitelerinin belirlenmesi ve insan karbonik anhidraz izoenzimleri(hCA-I ve hCA-II üzerine inhibisyon etkilerinin incelenmesi
Determinaton of antioxidant capacity of some fenolic naturel compounds and investigation of their inhibiton effects on human carbonic anhydrase isoenzymes (hCA-I and hCA-II)
- Tez No: 322526
- Danışmanlar: PROF. DR. İLHAMİ GÜLÇİN
- Tez Türü: Doktora
- Konular: Biyokimya, Biochemistry
- Anahtar Kelimeler: Antioksidan aktivite, karbonik anhidraz, fenolik doğal bileşik, hCA-I, hCA-II, enzim inhibisyonu, Antioxidant activity, Carbonic anhydrase, phenolic naturel compound, hCA-I, hCA-II, enzyme inhibition
- Yıl: 2012
- Dil: Türkçe
- Üniversite: Atatürk Üniversitesi
- Enstitü: Fen Bilimleri Enstitüsü
- Ana Bilim Dalı: Kimya Ana Bilim Dalı
- Bilim Dalı: Belirtilmemiş.
- Sayfa Sayısı: 190
Özet
Bu çalışmada apomorfin, timol ve humik asitin fenolik doğal bileşiklerin muhtemel antioksidan ve radikal giderme aktiviteleri değerlendirildi. Ayrıca bu fenolik doğal bileşiklerin insan eritrosit karbonik anhidraz izoenzimi I ve II (hCA-I ve hCA-II) üzerine inhibisyon etkileri de incelendi.Fenolik doğal bileşiklerin antioksidan kapasitelerini değerlendirmek için ferrik tiyosiyanat metoduna göre total antioksidan aktivitesi, 2,2´-azino-bis(3-etilbenztiyoazolin-6-sülfonik asit) radikal (ABTS?+) giderme aktivitesi, 1,1-difenil-2-pikril-hidrazil serbest radikal (DPPH·) giderme aktivitesi, N,N-dimetil-p-fenilendiamin radikal (DMPD?+) giderme aktivitesi, süperoksit anyon radikali (O2?-) giderme aktivitesi, potasyum ferriksiyanit indirgeme metodu ile indirgeme kuvveti, Kuprak metodu ile kuprik iyonları (Cu2+) indirgeme kapasitesi, FRAP metoduna göre indirgeme kapasitesi ve ferröz iyonları (Fe2+) şelatlama aktivitesi çalışıldı. Ayrıca BHA, BHT, ?-tokoferol ve troloks gibi referans antioksidanlar kullanıldı. Kullanılan fenolik bileşikler bütün metotlarda kuvvetli antioksidan ve radikal giderme aktivitesi sergilediler.Ayrıca çalışmanın ikinci kısmında ise fenolik doğal bileşiklerin insan eritrosit karbonik anhidraz izoenzimi I ve II (hCA-I ve hCA-II) üzerine in vitro inhibisyon etkileri araştırıldı. Öncelikle hCA-I ve hCA-II izoenzimleri sırasıyla Sepharose-4B-L-tirozin afinite kolon kromatografisi ile %59,4, %65,9 verimle 194,5 ve 832,4 kat saflaştırıldı. Enzim saflığını belirlemek için, sodyum dodesil sülfat-poliakrilamit jel elektroforezi (SDS-PAGE) yapıldı ve tek bant gözlendi. Bundan sonra I50 değerlerini bulmak için, hidrataz aktivitesi kullanılarak fenolik doğal bileşiklerin hCA-I ve hCA-II üzerine inhibisyon etkileri araştırıldı. Ayrıca fenolik doğal bileşiklerin hCA-I ve hCA-II üzerine inhibisyon etkileri 4-nitrofenil asetat substratı ile esteraz aktivite metodu kullanılarak da araştırıldı. Apomorfin, timol ve humik asitin hCA-I için 20,5-457,0 ?M ve hCA-II için de 61,0?584,0 ?M arasında Ki değerlerine sahip oldukları gözlendi. Hümik asit hCA-I için yarışmalı inhibisyon gösterirken, hCA-II için yarışmasız inhibisyon gösterdi. Diğer fenolik bileşikler apomorfin ve timol (hCA-I, II için) 4-nitrofenil asetat substratı ile yarışmasız inhibisyon gösterdiler. Çalışmada kullanılan fenolik doğal bileşikler klinik olarak kullanılan süfanilamit ve asetazolamide benzer inhibisyon etkisi gösterdiler. Bu inhibitörler antioksidan özelliklerinden dolayı hCA-I ve hCA-II için daha güvenli olarak kullanılabilir.
Özet (Çeviri)
In the present study, some phenolic naturel compounds such as apomorphine, thymol and humic acid were evaluated for possible antioxidant and radical scavenging activity. Also the inhibitory effects of these phenolic compounds were determined on human erythrocyte izoenzymes I and II (hCA-I and hCA-II).In order to evaluate antioxidant capacity of phenolic compounds, different in vitro methods such as total antioxidant activity by ferric thiocyanate method, 2,2´-azino-bis(3-ethylbenzthiazoline-6-sulfonic acid) radical (ABTS?+) scavenging activity, 1,1-diphenyl-2-picryl-hydrazyl free radical (DPPH·) scavenging activity, N,N-dimethyl-p-phenylenediamine radical (DMPD?+) scavenging activity, superoxide anion radical (O2?-) scavenging activity, reducing power by potassium ferricyanide reduction method, cupric ion (Cu2+) reduction capacity by Cuprac method, reducing capacity by FRAP method and ferrous ions (Fe2+) chelating activities were performed separately. Also, BHA, BHT, ?-tocopherol and trolox, a water-soluble analogue of ?-Tocopherol, were used as the reference antioxidant compounds. The phenolic compounds exhibited powerfull antioxidant and radical scavenging effects in used all methods.Also in the second part of this study, the in vitro inhibition effects of these phenolic compounds on erythrocyte carbonic anhydrase isoenzymes (hCA-I and hCA-II) from human blood were investigated. Firstly, hCA-I and hCA-II were purified by Sepharose-4B-L-tyrosine affinity chromatography column with a yield of 59.4, 65.9%, 194.5 and 832.4-fold purification of each isoenzyme, respectively. For determination of enzyme purity, SDS-PAGE was performed and single band was observed. For determination of I50 values of these phenolic compounds were investigated by using hidratase assay.The inhibition of hCA-I and hCA-II, with a series of phenolic compounds was investigated by using the esterase assay with 4-nitrophenyl acetate as substrate. These phenolic compounds showed Ki values in the range of 20.5-457.0 ?M for hCA I and of 61.0-584.0 ?M against hCA-II. Humic acid exhibited competitive inhibitory effect for hCA-I, but for hCA II, exhibited non-competitive inhibitory effect. Apomorphine and thymol were found as non-competitive inhibitors with 4-nitrophenylacetate as substrate for hCA I and hCA II. These phenolic compounds demonstrated effective hCA-I and hCA II inhibition in the same range as the clinically used sulfonamide and acetazolamide and can be used safer for hCA I and hCA II izoenzymes due to their antioxidant properties.
Benzer Tezler
- Bazı doğal bileşiklerin antioksidan kapasitelerinin belirlenmesi, AChE ve BChE enzimleri ile hCA I ve hCA II izoenzimleri üzerine inhibisyon etkilerinin araştırılması
Determination of antioxidant capacity of some natural compounds and investigation of their inhibition effects on AChE and BChE enzymes and hCA I and hCA II isoenzymes
LEYLA POLAT KÖSE
- Adenium obesum ve Tamarix arabica ekstraktlarının antioksidan kapasıtelerı ile α-amilaz, α-glukozidaz, hCA I-II ve AChE enzim aktiviteleri üzerine etkilerinin belirlenmesi
Determination of the antioxidant capacities of extracts of Adenium obesum and Tamarix arabica and their effects on the activities of α-amylase, α- glucosidase, hCA I-II and AChE enzymes
AFNAN ALI ALSHEPY
Yüksek Lisans
Türkçe
2023
BiyokimyaKarabük ÜniversitesiGıda Toksikolojisi Ana Bilim Dalı
PROF. DR. MÜSLÜM KUZU
- Characterization of Turkish bee products such as propolis, pollen and royal jelly in terms of bioactive components, health effects and encapsulation
Türkiye'ye ait arı sütü, propolis ve polen gibi arı ürünlerinin biyoaktif bileşenler, sağlık etkileri ve enkapsülasyonu açısından karakterizasyonu
ÜMİT ALTUNTAŞ
Doktora
İngilizce
2023
Gıda Mühendisliğiİstanbul Teknik ÜniversitesiGıda Mühendisliği Ana Bilim Dalı
PROF. DR. BERAAT ÖZÇELİK
- Endemik Salvia siirtica türünün sekonder metabolitlerinin izolasyonu ve biyolojik aktivitelerinin belirlenmesi
Isolation of secondary metabolites of the endemic Salvia siirtica species and determination of the biological activities
HİLAL SARUHAN FİDAN
- Tokat çevresinde geleneksel tedavi amacıyla kullanılan bazı bitki karışımlarının optimum antioksidan kapasitelerinin belirlenmesi
Determination of optimum antioxidant capacity of some plant mixture used as a folk medicine in Tokat province
OSMAN ATIF ÖZMEN
Yüksek Lisans
Türkçe
2010
KimyaGaziosmanpaşa ÜniversitesiKimya Ana Bilim Dalı
DOÇ. DR. MAHFUZ ELMASTAŞ
DOÇ. DR. RAMAZAN ERENLER